Diagnosticul atrofiei musculare spinale prin metoda qPCR

Background. Spinal muscular atrophy (SMA) is a progressive neuromuscular disease inherited in an autosomal recessive way. The prevalence of SMA in the RM constitutes 8.43 ±0,15:100000 population. 95% of SMA is caused by deletion of exon 7 of SMN1. In carrier couples there is a 25% chance of offspring with SMA. Objective of the study. Diagnosis of SMA trough qPCR method (caused by deletion of exon 7 SMN1) in Human Molecular Genetics Lab. This will reduce the time of diagnosis and offer the possibility to identify the carriers of deletion. Material and Method. 60 DNAs representing 15 couples from control group and 10 families (mother, father and child affected or suspected) were diagnosed for determining the status of exon 7 SMN1 by qPCR method, melting curve (2 replicates for SMN1 exon 7, 1 replicate for the ALB exon 12). The DNA concentration was measured by spectrophotometry. EvaGreen was used as a DNA-binding dye. Results. Diagnosis of SMA is available through different methods. The molecular genetic diagnosis by PCR-RFLP is expensive and time consuming than qPCR method. For all DNA samples, amplification occurred for both exon 12 ALB and exon 7 SMN1. According to the melting curves, In families with history of SMA 9 DNAs with heterozygous status were identified and 7 DNA with exon deletion 12 have the status normal for exon 7 gene SMN1 and for 2 DNAs the reaction did not take place. For 22 persons from control group the exon7 SMN1 was determined to be present and for 8 persons was determined heterozygous status (5 women and 3 men). Among those who are heterozygous, 2 people form the same couple. Conclusion. Considering the presence of treatment the diagnosis as soon as possible is needed and QPCR is an effective method for this: prenatal for families in which the history of SMA is already present, for newborns (newborn screening) and even in the family planning process (carrier screening). Introducere. Amiotrofia spinală (AMS) este o boală neuromusculară progresivă, moștenită autosomalrecesiv. Prevalența SMA în RM constituie 8,43±0,15:100000 populație. 95% din AMS este cauzată de deleția exonului 7 a genei SMN1. În cuplurile purtătoare de mutație există o șansă de 25% de descendenți cu SMA. Scopul lucrării. Diagnosticul prin qPCR a AMS (cauzată de deleția exonului 7 SMN1) în Laboratorul de genetică moleculară umană. Metoda reduce timpul de diagnostic și oferă posibilitatea de a identifica purtătorii de mutație. Material și Metode. 60 de ADN-uri reprezentând 15 cupluri din grupul de control și 10 familii (mamă, tată și copil afectat sau suspectat) au fost diagnosticate pentru a determina starea exonului 7 SMN1 prin metoda qPCR, melting curve (2 teste per ADN pentru SMN1 exon 7, 1 test pentru ALB exon 12). Concentrația de ADN a fost stabilită prin spectrofotometrie. EvaGreen a fost utilizat ca DNA-binding dye. Rezultate. Diagnosticul SMA este disponibil prin diferite metode. Diagnosticul molecular genetic prin PCR-RFLP este costisitor și consumă mai mult timp decât metoda qPCR. Pentru toate probele de AND (în afară de 2) amplificarea a avut loc atât pentru exonul 12 ALB, cât și pentru exonul 7 SMN1. Conform melting curve, pentru 22 de persoane din grupul de control, a fost determinată prezența exonului 7 SMN1 și pentru 8 persoane a fost determinat statutul heterozigot (5 femei și 3 bărbați). Printre cei care sunt heterozigoți, 2 persoane formează același cuplu. În familiile cu istoric de SMA, 9 ADN-uri au fost identificate cu statut heterozigot și 7 ADN cu deleția exonului. 12 ADN au statutul normal. Concluzii. Odată cu apariția tratamentului pentru SMA, este necesar diagnosticul rapid, iar QPCR este o metodă eficientă: în perioada prenatală pentru familiile cu istoric de SMA, pentru nou-născuți (screening nou-născut) și chiar în procesul de planificare familială (screening al purtătorului)

IMPLEMENTATION OF THE PILOT NEONATAL GENETIC SCREENING OF SPINAL MUSCULAR ATROPHY

Universitatea de Stat de Medicină şi Farmacie „Nicolae Testemiţanu”, Chişinău, Republica MoldovaIntroducere. Atrofia musculară spinală este o patologie neuromusculară ereditară, cauzată de mutații în gena SMN1, fiind principala cauză genetică a mortalității infantile. Detectarea timpurie a SMA prin screening-ul nou-născutului (NBS) este esențială pentru prevenirea afectării ireversibile prin selectarea tratamentului și pentru asigurarea unei asistențe adecvate. Scopul lucrării. Scopul studiului este prezentarea implementării screening-ului genetic pilot pentru atrofia musculară spinală (SMA). Material și metode. În cadrul Laboratorului de Genetică Moleculară Umană al IMC a fost implementat un screening genetic de tip pilot, bazat pe un algoritm pentru implementarea screening-ului mutațiilor asociate SMA, care include colectarea probelor de sânge pe carduri din hârtie de filtru colectate de la nou-născuți și analiza acestora prin intermediul metodelor bazate pe genetica moleculară cum ar fi PCR în timp real și MLPA. Rezultate. Au fost implementate metodele molecular genetice necesare dintre care metoda PCR în timp real, pentru care au fost elaborate sonde și matrițe specifice, de asemenea a fost utilizat un set comercial pentru comparația rezultatelor. A fost implementată metoda MLPA care are ca scop confirmarea și aprecierea numărului copiilor genelor SMN1/SMN2. Totodată, la momentul actual au fost aprobate design-ul și protocolul de cercetare pentru această inițiativă. Au fost elaborate consimțământul și formularul de acceptare pentru confirmarea acceptării participării la studiu, care a fost aprobat de către Comitetul de Etică al Cercetării al USMF „Nicolae Testemițanu”. Au fost colectate 250 probe de pete de sânge de la nou-născuți, 75 de probe fiind deja supuse screening-ului genetic. Pentru nici o probă analizată nu a fost declarat statut de suspect pentru SMA. Concluzii. Screening-ul nou-născutului poate detecta pacienții afectați de SMA înainte de apariția simptomelor și poate permite intervenția terapeutică precoce. Inițiativa de implementare a algoritmului pentru screening, în cadrul IMC, vine în suportul evaluării perspectivei acestuia prin aprecierea fezabilității și rentabilității sale pentru Republica Moldova.Background. Spinal muscular atrophy is an inherited neuromuscular pathology caused by mutations in the SMN1 gene and represents the main genetic cause of infant mortality. Early detection of SMA through newborn screening (NBS) is essential for preventing irreversible damage by selecting appropriate treatment and ensuring adequate follow-up. Objective of the study. The aim of the study is to present the implementation of a pilot genetic screening for spinal muscular atrophy (SMA). Material and methods. Within the Laboratory of Human Molecular Genetics at the IMC, a pilot genetic screening has been implemented, based on an algorithm for the implementation of SMA-associated mutation screening. This includes collecting blood samples on filter paper cards from newborns and analyzing those using molecular genetic methods such as real-time PCR and MLPA. Results. The necessary molecular genetic methods, including real-time PCR, were implemented, with specific probes and arrays developed for this purpose. Additionally, a commercial set was used for result comparison. The MLPA method was also implemented to confirm and assess the copy number of SMN1/SMN2 genes. Currently, the research design and protocol for this initiative have been approved. In addition, informed consent and acceptance forms were developed and approved by the Research Ethics Committee of the Nicolae Testemițanu University to confirm participation in the study. A total of 250 blood spot samples were collected from newborns, with 75 samples already subjected to genetic screening. None of the analyzed samples were declared suspected of SMA. Conclusion. Newborn screening can detect SMA-affected patients before the onset of symptoms, allowing for early therapeutic intervention. The implementation of the screening algorithm at IMC supports the assessment of its feasibility and cost-effectiveness for the Republic of Moldova

Diagnosis of spinal muscular atrophy through qPCR method

IMSP Institutul Mamei și Copilului, Chișinău, Republica Moldova, Congresul consacrat aniversării a 75-a de la fondarea Universității de Stat de Medicină și Farmacie „Nicolae Testemițanu” din Republica Moldova, Ziua internațională a științei pentru pace și dezvoltareIntroduction. Spinal muscular atrophy (SMA) is a progressive neuromuscular disease inherited in an autosomal recessive way. The prevalence of SMA in the RM constitutes 8.43 ±0,15:100000 population. 95% of SMA is caused by deletion of exon 7 of SMN1. In carrier couples there is a 25% chance of offspring with SMA. Purpose. Diagnosis of SMA trough qPCR method (caused by deletion of exon 7 SMN1) in Human Molecular Genetics Lab. This will reduce the time of diagnosis and offer the possibility to identify the carriers of deletion. Material and methods. 60 DNAs representing 15 couples from control group and 10 families (mother, father and child affected or suspected) were diagnosed for determining the status of exon 7 SMN1 by qPCR method, melting curve (2 replicates for SMN1 exon 7, 1 replicate for the ALB exon 12). The DNA concentration was measured by spectrophotometry. EvaGreen was used as a DNA-binding dye. Results. Diagnosis of SMA is available through different methods. The molecular genetic diagnosis by PCR-RFLP is expensive and time consuming than qPCR method. For all DNA samples, amplification occurred for both exon 12 ALB and exon 7 SMN1. According to the melting curves, in families with history of SMA 9 DNAs with heterozygous status were identified and 7 DNA with exon deletion 12 have the status normal for exon 7 gene SMN1 and for 2 DNAs the reaction did not take place. For 22 persons from control group the exon7 SMN1 was determined to be present and for 8 persons was determined heterozygous status (5 women and 3 men). Among those who are heterozygous, 2 people form the same couple. Conclusions. Considering the presence of treatment the diagnosis as soon as possible is needed and QPCR is an effective method for this: prenatal for families in which the history of SMA is already present, for newborns (newborn screening) and even in the family planning process (carrier screening)

Particularitățile evolutive ale accidentului vascular cerebral la copiii de vârstă mică în urma traumatismului cranio-cerebral: caz clinic

Ischemia ganglionilor bazali ca o consecință a traumatismului cranio-cerebral la copii este un fenomen rar întâlnit

Спинальная мышечная атрофия: новости и перспективы

Institute of Mother and Child, Republic of MoldovaIntroducere. Atrofia musculară spinală (SMA) este o boală neuromusculară progresivă moștenită recesiv autozomal. Boala este cauzată de mutații care apar în gena SMN1 (Survival Motor Neuron) și se consideră că severitatea sa este modulată de gene precum SMN2, NAIP (Proteina Inhibitoare Neoponală) sau GTF2H2 (General Transcription Factor IIH Subunitate 2) Material și metode. Diagnosticul pentru maladia SMA este disponibil prin diferite metode. Diagnosticul genetic molecular este efectuat prin PCR-RFLP, dar mai detaliat și considerat ca fiind standard de aur este tehnica MLPA. Diagnosticul se efectuează la persoanele care prezintă simptome, dar și înainte de apariția lor. Astfel, diagnosticul poate fi pus cât mai curând posibil, de exemplu, prenatal pentru familiile în care s-au născut deja copii cu SMA, pentru nou-născuți (screeningul nou-născutului) și chiar în procesul de planificare familială (screening al purtătorilor). Diagnosticul diferențial al SMA este complicat și necesită luarea în considerare a multor boli cu simptome similare. Rezultate. În baza de date a Laboratorului sunt înregistrați 131 de pacienți diagnosticați cu SMA. Până în 2016, tratamentul pacienților a inclus doar îngrijire curativă îmbunătățind simptomele bolii. După 2016, Food and Drug Administration (FDA) a fost aprobat singurul tratament pentru SMA. În prezent, la nivel mondial, se fac eforturi pentru implementarea screeningului nou-născutului. Concluzii. Odată cu reevaluarea criteriilor necesare pentru screening și aprobarea tratamentului, screeningul pentru această boală devine esențial. Diagnosticul precoce poate îmbunătăți evoluția stării pacienților cu SMA.Введение: Спинальная мышечная атрофия (СМА) является прогрессирующим нервно-мышечным заболеванием с аутосомно-рецессивным типом наследования. Заболевание вызывается мутациями в гене SMN1 (Survival Motor Neuron) и его тяжесть модулируется такими генами, как SMN2, NAIP (белок, ингибирующий апоптоз нейронов) или GTF2H2 (субъединица 2H общего транскрипционного фактора IIH). Материалы и методы: Диагностика проводиться различными методами. Молекулярно-генетическая диагностика проводится методом ПЦР-РФЛП, но золотым стандартом является метод MLPA. Диагностика может проводиться у людей, у которых уже есть симптомы, но и до их появления. Диагноз СМА может быть поставлен пренатально в семьях, где уже имеется случаи СМА и постнатально у новорожденных (скрининг новорожденных) и у больных, а также в процессе планирования семьи (скрининг носителей). Дифференциальная диагностика СМА сложна и требует рассмотрения многих заболеваний с похожими симптомами. Результаты: В базе данных лаборатории зарегистрировано 131 пациент с диагнозом СМА. До 2016 года лечение пациентов включало только лечебную помощь для улучшения симптомов заболевания. С 2016 года Управление по контролю за продуктами и лекарствами (FDA) одобрило единственное лечение СМА (Spinraza). В настоящее время во всем мире предпринимаются усилия по внедрению скрининга новорожденных на СМА. Заключение: После переоценки необходимых критериев скрининга и утверждения лечения скрининг на это заболевание становится необходимым. Ранняя диагностика может улучшить состояние пациентов с СМА

Distrofia musculară Duchenne: protocol clinic național (ediția I) PCN-403

Acest protocol a fost elaborat de grupul de lucru al Ministerului Sănătății al Republicii Moldova (MS RM), constituit din specialiștii geneticieni, specialiști din Clinică Pediatrie cadrul IMSP Institutului Mamei și Copilului (Clinica Neurologie, Cardiologie, Pulmonologie), specialiști din Departamentul Pediatrie al USMF „Nicolae Testemițanu”. Protocolul Clinic Național (PCN) este elaborat în conformitate cu ghidurile internaționale actuale privind distrofia musculară Duchenne (DMD), cu elucidarea particularităților regionale de management al patologiei la diverse etape de acordare a asistenței medicale. Acest protocol va servi drept bază pentru elaborarea protocoalelor instituționale. La recomandarea MS RM, pentru monitorizarea protocoalelor instituționale pot fi folosite formulare suplimentare, care nu sunt incluse în protocolul clinic național

Clinical evolution of convulsive status epilepticus in children

Introduction. Status epilepticus (SE) is the most common neurological disorder in children, being a condition resulting from the loss of the mechanisms responsible for ending convulsive access or from the initiation of mechanisms that cause an abnormal convulsive response. Purpose. The aim of the present study is an analysis of the evolutionary course of SE among children with "de novo" seizures and previously pre-established epilepsy, by studying the type of seizures, the EEG route and analyzing of the serum concentration of the antiepileptic remedies for SE prophylaxis in children. Material and methods. A retrospective study, conducted by a single center, during the years 2015-2019. We included in the study 115 children with convulsive SE, aged between 1 month and 18 years, hospitalized in the Pediatric Intensive Care Unit of the IMSP Institute of Mother and Child. We analyzed the medical records to obtain variables related to demographic data and the types of crisis. Results. From the total of 115 children with SE, 72 (62.6%) were previously diagnosed with stable epilepsy. Focal seizures were present in 32.1% of cases, and 33.04% required intubation; the mortality incidence was 3.4%. In children with previously established diagnosis of epilepsy, a pathological EEG was encountered more frequently (p <0.001). In 81% of children with pre-existing seizures, the levels of DAE were known, but 51.6% of them had sub-therapeutic levels. Conclusions. The most common disorder was stable epilepsy. Intubation was primarly used in patients with focal seizures. Subtherapeutic serum concentrations of antiepileptic remedies have been established more frequently among children with SE previously diagnosed with epilepsy

Atrofia musculară spinală: protocol clinic national (ediția I) PCN-402

Acest protocol a fost elaborat de grupul de lucru al Ministerului Sănătăţii al Republicii Moldova (MS RM), constituit din specialiştii Departamentului Pediatrie a Universităţii de Stat de Medicină şi Farmacie „Nicolae Testemiţanu” și ai Laboratorului de Genetică Medicală al IMSP Institutul Mamei și Copilului. Protocolul naţional este elaborat în conformitate cu ghidurile internaţionale actuale privind Atrofa Musculară Spinală la copii şi va servi drept bază pentru elaborarea protocoalelor instituţionale, în baza posibilităţilor reale ale fiecărei instituţii în anul curent. La recomandarea MS RM pentru monitorizarea protocoalelor instituţionale pot fi folosite formulare suplimentare, care nu sunt incluse în protocolul clinic naţional

Sindromul Angelman: protocol clinic naţional PCN-367

Protocolul național a fost elaborat de către grupul de lucru al Ministerului Sănătăţii, Muncii și Protecției Sociale al Republicii Moldova (MSMPS RM), constituit din specialiștii IMSP Institutul Mamei și Copilului și USMF „Nicolae Testemițanu”. Protocolul de fata a fost elaborat în conformitate cu ghidurile internaționale actuale privind „Sindromul Angelman” și va servi drept matrice pentru elaborarea protocoalelor instituționale. La recomandarea MSMPS RM pentru monitorizarea protocoalelor instituționale pot fi folosite formulare suplimentare, care nu sunt incluse în PCN

Afectarea cardiacă și renală în hepatita virală B ocultă, forma seropozitivă. Confuzie diagnostică. Prezentare de caz și revista literaturii

IMSP Institutul Mamei și Copilului, IP Universitatea de Stat de Medicină și Farmacie „Nicolae Testemițanu”, IMSP Spitalul Clinic Republican “Timofei Moșneaga”, secția Malformații cardiace congenitaleHepatitis B virus infection is a major public health problem worldwide, affecting about 400 million people around the world [1,7,9,18]. About 20% of patients with HBV infection have a wide range of extrahepatic damages that include systemic, renal, cardiovascular, cutaneous, cerebral, hematological, immunological abnormalities, etc [2,9,12,13,14,19,20]. The authors review data from the literature and present the clinical case of a 1-year-old patient diagnosed with renoparenchymal malignant hypertension possibly induced by reactivated occult viral hepatitis B, with high viremia and extrahepatic impairment (cardiovascular, renal and brain). The patient is hospitalized with clinical manifestations of toxic and infectious syndrome, intestinal transit disorders, abdominal colic, blood pressure values up to 200/120 mmHg, nephritic syndrome, iron deficiency anemia gr. II. The selective aortography excluded the renovascular cause of hypertension. MRI reveals suspicious imaging signs for inflammatory changes in the bilateral renal parenchyma, more pronounced on the right and diff use abdominal lymphadenopathy. The laboratory examination shows marked hepatocytolysis syndrome and high viremia expressed by quantitative HBV DNA with extremely high values. In evolution, against the background of antihypertensive, nephro- and hepatoprotective treatment, the BP values and renal function are normalized, the hepatocytolysis syndrome and HBV viremia persist. The multidisciplinary approach allowed the identification of the possible cause of hypertension and inflammatory changes in the bilateral renal parenchyma, permise for starting antiviral therapy.Infecția cu virusul hepatitic B reprezintă o problemă majoră de sănătate publică la nivel mondial, afectând circa 400 milioane locuitori de pe întreg mapamondul [1,7,9,18]. Aproximativ 20% din pacienții cu infecția VHB prezintă un spectru larg de leziuni extrahepatice care include patologia sistemică, renală, cardiovasculară, cutanată, neurologică, hematologică, anomalii imunologice etc. [2,9,12,13,14,19,20]. Autorii efectuează o trecere în revistă a datelor din literatura de specialitate și prezintă cazul clinic al unei paciente în vârstă de 1 an diagnosticată cu hipertensiune arterială malignă renoparenchimatoasă posibil indusă de hepatită virală B ocultă reactivată, cu viremie înaltă și afectarea extrahepatică (cardiovasculară, renală și cerebrală). Pacienta a fost internată pentru manifestări clinice ale sindromului toxic și infecțios, dereglări de tranzit intestinal, colici abdominale, valori tensionale de până la 200/120 mmHg, sindrom nefritic, anemie fierodeficitară gr. II. La aortografia selectivă a fost exclusă cauza renovasculară a HTA. RMN a relevat semne imagistice suspecte pentru schimbări inflamatorii la nivelul parenchimului renal bilateral, mai accentuat pe dreapta și limfadenopatie abdominală difuză. La examenul de laborator s-a atestat sindromul de hepatocitoliză pronunțată și viremie înaltă exprimată prin ADN VHB cantitativ cu valori extrem de mari. În evoluție, pe fundal de tratament antihipertensiv, nefro- și hepatoprotector s-au normalizat valorile TA și funcția renală, persistând sindromul de hepatocitoliză și viremie VHB. Abordarea multidisciplinară a permis identificarea cauzei posibile a HTA și depistarea schimbărilor inflamatorii la nivelul parenchimului renal bilateral, deciderea inițierii terapiei antivirale