Detecção do antigeno rábico através das provas de imunofluorescência e ímunoperoxidase direta em camundongos, experimentalmente inoculados, sacrificados em fase assintomática e agônica.

A positividade, para raiva, dos materiais cerebrais procedentes de camundongos, foi avaliada comparativamente através das reações de Imunofluorescência Direta (IFD) e Imunoperoxidase Direta (IPD), inoculando-se com vírus rábico de rua, sessenta (60) camundongos jovens pela via intracerebral. Sacrificaram-se trinta (30) dos inoculados em fase assintomática e os demais trinta (30) em fase agônica. No grupo de animais assintomáticos, obteve-se um percentual de 83,3% de positividade com a IPD e 86,6% com a IFD, em materiais cerebrais correspondentes aos mesmos animais. Nos materiais obtidos de animais sacrificados em fase agônica, os resultados foram 100% positivos em ambas as provas. Os resultados demonstraram que a IFD apresentou uma sensibilidade aparentemente superior à da IPD na detecção do antígeno rábico.The positivity of the direct immunoperoxidase and the fluorescent antibody test for rabies virus antigen was comparatively evaluated in sixty young mice inoculated intracerebrally with street rabies virus. Thirty mice were sacrificed in assymptomatic state and the others in their agonizing state. The positive results obtained from impression brain smears of assymptomatic animals by direct immunoperoxidase and fluorescent antibody test were 83.3% and 86.6%, respectively. The results found in impression brain smears of agonizing animals revelead 100% positivity in both techniques. The direct immunoperoxidase test presented a relative sensitivity comparable to thefluorescent antibody test for the detection of rabies virus antigen

Múltiplas substituições em domínios biologicamente ativos da glicoproteína do vírus rábico podem estar relacionadas com o perfil patogênico

Pathogenic profile of a rabies virus isolated from an insectivorous bat Lasiurus ega was compared with a rabies fixed virus strain (CVS/32) in hamster and mouse. Incubation and clinical periods, clinical manifestation and death rates were compared. Challenge of hamsters with L. ega was performed using: 10 2,611-4,021 LD50 /0,05 mL;. For CVS were used 10 3,7- 4,7 LD50 /0,05 mL. Were tested intramuscular (IM), intradermal (ID), intranasal (IN), epidermal abrasion (EA) inoculation routes. Viral antigen in brains was confirmed by Direct Immunofluorescence Test. Mortality percentages observed with L. ega rabies virus isolate were the following in hamster: 3,5 % IM, 10,710% IN; in mice: 50.0% IM, 30.0% IN. Furious rabies was predominant. Mortality percentages observed with CVS/32 in hamster: 12.5% IM, 62.5% ID, 12.5% IN; in mice 100.0% IM, 70.0% ID, 10.0% IN. Paralytic rabies was found with this strain in both animal models. Epidermic abrasion was not a suitable challenge route. Incubation period was 5-7 days for CVS and 11-16 days for L. ega isolate, meanwhile clinical periods were comprehended between 47 days for both viruses. Several substitutions were detected at antigenic domains of glycoprotein: AI (position 231), AII (3442 and 198-200), domain of fusion dependent on low pH (102179), transmembrane domain (440461) and residue 242. These viruses showed contrasting biological behaviors that can be linked to those substitutions at antigenic domains previously described.O perfil patogênico de um vírus da raiva isolado de um morcego insetívoro Lasiurus ega foi comparado com o de vírus fixo de raiva (CVS/32) em hamster e camundongo, determinando os períodos de incubação e clínico, manifestação clínica e mortalidade. Os animais foram desafiados com 10 2,611-4,021 DL50 /0,05 mL do isolado de L. ega e 10 3,7- 4,7 LD50 /0,05 mL do CVS/32, usando as vias: intramuscular (IM), intradermica (ID), intranasal (IN) e abrasão epidermica (AE). A presença do antígeno viral foi confirmada pela prova de imunofluorescência direta. As porcentagens de mortalidade observadas com o isolado de L. ega foram as seguintes em hamster: 3,5% IM, 10,71% IN; em camundongo: 50.0% IM, 30.0% IN. A forma furiosa da doença foi predominante. As porcentagens de mortalidade observadas com o vírus CVS/32 em hamster foram as seguintes: 12.5% IM, 62.5% ID, 12.5% IN; em camundongo 100.0% IM, 70.0% ID, 10.0% IN. Com este vírus foi observada raiva paralitica. A via AE mostrou-se inadequada para induzir doença. O período de incubação foi de 57 dias para o CVS/32 e 11-16 dias para o isolado de L. ega, entre tanto os períodos clínicos oscilaram entre 47 dias para ambos os vírus. Varias substituições foram achadas em domínios antigênicos da glicoproteína: AI (posição 231), AII (34 42 e 198-200), domínio de fusão dependente de baixo pH (102179), domínio da transmembrana (440461) e resíduo 242. Esses vírus mostraram comportamentos biológicos distintos o que poderia estar ligados às substituições nos domínios antigênicos anteriormente descritos

Influência do tratamento com hormônio corticosteróide sobre a sensibilidade do cão à infecção experimental, via intramuscular, com vúus rábico de “rua”

Sixteen dogs (1 -2 years old and 8 -1 0 kg) were used. Nine of them were individually treated with 25 milligrams/day of hydrocortison acetate through the subcutaneous route three days before and on the day of rabies virus inoculation. Seven dogs were used as controls being not treated with hormone. Results showed that eight animals presented signs of rabies and died from 13 to 23 days after challenge, all of them were positive for rabies tested by the immunofluorescence and mouse inoculation tests; only one of these dogs belonged to the control group. The remaining eight animals without signs of the disease (six of them not treated with hormone), were sacrificed from 38 to 88 days after the virus challenge being observed that they were negative for the same rabies laboratory tests described above. Thus the number of dogs positive for rabies was significantly higher in animals treated with corticosteroid hormone.De 16 cães adultos experimentalmente infectados com o vírus rábico de “rua”, via intramuscular, nove receberam hormônio corticosteróide e sete constituíram o grupo controle, sem tratamento hormonal. A dosificação de hormônio consistiu da aplicação diária de 25 miligramas de acetato de delta hidrocortisona em suspensão, via subcutânea, por animal, nos três dias que antecederam e por ocasião da inoculação do vírus. Após um período de observação variável entre 13 e 23 dias da inoculação do vírus, sete dos nove animais do grupo que recebeu hormônio sucumbiram em consequência da raiva, a qual foi confirmada através dás provas de imunofluorescência direta e de inoculação intracerebral em camundongos, enquanto que apenas um dos sete animais do grupo controle, manifestou a doença. Decorrido um período de observação variável entre 38 e 88 dias após a inoculação virai, os oito animais remanescentes, dois dos quais tratados com corticosteróide e seis do grupo controle, não apresentaram sinais da raiva e foram sacrificados, mostrando-se negativos nos exames laboratoriais para diagnóstico da raiva, realizados após o sacrifício. A análise estatística dos resultados obtidos revelou que o número de animais mortos em consequência da raiva, durante os períodos de observação adotados, foi Significativamente maior para o grupo que recebeu hormônio (p < 0,05)

Experiments on intramuscular inoculation and feeding domestic cats (Felis catus) with brains of mice previously infected by rabies viruses

Nineteen kittens divided into four groups were fed with brains of mice infected with rabies viruses. Each four kittens (group I) received four brains infected with the PV fixed strain; nine kittens (group II) ingested 4-5 brains infected with the field isolate T-9/95, isolated from the Desmodus rotundus vampire bat; two kittens (group III) fed ten T-9/95-infected brains, and four cats consumed 32-37 PV strain-infected brains. One adult male, inoculated into masseter muscle with a 20% T-9/95-infected brain suspension, presented rabies after an incubation period of six days, followed with 8 days of clinical evolution, and died thereafter and this cat was considered as the rabies "positive standard". After observing for 20-230 days, all the cats feeding the rabid brains were submitted to euthanasia, by using Acepran®, Zoletil®, and T-61®. At necropsy, samples of brain, heart, lung, kidney, submaxillary salivary gland, and cervical medulla were collected from all the cats and further submitted to the direct fluorescence antibody test (dFA), mouse inoculation test (MIT) and to the reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) technique. Brain, cervical medulla, and the submaxillary salivary gland of the positive standard cat were dFA-positive, and brain and cervical medulla were positive for MIT. All specimens of this cat tested by the RT-PCR were found positive. No animals ingesting PV or T-9/95 virus-infected brains developed clinical signs and all materials tested were negative by dFA and MIT. Several specimens, however, showed positive reactions by the RT-PCR technique, but cats were resistant to rabies through the viruses administered orally.Dezenove gatos, divididos em quatro grupos, foram alimentados com cérebros de camundongos infectados com vírus de raiva. Cada um dos quatro gatos (grupo I) receberam quatro cérebros infectados com vírus fixo PV; nove gatos (grupo II) ingeriram 4-5 cérebros infectados com uma amostra de campo T-9/95, isolada do morcego Desmodus rotundus; dois gatos (grupo III) ingeriram 10 cérebros infectados com T-9/95 e quatro gatos (grupo IV) ingeriram 32-37 cérebros infectados com vírus PV. Um macho adulto, inoculado no músculo masséter, com uma suspensão cerebral a 20% da amostra T-9/95, desenvolveu raiva após período de incubação de seis dias, seguidos por oito dias de evolução clínica, morrendo em seguida. Este gato foi denominado de "padrão positivo". Após observação por um período de 20-230 dias, todos os gatos que receberam cérebros foram submetidos à eutanásia, utilizando Acepran®, Zoletil® e T-61®. À necropsia, foram colhidas amostras do cérebro, coração, pulmão, rim, glândula salivar submaxilar e medula cervical e submetidas à prova de imunofluorescência direta (IFD), inoculação em camundongos (IC), e reação em cadeia pela polimerase-transcriptase reversa (RT-PCR). No "padrão positivo", cérebro, medula cervical e glândula salivar foram positivos à IFD e à IC, cérebro e medula cervical foram os positivos. Todos os espécimes do "padrão positivo" foram positivos à RT-PCR. Nenhum animal que ingeriu cérebros contendo amostras de vírus PV ou T-9/95 apresentou sinais clínicos e todos os espécimes testados foram negativos à IFD e IC, no entanto, alguns espécimes reagiram positivamente à RT-PCR, porém, os gatos foram resistentes à raiva com vírus administrados oralmente

Ação desifetante de alguns produtos comerciais sobre o vírus tipo “C” Waldmann da febre aftosa

Five commercially available disinfectant products were studied on their activity over Type “C ” Waldmann virus of foot and mouth disease. These disinfectants were tested in presence of organic matter. It was determined that after five minutes of contact between the virus and disinfectant, the viral suspension intraperitoneally inoculated into suckling mice caused the following mortality depending on the type of disinfectant utilized: 1/119 (0.84%) mortality after use 2% sodium hydroxide; 5/120 (4.16%) mortality after use of lodophor at 1:250; 104/119 (87.39%) mortality after use of 0.3% Paratoluene; 116/118 (98.3%) mortality after use of 20% Gluconate of chlorhexidine at 1:200; and 118/120 (98.33%) mortality after use of 4% sodium carbonate.Apreciando a ação desinfetante de cinco produtos comerciais sobre o vírus “C" Waldmann da febre aftosa, em presença de matéria orgânica, os autores verificaram que após cinco minutos de atuação a atividade viral remanescente expressa em termos de mortalidade de camundongos lactentes inoculados com a suspensão viral tratada pelos correspondentes produtos foi a seguinte: 1/119 (0,84%); 5/120 (4,16%); 104/119 (87,39%); 116/118 (98,30%); 118/120 (98,33%), respectivamente para o Hidróxido de sódio a 2,0%, Iodofor a 1:250, Paratolueno a 0,3%. Gluconato de clorhexidina 20% a 1:200 e Carbonato de sódio a 4,0%

Demonstração da presença de antigeno rábico nas glândulas salivares submaxilares e parótidas de cães naturalmente infectados. Emprego da reação de imunofluorescência direta em impressões de tecido glandular semimacerado

Submaxillary and parotid glands of 30 naturally rabies infected dogs were examined using the direct fluorescent antibody (FA) technique on tissue smears of semi-ground salivary glands. Mouse inoculation (MI) tests of all examined salivary glands were run in parallel and the rabies diagnosis was confirmed by means of FA and MI tests of materials taken from the Ammon's horn. Specimens taken from the submaxilar glands and Ammon's horn were 100.0% positive for FA and MI tests, however, for the specimens taken from the parotid glands it was found one negative result with both FA and MI test and 11 discrepancies: five FA negative – MI positive results and six FA positive – MI negative results. The results found in this experiment demonstrated the practicality of the FA test using smears of semi-ground salivary glands. This technique should become an alternative tool for the study of rabies pathogenesis, especially for the search of the rabies virus associated with the organs involved in the virus transmission.As glândulas salivares submaxilares e parótidas de 30 cães, naturalmente infectados pelo vlrus da raiva, foram examinadas mediante a reação de imunofluorescência direta (IFD), aplicada a raiva em impressões obtidas do tecido glandular semi-macerado. Os controles adotados foram o exame de tais glândulas através da técnica de inoculação intracerabral em camundongos (IIC) e a pesquisa da presença do vírus rábico no corno de Ammon dos respectivos animais, segundo as técnicas de IFD e de IIC. As glândulas salivares submaxilares e o corno de Ammon foram positivos em todas as oportunidades para as técnicas de IFD e IIC. As glândulas salivares parátidas revelaram um resultado negativo frente às duas técnicas referidas e 11 resultados discordantes, dos quais cinco IFD negativa – IIC positiva e seis IFD positiva - IIC negativa. Os valores observados demonstraram um bom comportamento para o exame das glândulas salivares submaxilares pela IFD aplicada à raiva em impressõe s do tecido glandular semi-macerado. Esta metodologia oferece um novo instrumento para o estudo da patogenia da raiva, particularmente em investigações que procurem esclarecer apresença do vírus ao nivel dos órgãos envolvidos com a sua transmissão

Emprego da glicerina como elemento auxiliar na conservação do vírus da febre aftosa

Two fractions of the same Type “C” Waldmann, subtype“C3” Indaial foot-and-mouth disease (FMD) virus suspension were added respectively to equal volume of glycerine and an ordinary diluent (Earle’s saline containing 2,000 UI of penicillin G and 2,0 miligrams of stretomyc in per mililiter), and stored at -20°C. The results obtained at 117, 150, 185 and 213 days after their preparation by means of replicated consecutive titration test using suckling mice, showed higher stability for the glycerine-added suspension.Duas porções de uma mesma suspensão de vírus, tipo ‘C’ Waldmann, Subtipo ‘C3’ Indaial, da febre aftosa foram adicionadas a igual volume, respectivamente de glicerina e de diluente comum (Salina de Earle adicionada de 2.000 UI de penicilina G potássica e 2,0 miligramas de sulfato de estreptomicina por mililitro), e estocada a -20°C. Os resultados obtidos nas provas de Titulação sucessivas realizadas, em camundongos lactentes, imediatamente após e aos 117, 150, 185 e 213 dias de sua preparação revelam uma maior estabilidade da suspensão adicionada de glicerina

Emprego de soro anti-rábico terapêutico na produção de conjugado para a reação de imunofluorescência na raiva

A procedure for the production of antirabies fluorescent antibody conjugate using equine therapeutic hyperimmune serum is described. The IgG fraction is rapid and easily purified and after labelled with the fluorochrome. By this procedure, laboratories without facilities to take up the work of raising antirabic serum can obtain high quality conjugates.Uma metodologia de produção de conjugado imunofluorescente anti-rábico a partir de soro hiperimune equino para fins terapêuticos é descrita. A fração IgG do soro é purificada de forma simples e rápida e posteriormente marcada com o fluoro cromo. Através dessa metodologia, laboratórios que não disponham de infraestrutura para produção de soro hiperimune anti-rábico podem obter conjugados de boa qualidade

Emprego de soro anti-rábico terapêutico na produção de conjugado para a reação de imunofluorescência na raiva

Uma metodologia de produção de conjugado imunofluorescente anti-rábico a partir de soro hiperimune equino para fins terapêuticos é descrita. A fração IgG do soro é purificada de forma simples e rápida e posteriormente marcada com o fluoro cromo. Através dessa metodologia, laboratórios que não disponham de infraestrutura para produção de soro hiperimune anti-rábico podem obter conjugados de boa qualidade

Reações sorológicas para Brucella canis em cães errantes capturados na proximidade dos parques públicos, reservas florestais e em áreas periféricas do municipio de São Paulo - Brasil

A total of 254 (7.5%) sera from 3386 stray dogs captured between the period of 1981 and 1985, through the reservoir control programme established by the Centro de Controle de Zoonoses, Secretaria de Higiene e Saúde do Municipio de São Paulo - SP, Brazil, coming from 14 localities of Northern, Southern, Eastern, and Western areas of the city were found to be positive for Brucella canis antibodies by means of agar-gel precipitation test. Statistically significant differences were rot found among the number of reactors captured at different localities included in this survey. In view of the reactant animals for B. canis shown to be present among the stray dogs coming from four large divisions of the city, and due to the threat of this potential zoonotic agent, there is a need to strengthen the control measures of urban zoonosis, especially in the huge metropolitan area of São Paulo City.De 3386 cães errantes capturados pelo programa de controle de reservatórios de zoonoses do Centro de Controle de Zoonoses da Secretaria de Higiene e Saúde do município de São Paulo, durante o período de 1981 a 1985, em 14 localidades, distribuídas pelas quatro divisões regionais da cidade. (Norte, Sul, Leste e Oeste), 254 foram reagentes positivos na prova de difusão em gel de ágar para a demonstração de anticorpos precipitantes para Brucella canis. Ao nível de significância de 0,05 não houve diferença estatística entre as taxas de animais reagentes, encontradas nas diversas localidades estudadas. A existência de reservatórios de B. canis, nas quatro grandes divisões do município de São Paulo, ressalta a importância, em saúde pública, dos serviços de controle de zoonoses urbanas nesta extensa área metropolitana