Protéine HBx du Virus de l'Hépatite B (impact sur la prolifération et la carcinogenèse hépatique)

Avec près de 350 millions de personnes chroniquement infectées, et malgré l existence de vaccins efficaces, le virus de l Hépatite B (VHB) reste un problème majeur de santé publique. Parmi les protéines virales, la protéine régulatrice HBx possèdent des activités qui pourraient être particulièrement impliquées dans le développement de CHC. Au cours de ce travail, nous nous sommes intéressés aux différences biologiques entre la protéine HBx issue d une région non tumorale (HBx-NT) et la protéine HBx issue d une région tumorale (HBx-T) d un même patient. En particulier, nous nous sommes intéressés à la régénération hépatique après hépatectomie partielle et à la carcinogenèse hépatique dans un modèle murin transgénique. Nous avons démontré l absence d impact de la forme tronquée de la protéine HBx sur la régénération hépatique. Nous avons démontré que la protéine HBx entière avait la capacité d activer la sécrétion d IL-6 dans la phase d initiation de la régénération hépatique, conduisant à l hyperactivation de STAT3, l accumulation de SOCS3 et la diminution de phosphorylation de ERK. Au final, la protéine HBx entière induit un retard de régénération hépatique. Nous avons démontré une cinétique d apparition de tumeurs plus rapide chez les souris HBx-T que chez les souris HBx-NT après injection d un carcinogène chimique. Nous avons aussi pu observer que les deux formes HBx-T et HBx-NT sensibilisaient les hépatocytes à l apoptose, au cours d un dommage hépatique aigue, et que cette sensibilisation à l apoptose pouvait en partie rendre compte de l effet co-carcinogène observé chez les souris HBx-T et HBx-NT. L ensemble de mes résultats a permis de mieux comprendre les mécanismes par lesquels la protéine HBx participe au développement de CHC.Hepatitis B virus (HBV) is a worldwide health issue, as it is estimated that 350 millions people are chronically infected. Among the viral proteins, HBx is thought to be involved in hepatocellular carcinoma (HCC) development. In this work, we were interested in biological differences between HBx sequence from non tumoral region (HBx-NT) compared to HBx from tumoral region (HBx-T) from a single patient. In particular, we studied liver regeneration after partial hepatectomy et hepatocarcinogenesis in a transgenic mice model. We demonstrated that HBx-T did not modulate liver regenereation. We also showed that HBx-NT induced IL-6 overexpression during priming phase of liver regeneration, and that IL-6 overexpression was involved in STAT3 hyperactivation, SOCS3 accumulation and inhibition of ERK. Overall, HBx-NT induced IL-6 overexpression was responsible for a delay in liver regeneration. Moreover, we showed that HBx-T induced a faster development of hepatic tumor after DEN initiation, compared to HBx-NT. Both HBx forms were involved in an apoptosis sensibilization during acute liver injury, that could be involved in co-carcinogenic effect of HBx-T and HBx-NT. Overall, my results participate to the comprehension of HBx impact on liver carcinogenesisPARIS5-Bibliotheque electronique (751069902) / SudocSudocFranceF

Etude de la pathogenèse induite par la protéine HBx et utilisation d'un modèle murin d'infection par le virus de l'hépatite B

Avec pres de 350 millions de personnes chroniquement infectees, et malgre l existence de vaccins surs et efficaces, l hepatite B reste un probleme de sante publique majeur. La proteine HBx du virus est impliquée dans la pathogenèse virale en agissant sur la prolifération cellulaire et en favorisant le développement du carcinome hépatocellulaire. Les traitements actuels de l hepatite B chronique ne sont pas efficaces chez tous les patients et peuvent conduire a l emergence de souches virales résistantes. Dans un premier temps, deux études transcriptomiques nous ont permis de mettre en évidence de nouveaux partenaires reliant la protéine HBx et la prolifération cellulaire. Nous montrons que des protéines impliquées dans le transport du cholestérol ou la synthèse des isoprénoïdes sont inhibées après hépatectomie chez la souris exprimant la protéine HBx. Nous montrons que la surexpression de la protéine R-GABAb3 dans des hépatocytes primaires humains peut expliquer l effet antiproliferatif induit par la proteine HBx in vitro. Nous suggérons que la protéine R-GABAb3 pourrait être impliquée dans le retard de régénération hépatique observé chez la souris post hepatectomie. Nous montrons egalement qu une forme tronquee en C-terminale de la protéine HBx augmente l incidence de lesions macroscopiques typiques de carcinomes hépatocellulaires en potentialisant l effet carcinogene du diéthylnitrosamine. Dans un second temps, nous avons travaillé sur un modele de souris au foie humanise permettant l infection par le VHB : la souris Alb-uPA/SCID. Nous avons mis au point un protocole pour guerir l infertilite des animaux homozygotes pour le transgène Alb-uPA et avons finalement utilise ces souris pour montrer qu une nouvelle molecule a visee therapeutique, agissant pendant l etape d encapsidation du virus, presentait une activite antivirale. L ensemble de ces resultats permet de mieux comprendre les mécanismes pathogènes impliquant la proteine HBx du virus de l hepatite B mais egalement de faciliter la mise en place d un modele murin d infection par le VHB pour y valider le potentiel therapeutique d un nouvel agent antiviral.With nearly 350 millions of HBV chronic carriers, and despite the availability of a safe and effective vaccine, hepatitis B remains a major health problem. The HBx protein is involved in viral pathogenesis by affecting cell proliferation and promoting the development of hepatic carcinogenesis.Current treatments of HBV chronic carriers are not fully effective and can lead to the emergence of resistant viral strains. As a first step, two different transcriptomic studies have identified new partners making a bridge between HBx protein expression and inhibition of cell proliferation. Indeed, we showed, after hepatectomy of HBx transgenic mice, a down-regulation of genes implicated in cholesterol transport or in isoprenoid biosynthesis. We showed, in primary human hepatocytes, that overexpression R-GABAb3 transcripts may participate to antiproliferative effect induced by HBx protein. We suggest that over expression of the R-GABAb3 protein could be involved in the inhibition of liver regeneration after hepatectomy of HBx transgenic mice. We also showed, in mice transgenicfor a C-terminal truncated form of the HBx protein, an increase of the incidence of macroscopic lesions typical of hepatocellular carcinoma after diethylnitrosamine treatment. In a second step, we have worked on a humanized mouse model allowing hepatitis B infection : the Alb-uPA/SCID mice. We improved the model by developing a protocol to cure the infertility of animals homozygous for the Alb-uPA transgene, and we finally used this model to validate the antiviral capacity of a new compound acting against the encapsidation step of the viral life cycle. Taken together, these results allowed a better comprehension of the mechanisms involving the HBx protein in viral pathogenesis and made easier the establishment of a mouse model of HBV infection to validate new molecules to treat HBV infected patients.PARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF

Activité antivirale de la protéine MxA contre le virus de l'hépatite B

PARIS7-Bibliothèque centrale (751132105) / SudocSudocFranceF

Modeling hepatitis virus infections and treatment strategies in humanized mice

International audienc

ACTIVITE ANTIVIRALE DE LA PROTEINE MXA INDUCTIBLE PAR LE SYSTEME INTERFERON DE TYPE 1 SUR LE VIRUS DE L'HEPATITE B

PARIS5-BU-Necker : Fermée (751152101) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

Implication des virus des hépatites B et C dans l'immuno-pathogenèse et la carcinogenèse hépatique (étude in vitro de l'effet du virus de l'hépatite C sur la production d'une cytokine immunomodulatrice, l'interleukine-10)

PARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / SudocPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF

Le virus de l'hépatite delta (implication du stress oxydant, de STAT-3 et de NF-kappaB dans la pathogénèse virale)

PARIS5-BU Méd.Cochin (751142101) / SudocSudocFranceF

Cell therapy for the diseased liver: from stem cell biology to novel models for hepatotropic human pathogens

It has long been known that hepatocytes possess the potential to replicate through many cell generations because regeneration can be achieved in rodents after serial two-thirds hepatectomy. It has taken considerable time and effort to harness this potential, with liver regeneration models involving hepatocyte transplantation developing over the past 15 years. This review will describe the experiments that have established the models and methodology for liver repopulation, and the use of cells other than adult hepatocytes in liver repopulation, including hepatic cell lines and hematopoietic, cord blood, hepatic and embryonic stem cells. Emphasis will be placed on the characteristics of the models and how they can influence the outcome of the experiments. Finally, an account of the development of murine models that are competent to accept human hepatocytes is provided. In these models, liver deficiencies are induced in immunodeficient mice, where healthy human cells have a selective advantage. These mice with humanized livers provide a powerful new experimental tool for the study of human hepatotropic pathogens