Conception de fragments d'anticorps recombinants : Application à la neutralisation de toxines animales et bactériennes

Diplôme : Dr. d'Universit

Conception de fragments d'anticorps recombinants (application à la neutralisation de toxines animales et bactériennes)

The work undertaken during this PhD thesis consisted in the engeneering of therapeutic recombinant antibody fragments restricted to antibody V-domains. These molecules harbour numerous potential advantages for diagnostic and therapeutic applications in cancerology and infectiology. As an alternative to serotherapy, the first goal was to design a bivalent and bispecific recombinant antibody fragment that protects from the toxicity of a scorpion venom. The second goal consisted in designing recombinant scFvs and diabodies directed to the anthrax toxin and suitable for neutralization. These antibody fragments were also used to identify neutralizing mimotopes.Des fragments d anticorps recombinants à potentiel thérapeutique ont été conçus. Il s agit de petites molécules hautement diffusibles dans les tissus, adaptées à la neutralisation de toxines d origines animale (neurotoxines de scorpion) ou bactérienne (toxine charbonneuse).Les toxines de scorpions sont des polypeptides neurotoxiques de 30 à 70 résidus d acides aminés, agissant avec une spécificité élevée sur différents canaux ioniques des membranes des cellules excitables. La quasi-totalité du pouvoir toxique du venin de scorpion Androctonus australis, originaire du pourtour méditerranéen, lui est conféré par trois toxines, parmi les plus puissantes neurotoxines d origine animale (AahI, AahII et AahIII). Le seul traitement spécifique efficace est la sérothérapie basée sur l utilisation de fragments d anticorps polyclonaux hétérologues. Ce traitement n a pas connu d évolution significative depuis sa découverte et reste associé à de nombreux inconvénients : variabilité des lots, effets secondaires grâves et risques de transmission d agents pathogènes. Un fragment d anticorps bispécifique de type scFv en tandem (50 kDa) qui possède un site de reconnaissance antigénique dirigé contre la toxine AahI (ou AahIII) et un autre site dirigé contre la toxine AahII a été développé. Protéine recombinante produite en système procaryotique, cette molécule bispécifique conserve une haute affinité pour les toxines et présente la capacité de neutraliser à elle seule les effets toxiques du venin entier in vivo, dans des conditions expérimentales proches de celle d une envenimation naturelle. Les fragments d anticorps recombinants peuvent également avoir un intérêt pour la neutralisation de toxines bactériennes, celle du charbon en est un exemple. La maladie est une zoonose de distribution mondiale ayant pour agent étiologique Bacillus anthracis. Lorsqu elle est diagnostiquée suffisamment tôt, elle peut être traitée par antibiothérapie. Le plus souvent, les premiers signes cliniques échappent à la vigilance des personnes infectées et l antibiothérapie devient alors inefficace en raison de la trop grande quantité de toxine présente dans l organisme. L immunothérapie passive basée sur l utilisation d anticorps neutralisants la toxine pourrait être un traitement adjuvant efficace et complémentaire à l antibiothérapie. Des fragments d anticorps de primates non-humains (monovalent et bivalent), dirigés contre la toxine de Bacillus anthracis ont été conçus et caractérisés sur le plan structural et fonctionnel. Le rendement de production dans des bactéries recombinantes est élevé. Ils conservent leur activité de liaison et une affinité élevée pour l antigène. Un test de cytotoxicité in vitro a également montré que le scFv35PA83 est neutralisant. Une séquence mimotope de l épitope reconnu par ce scFv a été identifiée et pourrait avoir un potentiel vaccinal. Des souris immunisées avec le peptide d intérêt développent des anticorps anti-PA, neutralisants partiellement les effet létaux de la toxine dans un test de neutralisation in vitro. En parallèle, une méthode rapide, simple et générale a été développée permettant de cloner plus facilement l ADNc d un domaine variable fonctionnel de la chaîne légère (Analytical Biochemistry 349 (2006) : 159-161). En effet, la présence d un ARNm aberrant codant une région Kappa non fonctionnelle, exprimé par les cellules de myélome utilisées pour produire les hybridomes, rend souvent délicat le clonage de l ADNc correspondant au VL d un anticorps monoclonal.TOURS-BU Sciences Pharmacie (372612104) / SudocSudocFranceF

Etat des lieux sur la prise en charge des mucormycoses en 2013 (exemple de 2 cas cliniques)

Les mucormycoses sont des maladies fongiques dues à des champignons filamenteux de l Ordre des Mucorales (classe des Zygomycètes). Il s agit de moisissures terrestres cosmopolites, caractérisées notamment par la production de spores facilement dispersables. Comme en témoigne la littérature, l incidence de ces infections fongiques ne cesse d augmenter (+7,3% par an en France entre 2001 et 2010). Particulièrement fatales en l absence de traitement approprié, elles occupent aujourd hui le 3ème rang des infections fongiques opportunistes, après les candidoses et les aspergilloses. Après avoir fait une rapide description du Règne fongique et de la classe des Zygomycètes, ce manuscrit met l accent sur les Mucorales responsables des mucormycoses. Les principales formes cliniques de ces mycoses, leurs diagnostics clinique et biologique ainsi que les différents traitements sont présentés. Actuellement, seuls l amphotéricine B et le posaconazole, associés à un acte chirurgical, font l objet de recommandations dans la prise en charge de ces infections fongiques. Les autres antifongiques ne sont pas utilisables du fait de leur non-activité sur ces champignons filamenteux. D autres thérapeutiques émergent depuis quelques années et sont en cours d évaluation (oxygénothérapie hyperbare, association de plusieurs molécules antifongiques ou antibiotiques, utilisation des statines ou de chélateurs du fer ). Enfin, dans une dernière partie, deux cas cliniques sont présentés illustrant la complexité de la prise en charge des mucormycoses puis un outil de travail, conçu à partir des observations faites tout au long de ce travail, est proposé afin d aider à améliorer la prise en charge des patients au CHRU de Tours.TOURS-BU Sciences Pharmacie (372612104) / SudocSudocFranceF

Conseils officinaux en herpétologie (une nécessité face à la démocratisation de la terrariophilie)

L engouement observé ces dernières années pour les Nouveaux Animaux de Compagnie (NAC) s est accompagné d un accroissement du nombre de terrariophiles débutants et inexpérimentés. En effet, il est actuellement de plus en plus aisé d acquérir un reptile. Les élevages se développent en Europe et les équipements nécessaires à la pratique de la terrariophilie sont devenus beaucoup plus accessibles financièrement au grand public. Associée à la démocratisation de ces animaux dans les foyers, la prévalence des problèmes de santé des reptiles augmente. L objet de cette thèse est de fournir des informations aux pharmaciens d officine pour leur permettre de faire face à de nouvelles situations. Une enquête réalisée en 2013 auprès d équipes officinales de la région Centre démontre un manque de formation dans ce domaine et met en avant une réelle demande en la matière. Après avoir abordé la classification des reptiles, ainsi que leurs particularités anatomiques et physiologiques, nous présenterons les espèces les plus courantes en captivité et donnerons les conseils essentiels concernant leur détention et leur alimentation. Enfin nous décrirons les principales pathologies susceptibles d affecter ces animaux, leurs traitements et les principales mesures permettant de les prévenir.TOURS-BU Sciences Pharmacie (372612104) / SudocSudocFranceF

Conseil aux voyageurs, réalisé à l'officine, vis à vis des principales maladies parasitaires

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Les mucormycoses

National audienc

Dermatologie équine (les gales et apparentés)

Bien que les dermatoses équines soient des pathologies fréquentes, elles ne font que rarement l objet d une consultation vétérinaire. En effet, la majorité des propriétaires de chevaux mettent en place un traitement probabiliste pouvant bien souvent s avérer inapproprié. Une enquête concernant la prise en charge des dermatoses équines, réalisée auprès des centres équestres d Indre et Loire, confirme le sous diagnostic de ces pathologies par un professionnel. Il existe trois types de gales chez le cheval : les gales sarcoptique, psoroptique et chorioptique. Les deux premières sont assez rares en France, tandis que la dernière, fréquente, est souvent mal diagnostiquée. Ce manuscrit a pour objectifs de présenter ces pathologies cutanées équines ainsi que les examens indispensables à leur bon diagnostic. Les diagnostics différentiels possibles avec des dermatoses apparentées sont également abordés, ainsi que les différents protocoles de traitements, indiqués dans la prise en charge de ces pathologies. Enfin ce travail a permis de souligner la nécessité de proposer aux propriétaires équins un traitement simple et accessible indiqué dans la prise en charge de la gale chorioptique et d une autre dermatose, communément appelée la gale de boue , et dont le diagnostic différentiel entre les deux demeure compliqué. Ainsi une formule de pommade soufrée, traitante et cicatrisante, est proposée. Cette préparation peut être réalisée à l officine par des personnes qualifiées. La quantité de soufre utilisée permet d obtenir une concentration efficace à la fois contre Dermatophilus congolensis et les Chorioptes sp, sans pour autant avoir un effet irritant sur la peau.TOURS-BU Sciences Pharmacie (372612104) / SudocSudocFranceF

Cloning of the antibody kappa light chain V-gene from murine hybridomas by bypassing the aberrant MOPC21-derived transcript

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Anticorps recombinants : vers une nouvelle génération d'antivenins ?

Les envenimations scorpioniques constituent un problème de santé publique dans de nombreuses régions tropicales et sub-tropicales. La sérothérapie, découverte en 1894, reste le seul traitement spécifique, même si elle consiste toujours à utiliser des fragments d'anticorps polyclonaux hétérologues dont l'utilisation en thérapie humaine peut être associée à des effets secondaires graves. Aujourd'hui, l'ingénierie moléculaire permet de créer de nouveaux fragments d'anticorps recombinants de meilleure qualité que les sérums antivenimeux polyclonaux en termes d'homogénéité, d'activité spécifique et probablement de sécurité d'emploi. Plusieurs fragments d'anticorps simple-chaîne (scFv) neutralisant des toxines de scorpion ont été produits et caractérisés. Ces molécules constituent des modules de base pour concevoir des structures d'anticorps plus complexes : fragments d'anticorps monospécifiques multivalents (diabody, triabody) ou fragments d'anticorps bispécifiques (scFv en tandem). Certaines de ces molécules protègent les souris des effets létaux d'une envenimation expérimentale. Ainsi, les travaux en cours laissent entrevoir une nouvelle génération d'agents thérapeutiques, en dehors de toute considération d'ordre économique

Développement de fragments d’anticorps de formats originaux : ciblage de la cellule dendritique et pilotage de ses propriétés immune-modulatrices : Application à la toxoplasmose

National audienc