Identification of proliferating cells in chicken embryos using 5-bromo- 2'-deoxyuridine immunohistochemical detection

Chicken embryos were incubated with BrdU, embedded in plastic resin, sectioned and screened immunohistochemically to identify proliferating cells in the neural tube and somites. Fixation in 4% paraformaldehyde for 1 h was essential for detecting specific colorimetric signals of BrdU incorporation into cells during the S phase of the cell cycle. Transverse sections of the neural tube showed that the nuclei of proliferating cells (BrdU positive) had a uniform and centralized distribution, whereas unstained nuclei were found only along the extremities of the neural tube. Transverse sections of differentiated somites showed proliferating cells in the scleratome and dermatome. However, no incorporation of BrdU was observed in myotomic cells, which give rise to axial skeletal muscle. In spite of their proximity, the dermatome and myotome showed marked differences in cell proliferation. The excellent preservation of morphological characteristics in the embryonic tissues facilitated identification of variations in BrdU incorporation.<br>Embriões de frango foram incubados na presença de BrdU e montados em resina plástica. A detecção de células em proliferação nos somitos e tubo neural foi feita através de anticorpos contra BrdU. Um ponto essencial para a otimização do método foi a fixação dos embriões por apenas uma hora em paraformaldeído a 4%. Análise de cortes transversais revelou que no tubo neural os núcleos marcados se posicionavam na região central. Cortes transversais em somitos diferenciados revelaram a presença de células em proliferação no dermátomo e esclerótomo, no entanto não foi observado nenhum sinal no miótomo. A metodologia aqui apresentada permitiu identificar com clareza e boa resolução as células em proliferação presentes em tecidos embrionários