Estimation of Cutoff Values of Cotinine in Urine and Saliva for Pregnant Women in Poland

Setting appropriate cutoff values and the use of a highly sensitive analytical method allow for correct classification of the smoking status. Urine-saliva pairs samples of pregnant women in the second and third trimester, and saliva only in the first trimester were collected. Offline SPE and LC-ESI-MS/MS method was developed in the broad concentration range (saliva 0.4–1000 ng/mL, urine 0.8–4000 ng/mL). The mean recoveries were 3.7±7.6% for urine and 99.1±2.6% for saliva. LOD for saliva was 0.12 ng/mL and for urine 0.05 ng/mL; LOQ was 0.4 ng/mL and 0.8 ng/mL, respectively. Intraday and interday precision equaled, respectively, 1.2% and 3.4% for urine, and 2.3% and 6.4% for saliva. There was a strong correlation between salivary cotinine and the uncorrected cotinine concentration in urine in the second and third trimesters of pregnancy. The cutoff values were established for saliva 12.9 ng/mL and urine 42.3 ng/mL or 53.1 μg/g creatinine with the ROC curve analysis. The developed analytical method was successfully applied to quantify cotinine, and a significant correlation between the urinary and salivary cotinine levels was found. The presented cut-off values for salivary and urinary cotinine ensure a categorization of the smoking status among pregnant women that is more accurate than self-reporting

Effect of environmental phthalate exposure on pregnancy duration and birth outcomes

Objectives: The objective of this study was to evaluate the impact of phthalate exposure on pregnancy duration and birth outcomes based on the Polish Mother and Child Cohort (REPRO_PL). Material and Methods: Phthalate exposure was determined by measuring 11 phthalate metabolites (mono-ethyl phthalate (MEP), mono-iso-butyl phthalate (MiBP), mono-n-butyl phthalate (MnBP), 3OH-mono-n-butyl phthalate (OH-MnBP), mono-benzyl phthalate (MBzP), mono‑ (2-ethylhexyl) phthalate (MEHP), mono-(2-ethyl-5-hydroxyhexyl) phthalate (MEHHP), mono-(2-ethyl-5-oxohexyl) phthalate (MEOHP), mono-hydroxy-iso-nonyl phthalate (MHiNP), mono-oxo-iso-nonyl phthalate (MOiNP), and mono-n-octyl phthalate (MOP)) in the urine collected from 165 mothers during the third trimester of pregnancy by high performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS). The following measures at birth were considered: gestational age, birth weight, length as well as head and chest circumference. Results: Pregnancy duration was inversely associated with natural log concentrations (μg/g creatinine) of MEP (standardized regression coefficient (β) = –0.2, p = 0.04) after adjustment for a variety of confounders. Significant impact of MOiNP on head circumference (β = –0.1, p = 0.05) was also observed. Conclusions: The study findings add further support to the hypothesis that phthalate exposure may be associated with shorter pregnancy duration and a decreased head circumference, and underscore importance of public health interventions to reduce that exposure

Children’s residential exposure to selected allergens and microbial indicators: endotoxins and (1→3)-β-D-glucans

Objectives: The study was aimed at assessment of exposure to endotoxins, (1→3)-β-D-glucans and mite, cockroach, cat, dog allergens present in settled dust in premises of children as agents which may be significantly correlated with the occurrence of allergic symptoms and diseases in children. Materials and Methods: The study covered 50 homes of one- or two-year-old children in Poland. Samples of settled dust were taken from the floor and the child's bed. The levels of (1→3)-β-D-glucans (floor), endotoxins (floor) and allergens of mite, cat, dog and cockroach (floor and bed) were analyzed. Results: Average geometric concentrations (geometric standard deviation) of endotoxins, (1→3)-β-D-glucans, Der p1, Fel d1, Can f1 and Bla g1 in children homes were on the floor 42 166.0 EU/g (3.2), 20 478.4 ng/g (2.38), 93.9 ng/g (6.58), 119.8 ng/g (13.0), 288.9 ng/g (3.4), 0.72 U/g (4.4) and in their beds (only allergens) 597.8 ng/g (14.2), 54.1 ng/g (4.4), 158.6 ng/g (3.1) 0.6 U/g (2.9), respectively. When the floor was covered with the carpet, higher concentrations of endotoxins, (1→3)-β-D-glucans and allergens (each type) were found in the settled dust (p < 0.05). The trend was opposite in case of allergens (except dog) analyzed from bed dust and significantly higher concentrations were found in the rooms with smooth floor (p < 0.05). Conclusions: Among the analyzed factors only the type of floor significantly modified both the level of biological indicators and allergens. The results of this study could be the base for verifying a hypothesis that carpeting may have a protective role against high levels of cockroach, dog and cat allergens

Interpersonal relations in selected stories by Ivana Dobrakovová

Celem niniejszej pracy jest próba przybliżenia, w jaki sposób problem relacji międzyludzkich przedstawiony został w twórczości słowackiej pisarki Ivany Dobrakovovej. Współczesna literatura słowacka poświęca wiele uwagi zagadnieniom, które powiązane są z ludzkim życiem. Jedną z pisarek, która tworzy teksty opowiadające o problemach chorób, śmierci czy też skomplikowanych związków, jest Ivana Dobrakovová. W niniejszej pracy przedstawione zostały wybrane utwory tej autorki, które dokładnie przedstawiają omawianą problematykę. W pracy znajduje się również charakterystyka współczesnej prozy słowackiej po 2000 roku, w której zaprezentowane zostały konkretne nurty literackie ze wskazaniem na wpisujących się w te ramy autorów i ich dzieła. Praca ma charakter analityczny i literaturoznawczy.The aim of this work is an attempt to present, how the problem of interpersonal relations was presented in the literary works of the Slovak writer Ivana Dobraková. Contemporary Slovak literature devotes a lot of attention to issues related to human life. One of the writers who create texts about the problems of illness, death or complicated relationships is Ivana Dobrakovová. This work presents selected literary works by this author, which accurately present the discussed issues. The work also includes a description of contemporary Slovak prose after 2000, in which specific literary trends are presented, with an indication of authors and their works who fit into this framework. The work is analytic and literature-specialist

Characteristics of borrowings in the Slovak language

W swojej pracy licencjackiej poświęciłam uwagę kwestii języka słowackiego. Przeze mnie wybrany temat jest bardzo ważny dla Słowaków, ponieważ przedstawia historię Słowacji, która miała istotny wpływ na proces kształtowania się i rozwoju języka słowackiego. Z tego względu wskazałam, a następnie objaśniłam problematykę leksykologii obcego pochodzenia i internacjonalizmów. Dodatkowo wskazałam z jakich konkretnych języków słowacki zapożyczył wiele terminów w poszczególnych dziedzinach życia. Istnieje kilka powodów, dla których wybrałam ten temat. Po pierwsze, uważam, że nie jest on wystarczająco opracowany. Większość studentów filologii słowackiej poświęca więcej uwagi literaturze, a mniej językowi. Doskonała znajomość historii języka słowackiego jest podstawowym elementem, który umożliwia rozpoczęcie jego nauki. Praca ma głównie charakter teoretyczny. Jej celem było opisanie i przybliżenie ważnych wydarzeń z różnych okresów historii Słowacji, które przyczyniły się do zapożyczenia wyrazów obcych, ale również stopniowego kształtowania się słowackiego języka literackiego. Dalszym celem było wyjaśnienie kwestii słów podjętych na podstawie pewnych przykładów. W swojej pracy opieram się na dostępnej literaturze: monografie, artykuły zawarte w czasopismach naukowych i słowników w formie drukowanej i elektronicznej, takie jak Krátky slovník slovenského jazyka i Synonymický slovník slovenčiny, które są dostępne na stronie internetowej slovnik.juls.savba.sk. W swoich badaniach wykorzystałam metodę analizy, syntezy, porównania i wyliczenia. Praca jest podzielona na trzy rozdziały. Pierwszy rozdział zawiera krótką historię języka słowackiego. W nim został przedstawiony podział na kilka okresów, a także wszystkie kodyfikacje słowackiego języka narodowego. Między innymi w pracy wspominam o następujących wydarzeniach: powstanie Wielkich Moraw, Królestwa Węgier, Czechosłowacji i innych. Oprócz tego, w pracy zostały wypisane i omówione cechy najważniejszych kodyfikacji Antona Bernoláka i Ľudovíta Štúra, ale również zmiany, które wprowadzili Michał Miloslav Hodža i Martin Hattala.Pierwszy rozdział zawiera definicje podstawowych pojęć i terminów używanych w pracy, takich jak: misja cyrylometodejska, Biblia kralicka, czechosłowakizm, madziaryzacja i tym podobne.W drugim rozdziale pracy skupiam swoją uwagę na leksykologii obcego pochodzenia. Wymieniam różne typy zapożyczeń, w tym słowackie odpowiedniki, idioetnicizmy i kalki. Następnie wyjaśniam ich znaczenie. Każdy typ został poparty konkretnym przykładem. W przypadku internacjonalizmów zostają zestawione dwie opinie, Kláry Buzássyovej i Juraja Dolníka.W trzecim rozdziale postanowiłam uwzględnić wszystkie języki, z których język słowacki zapożyczył poszczególne terminy. Uważam, że jest to interesujący rozdział, choćby dlatego, że nawiązuje do historii języka i przedstawia występowanie wyrazów obcych na różnych płaszczyznach życia. W swojej pracy licencjackiej osiągnęłam wytyczone przeze mnie cele. Ponadto wykazałam, że historia Słowacji miała wielki wpływ na kształtowanie się literackiego języka słowackiego, a wyrazy obcego pochodzenia zagrażają językowi ojczystemu, w tym przypadku słowackiemu.In my BA thesis I devoted attention to the issue of the Slovak language. The topic chosen by me is very important for Slovaks, because it presents the history of Slovakia, which had a significant impact on the process of shaping and development of the Slovak language. For this reason, I pointed out and then explained the problems of lexicology of foreign origin and internationalisms. In addition, I pointed out what specific Slovak languages have borrowed many dates in specific areas of life.There are several reasons why I chose this topic. First of all, I think that it is not sufficiently developed. Most students of Slovak philology devote more attention to literature and less to language. Excellent knowledge of the history of the Slovak language is a basic element that allows you to start learning.The work is mainly of a theoretical nature. Its purpose was to describe and present important events from various periods in the history of Slovakia, which contributed to the borrowing of foreign words, but also the gradual formation of the Slovak literary language. A further purpose was to clarify the question of words taken on the basis of certain examples. In my work I rely on the available literature: monographs, articles in scientific journals and dictionaries in printed and electronic form, such as Krátky slovník slovenského jazyka and Synonymický slovník slovenčiny, which are available on the website slovnik.juls.savba.sk. In my research I used the method of analysis, synthesis, comparison and calculation.The work is divided into three chapters. The first chapter contains a brief history of the Slovak language. In it was presented the division into several periods, as well as all codifications of the Slovak national language. Among other things, at work I mention the following events: the rise of Great Moravia, the Kingdom of Hungary, Czechoslovakia and others. In addition, the most important codifications of Anton Bernolák and Ľudovít Štúr, as well as the changes introduced by Michał Miloslav Hodža and Martin Hattala, have been written and discussed in the work.The first chapter contains definitions of basic terms and terms used in the work, such as the Cyril-Metean mission, the Krallian Bible, Czechoslovakism, magisterization and the like.In the second chapter of my work, I focus my attention on the lexis of foreign origin. I mention various types of borrowings, including Slovak counterparts, idioticisms and tracing paper. Then I explain their meaning. Each type has been supported by a specific example. In the case of internationalism, two opinions are compiled, Kláry Buzássyova and Juraja Dolník.In the third chapter, I decided to include all languages from which the Slovak language borrowed individual dates. I think that this is an interesting chapter, if only because it refers to the history of language and presents the occurrence of foreign words at various levels of life.In my BA thesis I achieved my goals. In addition, I showed that the history of Slovakia had a great impact on the formation of literary Slovak language, and the words of foreign origin threaten the language of the mother tongue, in this case the Slovak one

Monitoring DNA repair pathways in human induced pluripotent stem cells using a fluorescent molecular reporter.

Indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste (ang. induced pluripotent stem cells, iPSCs) są to komórki otrzymywane w wyniku reprogramowania komórek somatycznych czynnikami transkrypcyjnymi istotnymi dla utrzymania stanu pluripotencjalności. Ze względu na zdolność iPSCs do potencjalnie nielimitowanej liczby podziałów komórkowych oraz do różnicowania w komórki wszystkich trzech listów zarodkowych, tj. endodermy, mezodermy i ektodermy, stanowią one niezwykle przydatne narzędzie, zarówno w nauce, jak i w medycynie. Jednakże, aby potencjalne zastosowanie iPSCs u pacjentów było bezpieczne, a badania naukowe z ich użyciem miarodajne, niezbędne jest utrzymanie stabilności genetycznej tych komórek w hodowli. Ze stabilnością genetyczną iPSCs nieodłącznie związana jest ich zdolność do naprawy dwuniciowych pęknięć DNA (ang. double-strand breaks, DSB), jako, że uszkodzenia te mogą prowadzić nawet do śmierci komórek. Istnieją dwa główne mechanizmy naprawy DSB: homologiczna rekombinacja (ang. homologous recombination, HR) oraz niehomologiczne łączenie końców (ang. non-homologous end-joining, NHEJ). W przypadku HR, do naprawy DSB potrzebna jest sekwencja homologiczna, dzięki czemu naprawa jest bardziej dokładna. Z kolei w przypadku NHEJ, sekwencja homologiczna nie jest potrzebna, ale do sekwencji DNA mogą zostać wprowadzone małe insercje bądź delecje. Wykazano, że czynniki środowiskowe, takie jak temperatura czy stężenie tlenu w hodowli, mogą wpływać na częstość zachodzenia HR i NHEJ w iPSCs. Jednak w celu dokładnego zbadania tego zjawiska, konieczna jest odpowiednia metoda monitorowania szlaków naprawy DNA w iPSCs.W niniejszej pracy, wykorzystano fluorescencyjny reporter molekularny umożliwiający monitorowanie szlaków naprawy DNA w komórkach. W obrębie reportera, przy pomocy meganukleazy SceI indukowane są DSB, które następnie mogą być naprawione przy udziale HR bądź NHEJ. Wnioskowanie o częstości występowania tych szlaków w komórkach możliwe jest na podstawie fluorescencji komórek – zielonej, pochodzącej od białka wzmocnionej zielonej fluorescencji (ang. enhanced green fluorescent protein, EGFP) w przypadku zajścia HR, i czerwonej, pochodzącej od białka mCherry w przypadku naprawy DNA mechanizmem NHEJ. Funkcjonalność reportera została potwierdzona z zastosowaniem linii HEK293T. Wykazano, że komórki te naprawiają uszkodzenia DNA głównie z użyciem szlaku NHEJ (882-3331/105 komórek), a w znacznie mniejszym stopniu korzystają ze szlaku HR (5-7/105 komórek). W przypadku iPSCs, w eseju episomalnym nie udało się zaobserwować komórek wykazujących czerwoną lub zieloną fluorescencję. Aby możliwe było efektywne monitorowanie szlaków naprawy DNA w iPSCs w różnych warunkach środowiskowych, przygotowano dwie linie komórek iPS ze stabilnie wbudowanym fluorescencyjnym reporterem naprawy DNA w locus AAVS1, przy pomocy systemu CRISPR/Cas9 (ang. Clustered Regularly-Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR associated protein 9). Poprawność wbudowania konstruktu potwierdzono przy pomocy reakcji PCR (ang. polymerase chain reaction). DSB indukowano poprzez wprowadzenie do komórek plazmidu kodującego nukleazę SceI metodą nukleofekcji. Niestety, mimo skutecznej nukleofekcji, w liniach iPSCs ze stabilnie wbudowanym reporterem, również nie udało się zaobserwować zielonej lub czerwonej fluorescencji. Przyczyn może być kilka, m.in. wyciszenie epigenetyczne sekwencji promotora w obrębie reportera lub toksyczność nukleazy SceI. Jednakże w celu dokładniejszego zweryfikowania, na którym etapie funkcjonowania reportera dochodzi do nieprawidłowości, konieczne są dalsze badania.Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are obtained by reprogramming somatic cells with transcription factors essential for maintaining cell pluripotency. Due to the capacity of iPSCs to potentially unlimited number of cell divisions and to differentiation into the cells of all three germ layers: endoderm, mesoderm and ectoderm, they constitute an extremely useful tool in both science and medicine. However, in order to make the use of iPSCs in patients safe, and to obtain reliable results in scientific research, it is necessary to maintain genetic stability of iPSCs in culture. The genetic stability of iPSCs is inherently linked to their ability to repair double-strand breaks (DSBs), lesions which may lead to cell death. There are two main DSB repair pathways: homologous recombination (HR) and non-homologous end-joining (NHEJ). In case of HR, a homologous sequence is needed for DNA repair, leading to accurate reconstitution of DNA sequence. On the contrary, repair with NHEJ does not utilize homologous sequence, but introduces small insertions or deletions to the DNA. It has been shown that environmental factors, such as temperature or oxygen concentration in culture, can affect the frequency of HR and NHEJ in iPSCs. However, in order to thoroughly investigate this processes, an appropriate method of monitoring DNA repair pathways in iPSCs is necessary.This work describes the use of a fluorescent molecular reporter that allows monitoring DNA repair pathways in cells. DSBs are induced within the reporter by meganuclease SceI, and they may be repaired by HR or NHEJ mechanism. Frequency of pathways utilization can be monitored on the basis of cell’s fluorescence – green, coming from enhanced green fluorescent protein (EGFP) in case of HR and red, coming from mCherry protein in case of DNA repair by NHEJ.The functionality of DNA repair reporter was confirmed in HEK293T cells. It has been demonstrated that these cells repair DSBs mainly via NHEJ (882-3331/105 cells) and in minority via HR (5-7/105 cells), which was indicated by red and green fluorescence, respectively. In the case of iPSCs, functionality of the reporter failed to be confirmed in episomal essay.In order to effectively monitor DNA repair pathways in iPSCs under different environmental conditions, two iPS cell lines with stably integrated fluorescent molecular reporter at AAVS1 locus were generated, using the CRISPR/Cas9 (ang. Clustered Regularly-Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR associated protein 9) system. The correctness of construct integration was confirmed by PCRs (polymerase chain reactions). DSBs were induced by introducing the plasmid encoding SceI nuclease to the cells by nucleofection. Unfortunately, despite the success of nucleofection, functionality of the reporter stably integrated in iPSCs lines was not observed. There may be a few explanations, such as epigenetic silencing of promoter sequences within the reporter or toxicity of SceI nuclease. However, to verify which step in the process of monitoring DNA repair pathways in iPSCs is not functional, further research is needed