Eye Development under the control of SRp55/B52-Mediated Alternative Splicing of eyeless

The genetic programs specifying eye development are highly conserved during evolution and involve the vertebrate Pax-6 gene and its Drosophila melanogaster homolog eyeless (ey). Here we report that the SR protein B52/SRp55 controls a novel developmentally regulated splicing event of eyeless that is crucial for eye growth and specification in Drosophila. B52/SRp55 generates two isoforms of eyeless differing by an alternative exon encoding a 60-amino-acid insert at the beginning of the paired domain. The long isoform has impaired ability to trigger formation of ectopic eyes and to bind efficiently Eyeless target DNA sequences in vitro. When over-produced in the eye imaginal disc, this isoform induces a small eye phenotype, whereas the isoform lacking the alternative exon triggers eye over-growth and strong disorganization. Our results suggest that B52/SRp55 splicing activity is used during normal eye development to control eye organogenesis and size through regulation of eyeless alternative splicing

Specificite du potentiel transformant de l'oncogene v-myb du virus de la myeloblastose aviaire (AMV) et mecanismes d'activation du proto-oncogene c-myb

SIGLECNRS T Bordereau / INIST-CNRS - Institut de l'Information Scientifique et TechniqueFRFranc

Etude des bases moléculaires de l'atrophie musculaire spinale

L'Atrophie Musculaire spinale (SMA) est une maladie neurodégénérative causée par des mutations du gène SMN1 et caractérisée par la dégénérescence sélective des motoneurones alpha de la moelle épinière. les mécanismes moléculaires de la SMA ne sont aps clairs. cependant, deux hypothèses ont été retenues:D'une part, que la déficience en SMN entraine une perturbation de la biogenèse des snRNPs spliceosomales individuelles et par conséquent des défauts d'épissage. pendant ma thèse, nous avons montré que la déficience en SMN provoquait une diminution des particules tri-snRNPs majeures amis surtout mineures et que cela avait des conséquences sur l'épissage d'un sous-groupe de pré-ARNm contenant des introns mineurs.D'autre part, que la déficience en SMN entraine des altérations de transport d'ARN dans les axones, essentiels pour la survie des motoneurones. A part l'ARNm de la beta-actine et l'ARNm de cpg15 récemment identifié, ceux qui pourraient être transportés par SMN n'ont pas été décrits. nous avons donc identifié les ARN interagissant avec les isoformes a-SMN et SMN-fl dans des cellules neuronales, et montré que certains de ces ARN cibles colocalisent avec SMN dans les axones, suggérant qu'elle est impliquée dans leur transport.Spinal Muscular Atrophy is a neurodegenerative disease caused by mutations in SMN1 gene. SMA is characterized by the loss of alpha-motoneurons of the spinal cord. However, the precise molecular mechanisms underlying the disease are still unkown. two hypotheses have been retained to explain SMA pathigenesis:In one hand, the fact that SMN deficiency leads to a perturbation of individual snRNPs biogenesis and consequently splicing defects. During my PhD, we have shown that SMN deficiency alters the levels of major, but mostly, minor tri-snRNPs. And that leads to splicing defects of a subset of pre-mRNA containing minor introns.In the other hand, that SMN deficiency causes alteration of axonal transport of RNAs crucial to motoneurons survival. Except beta-actin mRNA and the recently identified cpg mRNA, the RNA targets of SMN have not been described. We succeed to identify RNA targets of both a-SMN and SMN-fl isoformes in a neuronal cell line and colocalisation data of some of these targets suggested that SMN could be implicated in the transport of these RNAs.MONTPELLIER-BU Sciences (341722106) / SudocSudocFranceF

Régulation de l'épissage alternatif par des facteurs d'épissage de la famille des protéines SR dans des situations physiologiques ou pathologiques

Les protéines SR jouent un rôle crucial dans les processus de maturation des précurseurs d'ARNm, et plus particulièrement dans la régulation de l'épissage alternatif. Ce mécanisme permet la synthèse de multiples ARNm à partir d'un unique précurseur, et constitue un moteur essentiel de la diversité protéique chez les eucaryotes supérieurs. L'activité des protéines SR est régulée par la phosphorylation de leur domaine RS, riche en résidus arginines et sérines, par plusieurs familles de protéines kinases et dont l'ADN topoisomérase I (Topo I). En utilisant des cellules résistantes à un inhibiteur de la Topo I, nous avons observé que la résistance à la camptothécine est étroitement liée à l'extinction de l'expression de cette enzyme. L'absence de Topo I est corrélée à une hypophosphorylation des protéines SR et à des défauts d'épissage alternatif, ce qui suggère que l'activité kinase de la Topo I n'est pas redondante avec celle d'autres protéines et est nécessaire pour les processus d'épissage alternatif in vivo. Les protéines SR jouent un rôle essentiel au cours du développement, mais paradoxalement, leur fonction dans ce processus reste élusive. Chez la drosophile, la surexpression de diverses protéines SR, dans les disques imaginaux d'œil et dans le cerveau de larves, induit des défauts de développement de ces tissus. Nous avons identifié les ARNm associés à dASF/SF2 et à B52, et nous avons montré que la surexpression de ces deux protéines entraîne des altérations du profil d'épissage de certains d'entre eux impliqués, en particulier, dans le développement de l'œil et du cerveau. L'analyse du développement de ces deux tissus, au stade larvaire, a révélé que la surexpression de dASF/SF2 perturbe la différentiation de cellules de l'ommatidie, et que l'expression de B52-GFP interfère également avec le développement du cerveau. Les protéines SR régulent l'épissage des précurseurs d'ARNm en interagissant avec des séquences activatrices introniques ou exoniques, dont la fonction peut être altérée par des mutations, dans le cas de maladies génétiques. Nous avons étudié une mutation qui localisée dans l'intron 7 du gène E1a du complexe PDH, chez un patient atteint du syndrome de Leigh. Cette mutation créée une séquence spécifiquement reconnue par la protéine SC35 qui est responsable d'un épissage aberrant de l'ARNm E1aPDH à l'origine de la maladie. Nous avons montré que la réduction de l'expression de SC35 par ARN interférence permet de restaurer un épissage normal du gène E1aPDH dans des fibroblastes primaires de patients. Enfin, nous avons identifié des composés chimiques qui inhibent spécifiquement des évènements d'épissage alternatif dépendants d'une ou plusieurs protéines SR, in vitro et in vivo. De telles molécules pourraient ouvrir la voie à de nouvelles approches thérapeutiques pour traiter des pathologies humaines résultant de mutations génétiques qui affectent les processus d'épissage.SR proteins play a crucial role in messenger RNA maturation processes, and more precisely in the regulation of alternative splicing. This mechanism allows the synthesis of multiple mRNAs from a single precursor and is a major source of proteomic diversity. The activities of SR proteins are regulated by phosphorylation of the RS domain, rich in arginine and serine residues, by several protein kinases, including the DNA topoisomerase I (Topo I). Using cells resistant to a Topo I inhibitor, we have shown that resistance to camptothecin is correlated to the downregulation of the expression of this enzyme. Topo I depletion induces the hypophosphorylation of SR proteins as well as alternative splicing alterations, suggesting thereby that the kinase activity of Topo I is not redundant and is necessary for alternative splicing processes in vivo. As key splicing regulators, SR proteins also play an essential role during development, even if this function remains elusive. In drosophila, the overexpression of several SR proteins, in larval eye imaginal discs and brain, is responsible for developmental alterations of both tissues. We have identified candidate target mRNAs associated to dASF/SF2 and B52, and we have shown that overexpression of both SR proteins induces splicing patterns alterations for some of these mRNAs that are involved in eye and brain development. The analysis of both tissues, at the larval stage, revealed that overexpression of dASF/SF2 impairs cell differentiation within the ommatidia, when the overexpression of B52 also alters brain development. SR proteins regulate the splicing of mRNA precursors through binding of intronic or exonic enhancer sequences, which can be altered by mutations in genetic diseases. We have investigated the consequences of a mutation, located in the intron 7 of the PDH complex E1a subunit encoding gene, in a case of Leigh syndrome. This mutation creates an enhancer sequence specific for SC35, and is responsible for an aberrant splicing pattern of the E1aPDH mRNA causing the disease. Using RNA interference, we were able to restore the normal splicing pattern of the E1aPDH gene by reducing the expression level of SC35. At last, we have characterized small chemical molecules that specifically inhibit, both in vitro and in vivo, alternative splicing events regulated by one or more SR protein. Such molecules open exciting perspectives concerning therapeutical approaches to treat human diseases resulting from genetic mutations that impair splicing processes.MONTPELLIER-BU Sciences (341722106) / SudocSudocFranceF

Catalogue Raisonné des variétés d'Amphibole et de Pyroxène provenant du Wolfsberg en Bohème près de Czerlochin

CATALOGUE RAISONNÉ DES VARIÉTÉS D'AMPHIBOLE ET DE PYROXÈNE PROVENANT DU WOLFSBERG EN BOHÈME PRÈS DE CZERLOCHIN Catalogue Raisonné des variétés d'Amphibole et de Pyroxène provenant du Wolfsberg en Bohème près de Czerlochin ([1]r) Titelseite ([1]r) Text (unvollständig) (173

Specific splicing defects in S. pombe carrying a degron allele of the Survival of Motor Neuron gene

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