Interaction between stem cells from amniotic membrane and canine mammary tumor in vitro

Tumores nas glândulas mamárias caninas representam a neoplasia mais comum em cadelas. Este tipo de tumor em cadelas é muito semelhante quanto ao comportamento biológico, resposta a agentes citotóxicos e características histológicas comparadas aos tumores apresentados em humanos, mas sua taxa de incidência é três vezes maior que em mulheres. Em relação aos tratamentos, muitas vezes é necessária a utilização da quimioterapia para erradicar metástases, no entanto, a maioria dos tumores caninos é apenas moderadamente sensível à quimioterapia. Nesse contexto, o atual cenário favorece ensaios terapêuticos préclinicos e pesquisas voltadas para novos tratamentos anti-câncer. Nesse sentido, o uso de células-tronco amnióticas tem se destacado neste campo. Desta forma, caracterizamos células de membrana amniótica canina, onde verificamos que estas apresentavam expressão para marcadores de células mesenquimais. Além disso, apresentaram capacidade de diferenciação em linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e, quando injetadas in vivo, não apresentaram potencial tumorigênico. Posteriormente, avaliamos a matriz extracelular de carcinomas mamários canino do tipo tubular e sólido. Verificamos que o carcinoma sólido apresentou maior grau de malignidade devido a suas características histológicas e com os componentes presentes em sua matriz extracelular. Por fim, avaliamos os efeitos do tratamento com doxorrubicina (DOXO) em associação com células-tronco de membrana amniótica canina (AMC) sobre células de carcinoma inflamatório mamário canino (IPC-366), e células de carcinoma sólido mamário canino (TCM). Para isso, quatro grupos experimentais foram analisados: grupo controle sem tratamento; grupo I com DOXO, grupo II com AMC e grupo III associação de DOXO com AMC. Verificamos que nas células IPC-366, o grupo associação de DOXO com AMC em células apresentou melhores resultados em relação à redução do crescimento celular e na expressão de proteínas relacionadas à proliferação e angiogênese. Já nas células TCM verificamos que o tratamento com células AMC, sendo ou não associada à DOXO, possui a capacidade de prender as células no ciclo celular na fase de repouso fazendo com que as mesmas apresentem redução em seu crescimento e proliferação celular.The tumors on the canine mammary glands represent the most common neoplasm in bitches. This type of tumor in bitches responds to cytotoxic agents in a very similar biological way when compared to tumors presented in humans. Besides that, they have the same histological characteristics, but its incidence rate is three times higher in bitches than in women. Regarding treatments, chemotherapy is often required to eradicate metastases, however, most canine tumors are only moderately sensitive to chemotherapy. In this context, the current scenario favors pre-clinical therapeutic trials and research aimed at new anticancer treatments. In this sense, the use of amniotic stem cells has been outstanding in this field. So, we characterized canine amniotic membrane cells. At this characterization we verified that they had expression for markers of mesenchymal cells, and present differentiation capacity in osteogenic, adipogenic and chondrogenic lines. When injected in vivo, did not present tumorigenic potential. Subsequently, we evaluated the extracellular matrix of canine mammary carcinomas of the tubular and solid type. We verified that solid carcinoma showed a higher degree of malignancy due to its histological characteristics and the components present in its extracellular matrix. Finally, we evaluated the effects of doxorubicin treatment (DOXO) in combination with canine amniotic membrane (AMC) stem cells on canine mammary inflammatory carcinoma cells (IPC-366), and solid canine mammary carcinoma cells. For this, four experimental groups were analyzed: control group without treatment; group I with DOXO, group II with AMC and group III association of DOXO with AMC. We found that at the IPC-366 cells, the association group of DOXO with AMC in cells presented better results regarding to the reduction of cell growth and expression of proteins related to proliferation and angiogenesis. In the TCM cells, we found that treatment with AMC cells, whether associated with DOXO, can bind the cells in the cell cycle during the resting phase, promoting the cell growth decrease and proliferation

Phenotype and multipotentiality of progenitor cells from the Rabbit amniotic membrane (Oryctolagus cuniculus)

As células tronco possuem a capacidade de auto renovação ilimitada e de se manterem indiferenciadas durante um período prolongado de tempo, até se diferenciarem em uma linhagem celular específica. Devido as dificuldades encontradas na utilização de células embrionárias por questões éticas, de segurança e histocompatibilidade e a limitada plasticidade das células tronco adultas, as células tronco fetais, derivadas de tecidos extraembrionários, aparecem no cenário terapêutico como uma alternativa promissora. Uma vez que apresentam alta capacidade de proliferação e expansão in vitro, além de sua característica imunogênica, por se encontrarem na interface materno fetal. Por conta destas características, a membrana amniótica surgiu como uma nova e importante fonte de células tronco em diferentes espécies. Neste trabalho, foram utilizados 8 fetos de coelhos para a coleta da membrana amniótica. A membrana foi isolada pela técnica de explante, as amostras foram cultivadas em meio DMEM-HIGH, e posteriormente criopreservadas nas passagens P4 e P8 para realizar os experimentos. Em cultivo, essas células apresentaram aderência a placa, alta capacidade de proliferação e morfologia semelhante à fibroblastos. Na caracterização imunofenotípica, houve expressão de marcadores de citoesqueleto, de células mesenquimais, proliferação, pluripotência e para precursores de células hematopoiéticas, embora não tenha ocorrido a expressão de marcadores de células hematopoiéticas (CD-45) e de células precursoras neuronais. Quando induzidas a diferenciação in vitro, as células amnióticas tiveram capacidade de se diferenciarem nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica. Além disso, quando injetadas em camundongos nude, não foi verificada a formação de tumor. Nossos resultados demostram que células de membrana amniótica de coelho podem ser consideradas células tronco mesenquimais com possibilidade de serem utilizadas no futuro na terapia celularStem cells are capable of unlimited self renewal and to remain undifferentiated for a prolonged period of time up to differentiate into a specific cell lineage. Due to the difficulties in the use of embryonic cells due ethical reasons, security and histocompatibility, and in the other hands, the limited plasticity of adult stem cells, fetal stem cells, derived from extraembryonic tissues, appear in the therapeutic setting as a promising alternative. They have high capacity of proliferation and in vitro expansion, as well as immunogenic properties, since they are at the maternal-fetal interface. Due to these characteristics, the amniotic membrane has emerged as an important new source of stem cells in different species. In this work, we used 8 fetuses of rabbits to collect amniotic membrane. The membrane was isolated by the explant technique. Samples were cultured in DMEM-HIGH, and cryopreserved in the passages P4 and P8 in order to perform the experiments. In culture, these cells exhibited adhesion to the dishes, high proliferative capacity and fibroblast-like morphology. In immunophenotypic characterization, there was expression of markers related to cell cytoskeleton, mesenchymal stem cells, proliferation, pluripotency, and hematopoietic precursor cells. And there was no expression of hematopoietic cell markers (CD-45) and neuronal precursor cells. When induced to in vitro differentiation, the amniotic cells were able to differentiate in osteogenic, adipogenic and chondrogenic lineages. Furthermore, when injected into nude mice, tumor formation has not been verified. Our results demonstrate that rabbit amniotic membrane cells can be considered mesenchymal stem cells with possibility to be used in the future in cell therap

Interaction between stem cells from amniotic membrane and canine mammary tumor in vitro

Tumores nas glândulas mamárias caninas representam a neoplasia mais comum em cadelas. Este tipo de tumor em cadelas é muito semelhante quanto ao comportamento biológico, resposta a agentes citotóxicos e características histológicas comparadas aos tumores apresentados em humanos, mas sua taxa de incidência é três vezes maior que em mulheres. Em relação aos tratamentos, muitas vezes é necessária a utilização da quimioterapia para erradicar metástases, no entanto, a maioria dos tumores caninos é apenas moderadamente sensível à quimioterapia. Nesse contexto, o atual cenário favorece ensaios terapêuticos préclinicos e pesquisas voltadas para novos tratamentos anti-câncer. Nesse sentido, o uso de células-tronco amnióticas tem se destacado neste campo. Desta forma, caracterizamos células de membrana amniótica canina, onde verificamos que estas apresentavam expressão para marcadores de células mesenquimais. Além disso, apresentaram capacidade de diferenciação em linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e, quando injetadas in vivo, não apresentaram potencial tumorigênico. Posteriormente, avaliamos a matriz extracelular de carcinomas mamários canino do tipo tubular e sólido. Verificamos que o carcinoma sólido apresentou maior grau de malignidade devido a suas características histológicas e com os componentes presentes em sua matriz extracelular. Por fim, avaliamos os efeitos do tratamento com doxorrubicina (DOXO) em associação com células-tronco de membrana amniótica canina (AMC) sobre células de carcinoma inflamatório mamário canino (IPC-366), e células de carcinoma sólido mamário canino (TCM). Para isso, quatro grupos experimentais foram analisados: grupo controle sem tratamento; grupo I com DOXO, grupo II com AMC e grupo III associação de DOXO com AMC. Verificamos que nas células IPC-366, o grupo associação de DOXO com AMC em células apresentou melhores resultados em relação à redução do crescimento celular e na expressão de proteínas relacionadas à proliferação e angiogênese. Já nas células TCM verificamos que o tratamento com células AMC, sendo ou não associada à DOXO, possui a capacidade de prender as células no ciclo celular na fase de repouso fazendo com que as mesmas apresentem redução em seu crescimento e proliferação celular.The tumors on the canine mammary glands represent the most common neoplasm in bitches. This type of tumor in bitches responds to cytotoxic agents in a very similar biological way when compared to tumors presented in humans. Besides that, they have the same histological characteristics, but its incidence rate is three times higher in bitches than in women. Regarding treatments, chemotherapy is often required to eradicate metastases, however, most canine tumors are only moderately sensitive to chemotherapy. In this context, the current scenario favors pre-clinical therapeutic trials and research aimed at new anticancer treatments. In this sense, the use of amniotic stem cells has been outstanding in this field. So, we characterized canine amniotic membrane cells. At this characterization we verified that they had expression for markers of mesenchymal cells, and present differentiation capacity in osteogenic, adipogenic and chondrogenic lines. When injected in vivo, did not present tumorigenic potential. Subsequently, we evaluated the extracellular matrix of canine mammary carcinomas of the tubular and solid type. We verified that solid carcinoma showed a higher degree of malignancy due to its histological characteristics and the components present in its extracellular matrix. Finally, we evaluated the effects of doxorubicin treatment (DOXO) in combination with canine amniotic membrane (AMC) stem cells on canine mammary inflammatory carcinoma cells (IPC-366), and solid canine mammary carcinoma cells. For this, four experimental groups were analyzed: control group without treatment; group I with DOXO, group II with AMC and group III association of DOXO with AMC. We found that at the IPC-366 cells, the association group of DOXO with AMC in cells presented better results regarding to the reduction of cell growth and expression of proteins related to proliferation and angiogenesis. In the TCM cells, we found that treatment with AMC cells, whether associated with DOXO, can bind the cells in the cell cycle during the resting phase, promoting the cell growth decrease and proliferation

Variação nos tipos de irrigação do nodo sinoatrial em cães de diferentes raças

RESUMO: Considerando a heterogeneidade anatômica e eletrofisiológica do nodo sinoatrial para a geração e propagação do potencial de ação, bem como as particularidades relacionadas a origem da sua irrigação sanguínea, este trabalho teve como objetivo analisar o comportamento das artérias envolvidas na irrigação do nodo sinoatrial em cães realizando uma análise descritiva e comparativa entre diferentes raças estudadas, detalhando a origem, o percurso e a ramescência dos vasos, assim como a eventual ocorrência de anastomoses. Ao todo analisamos resultados obtidos em 240 corações, os quais foram fixados em solução de formalina 10% e submetidos a diafanização de Spalteholz. A irrigação deste ocorre mediante colaterais oriundos do ramo circunflexo direito ou ramo circunflexo esquerdo, mostrando particularidades diferentes para cada raça. Assim, predominantemente, nas raças ora estudadas a irrigação arterial do nodo sinoatrial depende exclusivamente (63,6%), ou de anastomoses de colaterais da artéria coronária direita, havendo também participação dos ramo proximal atrial direito e intermédio atrial direito. Menos frequentemente (15,4%) o suprimento sanguíneo ocorre exclusivamente por conta do ramo proximal atrial esquerdo, oriundo do ramo circunflexo da artéria coronária esquerda. Os dados aqui apresentados sobre a origem da irrigação sanguínea do nodo sinoatrial e a ramescência dos vasos envolvidos nesta tarefa representam conhecimento fundamental para o desenvolvimento da clínica-cirúrgica em cães, da patologia e trabalhos de natureza experimental

Phenotype and multipotency of rabbit (Oryctolagus cuniculus) amniotic stem cells

Abstract Background Stem cells are capable of unlimited self-renewal and are able to remain undifferentiated for extended periods of time prior to their differentiation into specific cell lineages. Because of the issues (ethical and religious) involved in the use of embryonic stem cells and the limited plasticity of adult stem cells, an alternative cell source could be foetal stem cells derived from extra-embryonic tissue, which are highly proliferative, grow in vitro and possess interesting immunogenic characteristics. As a result, the amniotic membrane of several species has been studied as an important new source of stem cells. Methods Here, we cultured and characterized mesenchymal progenitor cells derived from the rabbit amniotic membrane, and investigated their differentiation potential. In total, amniotic membranes were collected from eight rabbit foetuses and were isolated by the explant technique. The obtained cells were cultured in DMEM-HIGH glucose and incubated at 37 °C in a humidified atmosphere with 5% CO2. Results The cells adhered to the culture plates and showed a high proliferative capacity with fibroblast-like morphologies. The cells showed a positive response for markers for the cytoskeleton, mesenchymal stem cells and proliferation, pluripotency and haematopoietic precursor stem cells. However, the cells were negative for CD45, a marker of haematopoietic cells. Furthermore, the cells had the capacity to be induced to differentiate into osteogenic, adipogenic and chondrogenic lineages. In addition, when the cells were injected into nude mice, we did not observe the formation of tumours. Conclusions In summary, our results demonstrate that multipotent mesenchymal stem cells can be obtained from the rabbit amniotic membrane for possible use in future cell therapy applications

Esqueletogênese em punaré (Thrichomys laurentinus- Rodentia, Echimyidae)

Resumo: O objetivo deste estudo foi descrever o desenvolvimento do esqueleto do punaré (Thrichomys laurentinus). Para tanto, foram utilizados 11 embriões e 12 fetos em diferentes estágios de desenvolvimento, sendo divididos em 4 grupos de acordo com o período gestacional. As amostras foram obtidas no Centro de Multiplicação de Animais Silvestres da Universidade Federal Rural do Semi-Árido, Mossoró-RN, Brasil. Após fixados em formol (10%) ou glutaraldeído (2,5%), foi realizada a analise morfológica com auxílio de lupa, sendo as características macroscópicas fotodocumentadas. Análises de raios-x e coloração por alizarina red foram realizadas para melhor compreensão do desenvolvimento ósseo. Nas análises de raio-x os embriões não apresentaram nenhuma radiopacidade, ao contrário dos fetos que apresentavam radiopacidade gradual ao longo dos grupos. No grupo II houve aumento de radiopacidade na região da coluna vertebral e das regiões mandibular e maxilar. No grupo III a radiopacidade estava aumentada nos membros pélvicos, nas costelas e na região frontal e no grupo IV nos membros torácicos e nas regiões occipital, temporal e frontal do crânio. Tais características foram confirmadas pelas analises histológicas e pela técnica de Alizarina Red. Com isso podemos concluir que o conhecimento acerca da embriologia do sistema ósseo normal é fundamental para o entendimento dos efeitos adversos causados pela nutrição e uso de drogas durante o desenvolvimento

Use and preservation methods of bone grafts in small animals

The present review describes the main characteristics of bone grafts used in small animals. Bone grafts are tissues without vasculature, which facilitate the production of new bone cells with osteogenic and osteoinductive factors that lead to the differentiation of cells and structural support for bone marrow. The transplant of a graft is followed by three stages: osteogenesis, or the formation of new bone; osteoinduction, which is the differentiation of cells; and osteoconduction, the process of growth of mesenchymal cells and capillaries that results in new bone formation. The composition of bone grafts may include spongy bone, cortical bone, cortical-spongy bone, cartilage or bone marrow. Grafts can also be classified according to their origin, being autogenous tissue when they are transplanted from the same individual, allogenous (homologous) when originating from another individual of the same species, and xenogenous when obtained from a different species