99 research outputs found
Ueber die Pathogenese der heterotopen Reizbildung unter dem Einflusse der extracardialen Herznerven
A Contribution to the Question of the Nervous and Muscular Substratum of the Muscle tone
GENETIC ENGINEERING OF PSEUDOMONAS PUTIDA TO BROADEN ITS METABOLIC CAPACITIES TOWARD GUAIACOL, A LIGNIN-RELATED AROMATIC COMPOUND
GENMANIPULATION AV PSEUDOMONAS PUTIDA
BREDDNING AV DESS METABOLISKA KAPACITET MOT GUAIACOL, EN LIGNINGRELATERADE AROMATISK FĂRENING
LISE-LOTTE KURĂ
Kuré L, Genmanipulation av Pseudomonas putida- Breddning av dess metaboliska kapacitet mot guajakol, en ligninrelaterad aromatisk förening. Examensarbete 15 högskolepoÀng, Malmö universitet: Fakulteten för hÀlsa och samhÀlle, Institutionen för Biomedicinsk Vetenskap, 2018.
Abstrakt: Lignin Àr en cellvÀggskomponent hos vÀxter och utgör nÀst efter cellulosa den mest förekommande organiska föreningen i naturen. Dess struktur Àr extremt komplex och utgörs av aromatiska monomerer. Detta gör lignin mycket attraktivt för miljövÀnlig kemikalietillverkning. Trots detta utnyttjas inte lignin pÄ en industriell nivÄ pÄ grund av dess komplexa heterogena struktur. Industrin har inte lyckats lösa problematiken med ligninets heterogenitet som genererar orena produkter i en bransch dÀr renhet Àr av stor vikt. Bakterier tros dock kunna utnyttja och producera vÀrdefulla och rena produkter ur lignin. Pseudomonas putida KT2440 har visat sig kunna anvÀnd och vÀxa i mÄnga olika ligninrelaterade aromatiska monomerer, och Àr sÄledes en god kandidat för bioproduktion. Dock kan bakterien inte utnyttja den vanligt förekommande monomeren guajakol. Bakterien saknar det enzym som krÀvs för att guajakol ska demetyleras till katekol, som dÀrefter utnyttjas som kolkÀlla för tillvÀxt. DÀremot har vissa bakterier visat pÄ denna typ av aktivitet via enzymet Cytokrom P450. PÄ grund av dess egenskaper Àr det önskvÀrt att behÄlla den förbÀttrade versionen P. putida EM42 som vÀrd. Syftet med projektet Àr att integrera gener som kodar för Cytokrom P450 i P. putida EM42 för att fÄ den att vÀxa pÄ och utnyttja guajakol som enda kolkÀlla. Gener frÄn sex bakterier som kodar för enzymet klipptes ut med restriktionsenzymer, amplifierades med PCR och ligerades i plasmid pSEVA424. DÀrefter transformerades de rekombinanta plasmiderna in i P. putida EM42 genom elektroporering. Restriktions- och sekvensanalyser utfördes innan korrekta transformanter odlades pÄ M9-medium och guajakol. Proverna sÀndes till UHPLC- analys, dÀr ingen konsumtion av guajakol detekterades. DÄ ingen tillvÀxt kunde urskiljas utfördes SDS-PAGE proteinanalys, Àven denna med negativt resultat. Slutsatsen Àr att trots utan tillvÀxt Àr detta ett framgÄngsrikt första steg i ett bredare arbete som kommer att ta lÀngre tid att uppnÄ. Konstruktionerna i detta projekt kommer att anvÀndas för fortsatta studier, med syfte att samla alla delar som Àr inblandade i demetyleringen av guajakol.
Nyckelord: Aromatiska monomerer, Cytokrom P450, guajakol, lignin valorisering, Pseudomonas putidaGENETIC ENGINEERING OF PSEUDOMONAS PUTIDA
TO BROADEN ITS METABOLIC CAPACITIES TOWARD GUAIACOL, A LIGNIN-RELATED AROMATIC COMPOUND
LISE-LOTTE KURĂ
Kuré L, Genetic engineering of Pseudomonas putida- To broaden its capacities towards guaiacol, a lignin related aromatic compound. Bachelor thesis 15 credits, Malmö University: Faculty of Health and Society, Department of Biomedical Science, 2018.
Abstract: Lignin is a cell wall component of plants and is next to cellulose the most abundant biopolymer in nature. It has a complex structure and consist of aromatic monomers. This makes lignin very attractive as a source of environmentally friendly chemical manufacturing. Despite this, lignin is scarcely used at an industrial scale because the industry has not managed to solve the problem of lignin depolymerization, which results in heterogeneous products in an industry where purity is of immense importance. However, bacteria show promising results in the production of valuable and clean products from lignin. Pseudomonas putida KT2440 has been shown to grow and exploit many different lignin related aromatic monomers and is thus a suitable candidate for bio-production. However, it cannot use the unaddressed monomer guaiacol. The bacterium lacks the enzyme required for guaiacol demethylation into catechol, which is then used as carbon source. However, some bacteria have shown this type of activity via a Cytochrome P450 enzyme. Because of its traits it is desirable to use the improved version P. putida EM42 as a chassis. The aim of the project is to integrate genes coding for Cytochrome P450 in P. putida EM42, enabling it to grow on guaiacol as the only carbon source. Genes from six bacteria coding for the enzyme were cut out with restrictions enzymes, amplified by PCR and ligated in plasmid pSEVA424. The recombinant plasmids were transformed into P. putida EM42 by electroporation. Restriction- and sequence analyses were performed before the correct transformants were grown on M9 medium and guaiacol. The samples were sent to UHPLC analysis, where no consumption of guaiacol was detected. As no growth could be discerned, SDS-PAGE protein analysis was performed, also with negative results. The conclusion is that, despite no growth this is a successful first step in a broader work frame that will take further time to achieve. The constructs in this work will be used for further studies, with the purpose of assembling all the elements involved in the demethylation of guaiacol.
Keywords: Aromatic monomers, Cytochrome P450, Lignin, guaiacol, Pseudomonas putida EM42, valorisation
- âŠ