Mise au point de procédés de préparation d'oligosaccharides contenant du fucose à partir d'exopolysaccharides issus de souches mutées de bactéries du sol

Le L-fucose et les oligosaccharides contenant du L-fucose présentent des propriétés biologiques intéressantes notamment dans la prévention des métastases, dans la réaction d inflammation, dans le traitement des arthrites rhumatoïdes, dans la vaccination (antigènes) et dans le domaine cosmétique contre la déshydration de la peau. Une production du L-fucose tout comme des oligosaccharides contenant du L-fucose en vue de leur utilisation dans des thérapies, a poussé des nombreux laboratoires à un screening des organismes synthétisant des polysaccharides contenant du L-fucose. Notre travail, s est dans un premier temps sur la production et la caractérisation des polysaccharides des souches Sinorhizobium M5N1 cPRk290 notée N et Enterobacter notée Sc. Dans un second temps nous avons produit des oligosaccharides contenant du L-fucose dérivés des polysaccharides. Cette production d oligosaccharides a nécessité l utilisation de plusieurs méthodes (hydrolyse acide, hydrolyse thermique, production dans le milieu de culture et dégradation enzymatique). La méthode enzymatique a permis d obtenir des oligosaccharides de manière reproductible.L-fucose and oligosaccharides containing of L-fucose present interesting biological properties notably in the prevention of the metastases, in the reaction of inflammation, in the treatment of rheumatoid arthritics, in the vaccination (antigens) and in the cosmetic domain against the dehydration of the skin. A production of L-fucose as of oligosaccharides containing of L-fucose with the aim of their use in therapies, pushed numerous laboratories to a screening of organisms synthetizing polysaccharides containing of L-fucose. Our work, concerned first of all the production of the polysaccharides by Sinorhizobium M5N1 cPRK290 noted N and Enterobacter noted Sc strains, later these polysaccharides were characterized. And secondly we produced oligosaccharides containing of L-fucose from polysaccharides. This production of oligosaccharides required the use of several methods (acid hydrolysis, thermal hydrolysis, in the medium of culture and enzymatic degradation). The enzymatic method allows to obtain oligosaccharides in a reproducible way.AMIENS-BU Sciences (800212103) / SudocSudocFranceF

Increase of the ATP-dependent phosphoenolpyruvate carboxykinase activity in Sinorhizobium meliloti (Rhizobium meliloti) during hypothermic environmental conditions

International audienc

Etude des propriétés antimicrobiennes d'ologosaccharides cycliques naturels et fonctionnalisés (les cyclodextrines)

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ETUDE DU CONFINEMENT DE SINORHIZOBIUM (RHIZOBIUM) MELILOTI SUR L'EXPRESSION DE CARACTERES ET SUR LES TRANSFERTS DE PLASMIDES

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Les impuretés dans les produits sucriers isuus de la betterave (caractérisation et incidence sur la qualité du sucre)

Les produits sucriers de betterave contiennent des non-sucres qui ont été caractérisé et dont l évolution a été suivie au cours du process. De plus, l impact de la présence de certaines impuretés (polysaccharides ou colorants) a été étudié à différents stades du procédé sucrier. L effet de traitements spécifiques a également été étudié en réalisant le retrait d impuretés, ou en modifiant des paramètres de production. Ces travaux ont permis d affirmer la nocivité de colorants (caramels, PDAH, mélanoïdines) mais aussi de polysaccharides (pectines et dextranes). Le suivi d une microcuite a permis d observer le transfert d impuretés que nous avons caractérisées après extraction d un sucre de 2ème jet. Cette caractérisation, corrélée à celle des produits sucriers et des impuretés, a permis de proposer que les composés néfastes inclus dans lsucre de 2ème jet ne sont pas de haut poids moléculaire et qu ils correspondraient à un mélange de colorants et d oligosaccharides de DP<8.The sugar beet products contained non-sugars which were characterized and their composition evolution during the process was followed. Some of these (polysaccharides or colorants) thought to be harmful, were synthesised or directly obtained from sugar beet extracts. Their impact on the sucrose crystal quality was observed. The effect of specific treatment (extraction of impurities; modification of production parameters) on sugar beet products to the sucrose quality was studied. This work confirmed that colorants (caramels, PDAH, melanoïdins) and polysaccharides (pectins and dextrans) are harmful for the sucrose crystal quality. Crystallization performed in the laboratory allowed to observe the impurities transfer inside the crystal. These impurities were extracted and characterized. Our results indicate that harmful impurities are not high molecular weight compounds. Components included in the tested sugar correspond to a mixture of colorants but also to oligosaccharides DP<8.AMIENS-BU Sciences (800212103) / SudocSudocFranceF

Procédé d obtention d oligosaccharides anioniques (oligouronides et oligosaccharides sulfates) par dégradation enzymatique des polysaccharides d algues marines

La paroi de l algue verte Ulva lactuca contient un homopolymère d acides glucuroniques liés en b-(1®4) non sulfatés : le glucuronane et un deuxième polysaccharide sulfatés de structure complexe nommé ulvane. Dans le but de produire des oligoglucuronanes et des ligoulvanes, un procédé d extraction du glucuronane et des ulvanes a été mis au point. Dans un deuxième temps, nous avons cherché à produire des oligomères à partir des polysaccharides purifiés. La dégradation radicalaire s est avérée efficace pour dégrader le polymère d ulvane en molécules de masse molaire faible, mais elle ne nous a pas permis d obtenir les oligomères d ulvane. Nous avons donc recherché des microorganismes exprimant une activité dépolymérisante sur le polysaccharide d Ulva lactuca. La souche PEC2 a été isolée, elle est proche d Ochrobactrum triticii, elle exprime une activité glucuronane lyase (GL3) et une activité ulvane lyase (UL2). Les deux enzymes GL3 et UL2 dégradent respectivement les b-(1®4) glucuronanes et les a-(1®4), b-(1®4) rhamnoglucuronane sulfaté. L utilisation de ces deux nouvelles activités lyase a permis la production d une quantité importante de b-D-(4,5)-oligoglucuronanes et b-D-(4,5) ligorhamnoglucuronanes sulfatés par clivage du glucuronane et de l ulvane isolés d Ulva lactuca. Des oligomères de différents dp ont été purifiées par chromatographie liquide basse pression (exclusion stérique) et caractérisés par RMN 1H et ESI-Q/TOF-MS. Ces oligomères appliqués sur des plants de tomate ont induit l augmentation d activités enzymatiques associées aux mécanismes de défense naturelle des plantes contre des pathogènes.In the green algae Ulva lactuca the cell-wall contains two anionic polysaccharides, a homopolymer of glucuronic acid b-(1®4) linked called glucuronan and a sulphated heteropolymer called ulvan. In order to produce pure oligomers from the ulva polysaccharide extracts, a purification process was developed. Low molecular weight molecules were first obtained under a radical degradation, but no oligosaccharides were produced. In order to obtain such oligomers, a strain called PEC2 was selected. The strain closed to the Ochrobactrum triticii species was able to produce a glucuronan lyase (GL3) and an ulvan lyase (UL2). The GL3 extract allows the degradation of b-(1®4) glucuronans and the UL2 extract degrades a-(1®4), b-(1®4) sulfated rhamnoglucuronans. Various b-D-(4,5)-unsaturated oligoglucuronans and sulphated b-D-(4,5)-unsaturated oligorhamnoglucuronans with specific dp were produced and purified using low pressure liquid chromatography (size exclusion). Then they were analyzed by 1H NMR spectroscopy and ESI-Q/TOF-MS. These oligomers applied on tomato plants were shown to induce an increase of enzymatic activities known to be essential against plant pathogens.AMIENS-BU Sciences (800212103) / SudocSudocFranceF