ГІСТОЛОГІЧНІ ЗМІНИ ЗА ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО КЕРАТИТУ У КРОЛІВ НА ФОНІ ВВЕДЕННЯ СТОВБУРОВИХ КЛІТИН

The article highlights the results of histological research of experimental keratitis in rabbits after administration of allogeneic mesenchymal stem cells. These research results provide an opportunity for further study of the effect of allogeneic mesenchymal stem cells on clinical cases of keratitis in animals. A decrease in the function of the eye or its biological activity at the tissue level leads to the development of a serious eye disease - keratitis. The causes of keratitis are acute and chronic inflammatory processes in the parenchyma of the eye, ionizing radiation, degenerative changes, surgical operations, and others. Clinical manifestations of keratitis vary from redness to destructive damage of eye tissues. The use of complex stimulating therapy often smoothes the clinical picture of keratitis and for a short time stops inflammatory processes in the eye, which can later lead to a latent state of the eye. All this indicates that it is necessary to investigate the use of stem cells in eye diseases in animals. Our histological studies have shown that the regeneration of eye tissues with injected allogeneic mesenchymal stem cells is more effective means of treating keratitis than the traditional method of treatment (daily instillation of gentaline 0.4% and cypronorm 4-6 times a day). Specifically, stem cells act as a regulator of proliferation in damaged tissues, activate the synthesis of anti-inflammatory mediators and strengthen their own antioxidant properties. It was established that with the help of allogeneic mesenchymal stem cells, the differentiation of epithelial cells in the layers of the eye and a slight delamination of collagen fibrils were noted already on the 7th day, and on the 14th day the epithelial layer approached normal and there was no inflammatory infiltration of the cornea. Also, on the 30th day of the experiment, almost complete restoration of the structures of the damaged tissue of the eye and the end of the inflammatory process had already taken place. That is, histological studies show that allogeneic mesenchymal stem cells not only restore the function of damaged tissue structures, but also affect the intensity of the inflammatory process, which significantly reduces the time of eye tissue repair at the level of cells and tissues. The obtained data using stem cells can be used for new modern effective methods of treatment of eye pathologies.У статті висвітлено результати гістологічного дослідження експериментального кератиту у кролів за введення алогенних мезенхімальних стовбурових клітин. Ці результати досліджень дають можливість надалі вивчати вплив алогенних мезенхімальних стовбурових клітин за клінічних випадків кератиту у тварин. Зниженні функції ока або його біологічної активності на тканинному рівні призводить до розвитку тяжкого захворювання очей – кератиту. Причинами виникнення кератиту є гострі і хронічні запальні процеси в паренхімі оці, іонізуюче випромінення, дегенеративні зміни, хірургічні операції та інші. Клінічні прояви кератиту різноманітні від почервоніння до деструктивних пошкоджень тканин ока. Використання комплексної стимулюючої терапії часто згладжує клінічну картину кератиту і на не тривалий час призупиняє запальні процеси в оці, що надалі може призвести до латентного стану ока. Все це з особливою актуальністю вказує на необхідність дослідження використання стовбурових клітин при хворобах очей у тварин. Проведені нами гістологічні дослідження, з відновлення тканин ока за введених алогенних мезенхімальних стовбурових клітин є більш ефективним засобом лікування кератиту ніж традиційний метод лікування (щоденне закапування генталайн 0,4 %, і ципронорм 4–6 разів на добу). А саме, стовбурові клітини діють, як регулятор проліферації в пошкоджені тканини, активують синтез протизапальних медіаторів та підсилюють власні антиоксидантні властивості. Встановлено, що за допомогою алогенних мезенхімальних стовбурових клітин, вже на сьому добу відмічали диференціацію епітеліальних клітин по шарах ока і незначне розшаровування колагенових фібрил, а на 14 добу наближення епітеліального шару до нормального та відсутність запальної інфільтрації рогової оболонки. Також, на 30 добу експерименту, вже відбулося практично повне відновлення структур ушкоджених тканинних ока та закінчення запального процесу. Тобто гістологічні дослідження свідчать, що алогенні мезенхімальні стовбурові клітин не тільки відновлюють функцію ушкоджених тканинних структур, але й впливають на інтенсивність запального процесу, що значно зменшує терміни репарації тканин ока на рівні клітин і тканин. Отримані дані з використанням стовбурових клітин, можуть бути використані для нових сучасних ефективних методів лікування патологій ока

INFLUENCE ALLOGENEIC MESENCHYMAL STEM CELLS IN PERITONEAL MACROPHAGES OKSYHENZALEZHNYY METABOLISM MICE S57BL / 6

Дослідження проводили на самцях мишей C57BL/6 масою 20–22 г віком 2–3 місяці. Алогенні МСК отримували культивуванням первинного матеріалу, що був виділений з кісткового мозку мишей С57BL/6. Культивування клітин проводили  у середовищі DMEM з додаванням 20 % фетальної сироватки бичків (FBS) та 1 % суміші антибіотика-антимікотика (Sigma, USA) за 37°С, 100 % вологості і 5 % СО2.Мишам С57BL/6 внутрішньом’язово інокулювали клітинну суспензію метастатичної карциноми легень Льюїс (LLC) у концентрації 1×106/0,1 мл розчину Хенкса. На 8-му добу після інокуляції пухлинних клітин групі тварин вводили  внутрішньовенно алогенні МСК в концентрації 1,25×104 на тварину. Після цього було сформовано такі групи тварин: 1-ша включала інтактних тварин (контроль), 2-га включала тварин, яким вводили тільки  алогенні мезенхімальні стовбурові клітини (MSC), 3-тя включала тварин, яким вводили суспензію метастатичної карциноми легень Льюїс (LLC), 4-та – тварини, яким вводили суспензію метастатичної карциноми легень Льюїс  і  алогенні МСК (LLC+ MSC).Для визначення оксигензалежної біоцидності перитонеальних макрофагів  застосовували спонтанний та стимулювальний НСТ-тест.Встановлено, що введення  алогенних МСК чинить вплив на оксигензалежний метаболізм перитонеальних макрофагів у мишей С57BL/6. Застосування алогенних МСК забезпечує вірогідне зниження метаболічної активності перитонеальних макрофагів  у мишей С57BL/6 з показником  стимуляції  -12% , що вказує  на відсутність функціонального резерву клітин. Встановлено вірогідне зниження метаболічної активності перитонеальних макрофагів  у мишей С57BL/6 з перещепленою карциномою легень Льюїс з показником  стимуляції  -30% , що вказує  на відсутність функціонального резерву клітин.  Введення алогенних МСК призводить до  вірогідного  незначного підвищення метаболічної активності перитонеальних макрофагів  у мишей С57BL/6 з перещепленою карциномою легень Льюїс із показником  стимуляції –  8% , що вказує  на наявність функціонального резерву клітин.Исследования проводили на самцах мышей C57BL/6 массой 20–22 г в возрасте 2–3 месяца. Аллогенные МСК получали культивированием первичного материала, который был выделен из костного мозга мышей С57BL/6. Культивирование клеток проводили в среде DMEM с добавлением 20% фетальной сыворотки бычков (FBS) и 1% смеси антибиотика-антимикотика (Sigma, USA) при 37 °С, 100% влажности и 5% СО2.Мышам С57BL/6 внутримышечно вводили клеточную суспензию метастатической карциномы легких Льюис (LLC) в концентрации 1×106/0,1 мл раствора Хэнкса. На 8-е сутки после инокуляции опухолевых клеток группе животных вводили внутривенно аллогенные МСК в концентрации 1,25×104 на животное. После этого было сформировано следующие группы животных: 1-я включала интактных животных (контроль), 2-я включала животных, которым вводили только аллогенные мезенхимальные стволовые клетки (МСК), 3-я включала животных, которым вводили суспензию метастатической карциномы легких Льюис (LLC), 4-я – животные, которым вводили суспензию метастатической карциномы легких Льюис и аллогенные МСК (LLC + MSC).Для определения оксигензависимой биоцидности перитонеальных макрофагов применяли спонтанный и стимулированный НСТ-тест.Установлено, что введение аллогенных МСК оказывает влияние на оксигензависимый метаболизм перитонеальных макрофагов у мышей С57BL/6. Применение аллогенных МСК обеспечивает достоверное снижение метаболической активности перитонеальных макрофагов у мышей С57BL/6 с показателем стимуляции -12%, что указывает на отсутствие функционального резерва клеток. Установлено достоверное снижение метаболической активности перитонеальных макрофагов у мышей С57BL/6 с первитой карциномой легких Льюис с показателем стимуляции  -30%, что указывает на отсутствие функционального резерва клеток. Введение аллогенных МСК приводит к достоверному незначительного повышению метаболической активности перитонеальных макрофагов у мышей С57BL / 6 с перевитой карциномой легких Льюис с показателем стимуляции – 8%, что указывает на наличие функционального резерва клеток.The study was conducted on male mice C57BL/6 weighing 20-22 g aged 2-3 months. Receiving allogeneic MSCs cultivation of primary material that was isolated from the bone marrow of mice C57BL/6. Cultivation of cells was carried out in DMEM medium with addition of 20% fetal bovis serum (FBS) and 1% antibiotic-antimycotics (Sigma, USA) at 37 °C, 100% humidity and 5% CO2.It was inoculated intramuscularly cell suspension metastatic Lewis lung carcinoma (LLC) in a concentration 1×106/0.1 ml Hanks to mice C57BL/6. On the 8th day after tumor cell inoculation it was administered intravenously allogeneic MSCs in a concentration 1,25×104  to 4th  group of animals. After that was formed following groups of animals: 1st included intact animals (control), 2nd – included animals which was administered only allogeneic mesenchymal stem cells (MSC), 3rd  – included animals which was administered suspension metastatic Lewis lung carcinoma (LLC ),  4th  group  – which was administered suspension metastatic Lewis lung carcinoma and allogeneic MSCs (LLC + MSC).Spontaneous and stimulated oxidative metabolism of peritoneal macrophages were established  in NBT-test.It was established that administration  allogeneic MSCs   influence on  oxidative metabolism of peritoneal macrophages in mice C57BL/6. The use of allogeneic MSCs provides a probable decrease metabolic activity of peritoneal macrophages in miceC57BL/6 with stimulation  index -12%. It was indicate  that  cells lose of functional reserve. In mice with  Lewis lung carcinoma ( 3rd  group of animals)  metabolic activity of peritoneal macrophages in mice C57BL/6   was decreased  with stimulation  index  -30% like  indicating a losek of cells. functional reserve.Allogeneic MSCs application in mice C57BL/6 perescheplenoyu Lewis lung carcinoma is lead to a slight increase metabolic activity of peritoneal macrophages   with stimulation  index  8%, which indicates the presence of cells functional reserve

Morphological peculiarites and functional activity of adipose-derived mesenchimal stem cells during in vitro cultivation conditions

The studies were conducted on 2-3-months-old males of C57BL/6 mice weighing 20–24 g. Obtaining and cultivating of adipose-derived mesenchimal stem cells (AD MSCs) were carried out in a sterile laminar box with compliance of conditions of asepsis and antiseptics. AD MSCs of the 2, 4, 7 and 12 passages were analyzed. Morphometric analysis was performed using a light microscopy. Morphometric parameters such as cell and nucleus area or nuclear-cytoplasmic ratio (NCR) were calculated using the Axiovision light microscope (Carl Zeiss, Germany) and ImageJ 1.45 software. Trypan blue dye used for investigation of the viability of MSC. The morphological characteristics of mesenchymal stem cells from adipose tissue during the process of cultivation changes: at the first passages of cultivation, the cells are spindle-shaped with two, at least three, long long cytoplasmic processes, located bipolar. Near the nucleus the Golgi complex is clearly visible – a sign of active cells. At later passages cells have a small cytoplasmic processes and the bipolar arrangement of processes changes by stellar arrangement. Golgi complex is also clearly visualized. The indicator of the nuclear-cytoplasmic ratio in MSC from adipose tissue is significantly reduced at 7 passage to 0.2189 ± 0.0122 (P < 0.01), and at 12 passage to 0.1111 ± 0.0086 (P < 0.001) compared to the 2 passage. The coefficient of proliferation of MSC from adipose tissue is significantly reduced at 12th passage. The viability of mesenchymal stem cells from adipose tissue with an increasing of a number of passages significantly reduces and at the 12th passage of cultivation reaches 84,67 ± 1,36* (P < 0.05). The content of apoptotic cells that exhibited sensitivity to serum-free significantly increased at 7 and 12 passages and was respectively 21.33 ± 1.36 (P < 0.05) and 23.67 ± 0.97% (P < 0.05)

Вміст жирних кислот в ліпідах мезенхімних стовбурових клітин культури жирової тканини

The content of fatty acids in the lipids of mesenchymal stem cells of dog adipose tissue culture was studied. Mesenchymal stem cells of dog adipose tissue culture were obtained by culturing the primary material in a CO2 incubator with a content of 5 % CO2, at a temperature of 37 °C in DMEM medium with the addition of 10–15 % fetal bovine serum and 1 % antibiotic-antimycotic. When the confluency of the monolayer reached 70–80 %, the cells were transferred to a suspension and subcultivated in order to reduce the heterogeneity of the culture and obtain a sufficient amount of biological material. The lipids of the obtained stem cells were analyzed for the content of fatty acids by the method of thin-layer gas-liquid chromatography. Determination of the content of lipids of fatty acids in FSK of a cat was carried out by the Folch method. A mixture of fatty acid methyl esters was analyzed on a Trace GC Ultra gas chromatograph with a flame ionization detector on a capillary column SPTM –2560, 100 m x 0.25 mm ID, 0.20 μm film (Supelco). Identification of fatty acids was carried out using a standard sample of Supelco 37 Сomponent FAME Mix. Quantitative assessment of the LC spectrum was carried out by the method of normalization of the peak planes of methylated LC derivatives and their content was determined as a percentage of the total content of all LC. The conducted study of the content of fatty acids in lipids made it possible to reveal certain features of the lipid metabolism of mesenchymal stem cells cultured in dog adipose tissue. A high content of oleic acid, characteristic of cells resistant to apoptosis and with high proliferative potential, was determined; a high ratio of unsaturated linoleic to saturated stearic acid (С18:1/С18.0), which reflects the high activity of the stearoyl-coenzyme-desaturase enzyme and, indirectly, the active state of the Wnt/β-catenin signaling pathway; inability to lengthen the chain of saturated fatty acids; lack or low activity of de novo synthesis of omega-6 polyunsaturated fatty acids. 18 fatty acids were found in the composition of lipids of fetal stem cells of a cat, of the saturated ones - the most palmitic acid (33.70 ± 0.02 %), of the monounsaturated ones – oleic acid (21.63 ± 0.03 %), of the polyunsaturated ones – linoleic acid (6.45 ± 0.07 %). The least amount of cis-,11,14-eicosadienoic acid (0.04 ± 0.01 %) was found in the composition of cell lipids. The total amount of saturated fatty acids in dog mesenchymal stem cell lipids was 65.65 ± 0.02 %), unsaturated fatty acids – 34.35 ± 0.02 %. Monoene fatty acids were determined in the amount of 24.46 ± 0.02 %, and polyene – 9.89 ± 0.02 %. The ratio index of polyunsaturated fatty acids ω 3 to ω 6 is 0.40. Lipids of mesenchymal stem cells of adipose tissue culture were characterized by a lower content of monoene unsaturated fatty acids 24.46 ± 0.02; (P < 0.05), with a higher content of ω3 fatty acids 3.04 ± 0.02 %; (P < 0.05), with a lower content of ω6 fatty acids 6.86 ± 0.02 %; (P < 0.05) in contrast to lipids of red bone marrow stem cells.Досліджено вміст жирних кислот в ліпідах мезенхімних стовбурових клітин культури жирової тканини собаки. Мезенхімні стовбурові клітини культури жирової тканини собаки отримували шляхом культивування первинного матеріалу в СО2 інкубаторі з вмістом 5 % СО2, за температури 37 °С у середовищі DMEM з додаванням 10–15 % фетальної сироватки великої рогатої худоби та 1 % антибіотика-антимікотика. Коли конфлюетність моношару сягала 70–80 %, клітини переводили в суспензію та проводили субкультивування з метою зниження гетерогенності культури та отримання достатньої кількості біологічного матеріалу. Ліпіди отриманих стовбурових клітин  досліджували на вміст жирних кислот методом тонкошарової газорідинної хроматографії. Визначення вмісту ліпідів жирних кислот ФСК кота проводили методом Фолча. Суміш метилових ефірів жирних кислот аналізували на газовому хроматографі Trace GC Ultra з полум’яно-іонізаційним детектором на капілярній колонці SPTM–2560, 100 m × 0,25 mm ID, 0,20 μm film (Supelco). Ідентифікацію жирних кислот проводили за допомогою стандартного зразка Supelco 37 Сomponent FAME Mix. Кількісну оцінку спектру ЖК проводили методом нормування площин піків метильованих похідних ЖК і визначали їхній вміст у відсотках від сумарного вмісту усіх ЖК. Проведене дослідження вмісту жирних кислот в ліпідах дало можливість виявити певні особливості ліпідного обміну мезенхімних стовбурових клітин культури жирової тканини собаки. Визначено високий вміст олеїнової кислоти, характерний для клітин, резистентних до апоптозу та з високим проліферативним потенціалом; високе співвідношення ненасиченої лінолевої до насиченої стеаринової кислоти (С18:1/С18.0), яке відображає високу активність фермента стеарол-коензим-десатурази та опосередковано – активний стан Wnt/β-катенін сигнального шляху; нездатність до подовження ланцюга насичених жирних кислот; відсутність або низьку активність синтезу de novo омега-6 поліненасичених жирних кислот. У складі ліпідів фетальних стовбурових клітин кота виявлено 18  жирних кислот, з насичених – найбільше пальмітинової кислоти (33,70 ± 0,02 %), з мононенасичених – олеїнової кислоти (21,63 ± 0,03 %), з поліненасичених – лінолевої кислоти (6,45 ± 0,07 %). Найменше у складі ліпідів клітин виявлено ціс-,11,14-ейкозадієнової кислоти (0,04 ± 0,01 %). Сумарна кількість насичених жирних кислот у ліпідах мезенхімниї стовбурових клітин собаки становила 65,65± 0,02%), ненасичених жирних кислот – 34,35 ± 0,02 %. Моноєнові жирні кислоти визначено у кількості 24,46± 0,02%, а полієнові – 9,89± 0,02%. Індекс співвідношення поліненасичених жирних кислот ω 3 до ω 6 становить 0,40. Ліпіди мезенхімних стовбурових клітин  культури жирової тканини  характеризувалися нижчим умістом моноєнових ненасичених жирних кислот 24,46 ± 0,02; (P < 0,05), більшим вмістом ω3 жирних кислот 3,04 ± 0,02 %; (P < 0,05), меншим вмістом ω6 жирних кислот 6,86 ± 0,02 %; (P < 0,05) на противагу ліпідам стовбурових клітин культури червоного кісткового мозку

ГІСТОЛОГІЧНІ ЗМІНИ ЗА ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО УВЕЇТУ У КРОЛІВ НА ФОНІ ВВЕДЕННЯ СТОВБУРОВИХ КЛІТИН

The article presents the results of histological examination of experimental uveitis in rabbits with the introduction of allogeneic mesenchymal stem cells. These research results make it possible to analyze and further study the effects of allogeneic mesenchymal stem cells in clinical cases of uveitis in animals. Uveitis is a symptom of many diseases that lead to slow functional and anatomical death of the eye. Uveitis causes inflammation of the middle (vascular) membrane of the eye, which consists of the choroid, ciliary body and iris. The use of complex therapy often smooths out the clinical picture of progressive intraocular inflammation, contributing to an increase in its latent period. All this with particular relevance points to the need to study the use of stem cells in eye diseases in animals. Our histological studies on the restoration of eye tissues from the introduced allogeneic mesenchymal stem cells indicate their effective use for uveitis in animals. Stem cells act as a regulator of proliferation in damaged eye tissues and cause cyto-differentiation during cell regeneration, activate the synthesis of anti-inflammatory mediators and enhance their own antioxidant properties. It was found that with the help of allogeneic mesenchymal stem cells, already on the 7th day of the experiment, a decrease in corneal stroma thickening was noted, and on the 14th day, restoration of the anterior surface epithelium was noted. Also on the 30th day of the experiment, almost complete restoration of damaged tissue structures of the eye and the end of the inflammatory process were noted. That is, histological studies indicate not only the recovery function of damaged tissue structures with the help of allogeneic mesenchymal stem cells, but also the effect on the intensity of the inflammatory process, which significantly reduces the time of repair of eye tissues at the level of cells and tissues. The obtained data using stem cells can be used for new modern methods of treating many eye pathologies in ophthalmology.У статті висвітлено результати гістологічного дослідження експериментального увеїту у кролів за введення алогенних мезенхімальних стовбурових клітин. Ці результати досліджень дають можливість аналізувати та в подальшому вивчати вплив алогенних мезенхімальних стовбурових клітин за клінічних випадків увеїту в тварин. Увеїт є симптомом багатьох хвороб, які призводять до повільної функціональної і анатомічної загибелі ока. За увеїту виникає запалення середньої (судинної) оболонки ока, яка складається з хоріоідеї, циліарного тіла і райдужної оболонки. Використання комплексної терапії часто згладжує клінічну картину прогресуючого внутрішньо очного запалення, сприяючи збільшенню його латентного періоду. Все це з особливою актуальністю вказує на необхідність дослідження використання стовбурових клітин при хворобах очей у тварин. Проведені нами гістологічні дослідження, з відновлення тканин ока за введених алогенних мезенхімальних стовбурових клітин, свідчать про їх ефективне використання за увеїту у тварин. Стовбурові клітини діють як регулятор проліферації в пошкоджені тканини ока і викликають цитодиференціацію в процесі регенерації клітин, активують синтез протизапальних медіаторів та підсилюють власні антиоксидантні властивості. Встановлено, що за допомогою алогенних мезенхімальних стовбурових клітин, вже на 7 добу експерименту відмічали зменшення потовщення строми рогівки, а на 14 добу –відновлення переднього поверхневого епітелію. Також, на 30 добу експерименту, відмічали практично повне відновлення ушкоджених тканинних структур ока та закінчення запального процесу. Тобто, гістологічні дослідження свідчать не тільки про відновлювальну функцію ушкоджених тканинних структур за допомогою алогенних мезенхімальних стовбурових клітин, але й про вплив на інтенсивність запального процесу, що значно зменшує терміни репарації тканин ока на рівні клітин і тканин. Отримані дані з використанням стовбурових клітин, можуть бути використані для нових сучасних методів лікування багатьох патологій ока в офтальмології

BIOLOGICAL PECULIARITIES OF ADIPOSE TISSUE-DERIVED MESENCHYMAL STEM CELLS AT DIFFERENT PASSAGES OF CULTIVATION

The studies were conducted on 2–3-months-old males of C57BL/6 mice weighing 20–24 g. Obtaining and operating with adipose tissue-derived mesenchymal stem cell (MSC) culture was performed in a sterile laminar box under conditions of asepsis and antiseptics. The adipose tissue-derived MSC of the 2, 4, 7 and 12 passages were analyzed. Morphometric analysis was performed using a light microscopy. Morphometric parameters such as cell and nucleus area or nuclear-cytoplasmic ratio were calculated using the Axiovision light microscope (Carl Zeiss, Germany) and Image J 1.45 software. Trypan blue dye used for investigation of the viability of MSC. The morphological characteristics of adipose tissue-derived MSC during the process of cultivation changes: at the first passages of cultivation, the cells are spindle-shaped with two, at least three, long cytoplasmic processes, which are located bipolar. Near the nucleus, the Golgi complex is clearly visible – a sign of active cells. At later passages, cells have a small cytoplasmic processes and the bipolar arrangement of processes changes by stellar arrangement. Golgi complex is also clearly visualized. The indicator of the nuclearcytoplasmic ratio in MSC from adipose tissue is significantly reduced at the 7th passage to 0.2189 ± 0.0122 (P < 0.01), and at the 12th passage to 0.1111 ± 0.0086 (P < 0.001) compared to the 2nd passage. The coefficient of proliferation of adipose tissue-derived MSC is significantly reduced at 12th passage. The viability of MSC from adipose tissue with an increasing of a number of passages significantly reduces and at the 12th passage of cultivation reaches 84.67 ± 1.36 (P < 0.05). The content of apoptotic cells that exhibited sensitivity to serum-free cultivation significantly increased at the 7th and 12th passages and was 21.33 ± 1.36 (P < 0.05) and 23.67 ± 0.97% (P < 0.05), respectivel

Хондрогенне диференціювання мезенхімальних стовбурових клітин кроля, залежно від типу культуральної системи

Experimental study concerned with the ability of mesenchymal stem cells to chondrogenic differentiation in vitro depending on the type of culture system with a view to their further clinical use in veterinary medicine to restore the lost functions of damaged articular cartilage is one of the priority directions of scientific research. Reparative ability of cartilage tissue is limited, since the level of physiological and reparative regeneration of cartilage tissue is quite low. Given this, the search continues for such therapeutic agents and techniques that most effectively restore the damaged structure and function of the tissues of the articular cartilage. A special place in this search belongs to biotechnology. The bone marrow mesenchymal stem cells are one of the most studied multipotent populations of adult cells, which, due to their ability to proliferate and differentiate in vitro, is of great importance in clinical veterinary practice in treating animals with articular cartilage lesions. It was established that with the used protocol of chondrogenic differentiation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells in the monolayer most of the cultured cells acquire a filamentous form, which leads to a decrease in the area of ​​their adhesion to the surface of the culture plastic and, as a result, detachment into the culture medium. During cultivation the confluence of cell monolayer in experimental cultures decreased and at 18 days of cultivation was about 5%. During cultivation the mesenchymal stem cells in the form of a precipitate in chondrogenic medium, for the 6th day of the study, it was visually discovered that the precipitated mass of cells at the bottom of the test tube became spherical, indicating cell compactification and are important condition for their differentiation in the chondrogenic direction. This form of micromass was maintained throughout the entire period of cultivation. Comparison of chondrogenic differentiation methods of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells in monolayer and micromass showed that the method of differentiation of cells in the micromass is more efficient, since as early as 21 days during the study revealed significantly larger depositions of the extracellular matrix by cells compared to monolayer differentiation.Eкспериментальне вивчення здатності мезенхімальних стовбурових клітин до хондрогенного диференціювання in vitro залежно від типу культуральної системи з метою їх подальшого клінічного застосування у ветеринарній медицині для відновлення втрачених функцій пошкодженого суглобового хряща є одним із пріоритетних напрямків наукових досліджень. Репаративна здатність хрящової тканини обмежена, оскільки рівень фізіологічної та репаративної регенерації хрящової тканини досить низький. З огляду на це, триває пошук таких терапевтичних засобів та прийомів, які б дозволяли максимально ефективно відновити порушені структуру і функцію тканин суглобового хряща. Особливе місце у цьому пошуку належить біотехнології. Мезенхімальні стовбурові клітини кісткового мозку – одна з найбільш вивчених мультипотентних популяцій клітин дорослого організму, яка завдяки здатності до проліферації і диференціювання in vitro, має вагоме значення в клінічній ветеринарній практиці у лікуванні тварин з ураженнями суглобового хряща. Встановлено, що за апробованого протоколу хондрогенного диференціювання мезенхімальних стовбурових клітин кісткового мозку кроля у моношарі більшість культивованих клітин набуває ниткоподібної форми, що призводить до зниження площі їх адгезії до поверхні культурального пластику і, як наслідок, відкріплення у культуральне середовище. Порівняння методів хондрогенного диференціювання мезенхімальних стовбурових клітин кісткового мозку кроля у моношарі та мікромасі показало, що ефективнішим є метод диференціювання клітин у мікромасі, - вже на 21 добу дослідження виявлялись значно більші відкладання клітинами позаклітинного матриксу, порівняно з методом диференціювання у моношарі

ЕФЕКТИВНІСТЬ ЗАСТОСУВАННЯ МЕЗЕНХІМАЛЬНИХ СТОВБУРОВИХ КЛІТИН ЗА УВЕЇТУ В СОБАК, В ЗАЛЕЖНОСТІ ВІД СПОСОБУ ЇХ ВВЕДЕННЯ

The article highlights the results of studies on spontaneous clinical cases of bacterial uveitis in dogs, using a slit lamp, sonographic and visual research methods, and after the introduction of mesenchymal stem cells in various ways. These research results make it possible to analyze and further study the effect of mesenchymal stem cells, when administered in various ways in total uveitis, and determine the most effective method in clinical cases in dogs. Chronic total uveitis is an extremely severe late complication of ophthalmic surgery, and leads to slow functional and anatomical death of the eye. The use of antibacterial drugs for the Prevention of infectious complications often smooths out the clinical picture of progressive intraocular inflammation, contributing to an increase in its latent period. All this with particular relevance indicates the need for research as early as possible, and the specifics of the use of stem cells in eye diseases in dogs. Our research on the restoration of eye tissues depends on many factors, on the balance between inflammatory mediators and their antagonists, which activate the synthesis of anti-inflammatory mediators. Also, it depends on the number of mesenchymal stem cells that act as a regulator of proliferation in damaged eye tissues and cause cyto-differentiation during cell regeneration and enhance their own antioxidant properties. It was found that microbial contamination significantly deepens the consequences of damage to tissues and structures of the eye, which lead to acidosis of tissues, changes microcirculation and exit and destruction of cell membranes and prolongation of the inflammatory phase, namely, it determines the course and results of the reparative process. At the same time, we can talk not only about the recovery function of damaged tissue structures with the help of mesenchymal stem cells, but also the effect on the intensity of the inflammatory process, which significantly reduces the time of repair of eye tissues at the level of cells and tissues. The data obtained can be used for new modern methods of treating many pathologies associated with eye tissue damage and the use of mesenchymal stem cells in reparative ophthalmology.У статті висвітлено результати досліджень на спонтанних клінічних випадках бактеріального увеїту у собак, за допомогою щілинної лампи, сонографічних та візуальних методів дослідження та після введення мезенхімальних стовбурових клітин різними способами. Ці результати досліджень дають можливість аналізувати та в подальшому вивчати вплив мезенхімальних стовбурових клітин, при введенні різними способами при тотальних увеїтах, та визначити найефективніший метод при клінічних випадках у собак. Хронічний тотальний увеїт є вкрай важким пізнім ускладненням офтальмохірургії, і призводить до повільної функціональної і анатомічної загибелі ока. Використання антибактеріальних препаратів для профілактики інфекційних ускладнень часто згладжує клінічну картину прогресуючого внутрішньо очного запалення, сприяючи збільшенню його латентного періоду. Все це з особливою актуальністю вказує на необхідність дослідження в максимально ранніх термінах, і специфіку використання стовбурових клітин при захворюваннях очей у собак. Проведені нами дослідження, з відновлення тканин ока, залежать від багатьох факторів – від балансу між медіаторами запалення і їх антагоністами, які активують синтез протизапальних медіаторів. Також від кількості введених мезенхімальних стовбурових клітин, які діють як регулятор проліферації в пошкоджені тканини ока і викликають цитодиференціацію в процесі регенерації клітин та підсилюють власні антиоксидантні властивості. Встановлено, що мікробна контамінація значно поглиблює наслідки пошкодження тканин і структур ока, які призводять до ацидозу тканин, що змінює мікроциркуляцію та вихід і руйнування клітинних мембран і затягування фази запалення, а саме вона визначає перебіг та результати репаративного процесу. В той час, можна говорити не тільки про відновлювальну функцію ушкоджених тканинних структур за допомогою мезенхімальних стовбурових клітин, але й про вплив на інтенсивність запального процесу, що значно зменшує терміни репарації тканин ока на рівні клітин і тканин. Отримані дані можуть бути використані для нових сучасних методів лікування багатьох патологій, пов’язаних з ушкодженнями тканин ока та застосування мезенхімальних стовбурових клітин у репаративній офтальмології