In-company project: Developing a model that optimizes the number of flyers produced and measure its efficiency

Flyers are essential for EDP’s business and customers. In the presential distribution channels, the customers find the flyers very useful because everything about the campaign or product is explained in detail, the client and the seller can write notes there, and it is possible to take it home if they need time to think about the purchase decision. This project emerges from the company’s need to optimize its resources in order to reduce costs and, especially, to fight the waste made by the overproduction of flyers. The objective of the project is to create a mechanism, based on the characteristics of the different distribution channels (Stores and Agents), that allows to optimize the number of flyers produced and distributed for each point of sale, by campaign. The mechanism created is referred to as the Merchandising Model. The merchandising model was implemented in one campaign that took place from February to April 2021. Its results are compared with the results from a previous campaign where the merchandising model was not applied. The main conclusion from this project is that the merchandising model allowed EDP to reduce the production of flyers, which translates into a reduction of costs and waste produced, while having a positive impact on the sales volume.Os flyers são essenciais para o negócio da EDP e para os seus clientes. Para os clientes dos canais presencias, os folhetos são bastante úteis, pois contém toda a informação necessária sobre a campanha e/ou produto. É possível também que cliente, ou o vendedor, tirem notas nesse folheto, que o cliente poderá levar para casa caso necessite de mais tempo para ponderar a sua decisão de compra. Este projeto surge da necessidade da EDP otimizar os seus recursos, de forma a reduzir custos e, principalmente, combater o desperdício gerado pelo excesso de produção de folhetos. O objetivo do projeto é criação de um mecanismo, baseado nas características dos diferentes canais de distribuição (Lojas e Agentes), que permita otimizar o número de folhetos produzidos e distribuídos por cada ponto de venda, para cada campanha. O mecanismo criado é denominado de Modelo de Merchandising. Os resultados da implementação do modelo são comparados com os resultados de uma campanha anterior, onde o Modelo de Merchandising não foi aplicado. O Modelo de Merchandising foi implementado numa campanha, que ocorreu de fevereiro a abril de 2021. A principal conclusão deste projeto é que o Modelo de Merchandising permitiu à EDP reduzir a sua produção de folhetos, o que se traduz numa redução de custos e de desperdício produzido, tendo ainda um impacto positivo no volume de vendas

EXPLORING ENERGY POVERTY AND THERMAL COMFORT IN PORTUGUESE UPPER SECONDARY EDUCATION STUDENTS

Energy poverty is a growing multidimensional concern worldwide, with children and young people particularly vulnerable. This age group spends a significant amount of time in both their houses and school buildings. Still, there has been little research on the dual vulnerability to inadequate thermal comfort conditions in these two environments. In Portugal, the expo-sure to inadequate thermal comfort in school buildings varies due to disparities in renovation efforts: while some schools have undergone renovations to improve thermal comfort, others have not. This work aims to assess upper secondary school students’ perception of energy poverty at home and thermal comfort inside classrooms. The study employed two comple-mentary components: surveys of a statistically significant sample of students from one reno-vated and one non-renovated schools located in the Lisbon district for a more focused insight, and surveys from students from different schools across Portugal, to have a more exploratory perspective. The first segment of the methodology was complemented with interviews and surveys with other school stakeholders to understand their perceptions of this issue. The re-sults indicate that between 4.2-14% of students live in permanent discomfort (uncomfortable both in school and at home). Despite the discomfort still observed in students from the reno-vated school, it is possible to say that the renovation attenuated this. Students with health conditions and disadvantaged backgrounds were more likely to report discomfort than those who did not. This study raises awareness of a vulnerable group and underscores the im-portance of studying energy poverty and thermal comfort at the local level, considering the variations between schools, socio-demographics, and climatic zones. This study provides val-uable insights into the issue of energy poverty among young people. It addresses the need to incorporate this age group in energy-related policies, to involve the students in the decision process regarding the classroom' temperature and that schools are places that may serve as a refuge from energy poverty to this age group.Pobreza energética é uma problemática multidimensional, com crianças e jovens entre os gru-pos particularmente vulneráveis. Este grupo passa a maior parte do seu tempo no interior de edifícios (em casa e na escola) mas nenhuma investigação foi feita na dupla vulnerabilidade ao fraco conforto térmico destes dois ambientes. Em Portugal, a exposição ao desconforto tér-mico em edifícios escolares ocorre de forma díspar ao longo de todo o território, devido às assimetrias na renovação dos edifícios escolares. O objetivo deste trabalho é averiguar a per-ceção dos estudantes do ensino secundário sobre pobreza energética e conforto térmico na escola. Com esse intuito, foram utilizadas duas metodologias complementares: inquéritos em duas escolas (renovadas e não renovadas, localizadas no distrito de Lisboa) com populações estatisticamente significantes, para uma perspetiva mais direcionada do assunto, e inquéritos a alunos de várias escolas do país, de modo a ter uma perspetiva mais exploratória e abran-gente do assunto. O primeiro segmento foi complementado com entrevistas e inquéritos a ou-tros intervenientes, de modo a ter uma perspetiva integrada do assunto. Os resultados expõem que viver em desconforto permanente é uma realidade para entre 4.2%-14% dos jovens. Ape-sar do desconforto ainda sentido nas escolas renovadas, é possível afirmar que a renovação contribuiu para atenuar este problema. Fatores como a saúde ou a condição financeira levam a que alguns grupos de jovens sejam mais propícios a reportar desconforto que outros. Este estudo sublinha a importância de estudar pobreza energética e conforto térmico em jovens à escala local, considerando as variações entre escolas, sociodemográficas e climáticas. Realça ainda a importância de incluir este grupo nas políticas de pobreza energética, de os envolver nas decisões face à temperatura da sala de aula. Por último, proporciona um novo olhar sobre as escolas como lugares importantes para atenuar os impactes da pobreza energética neste grupo etário

The effect of social media content marketing on engagement and conversion in sales : the case of Mercadão

Social networking services have become an essential tool that connects companies and consumers. For this reason, brands strive to enhance consumer engagement and subsequently conversion in sales. However, it is challenging to identify what type of content serves better companies’ goals. Hence, this research aims to deepen the knowledge regarding “what type of Instagram and Facebook content marketing generates more consumer engagement?” and “what social network generates more sales conversion to the website through social media content?”. To answer the questions raised, it was necessary to develop a social media strategy. For the first research question three different types of content - Informative, Entertaining and Relational - were created to analyse the level of engagement. To answer the second research question, two posts were developed for both platforms, appealing customers to use the coupon, which was valid for 24 hours. Findings suggest that it is relevant to create more relational content to obtain more consumer engagement, and that Instagram may be a good social network to bet on, when it comes to conversion. In short, for future research, after collecting the engagement data, it becomes crucial to develop a conversion post, based on the content that had the most interaction, in order to ascertain whether conversion would increase. In general, future research should continue to explore the relationship between media content in social networks, engagement and conversion.Os serviços de redes sociais tornaram-se numa ferramenta essencial que conecta empresas e consumidores. Dessa forma, as marcas esforçam-se para aumentar a interação do consumidor e, posteriormente, a conversão em vendas. No entanto, é um desafio identificar qual o tipo de conteúdo que melhor corresponde aos objetivos das empresas. Assim, este estudo visa aprofundar o conhecimento sobre “que tipo de conteúdo de marketing no Instagram e Facebook gera mais interação do consumidor?” e “qual a rede social que gera mais conversão de vendas para o site por meio do conteúdo das mesmas?”. De forma a responder a estas questões, foi necessário desenvolver uma estratégia de redes sociais. Em relação à primeira questão de investigação, foram criados três tipos diferentes de conteúdos - Informativo, Entretenimento e Relacional - com o intuito de analisar a performance da interação. Relativamente à segunda questão de investigação, foram desenvolvidos dois posts para ambas as plataformas, apelando aos clientes para a utilização de um código promocional, válido por 24 horas. Os resultados sugerem não só ser relevante criar mais conteúdos do tipo relacional para obter mais interações dos usuários, como também a necessidade de apostar no Instagram quando se trata de conversão. Em suma, para futuras pesquisas, após recolher os dados referentes à interação, torna-se fundamental desenvolver um post de conversão, baseado no conteúdo que teve mais interação, com a finalidade de verificar se a conversão aumentaria. Em termos gerais, futura investigação deve continuar a explorar a relação entre conteúdo mediático nas redes sociais, engagement e conversão

Novas soluções para a interação entre operador e passageiro nos transportes públicos

Environmental awareness has been increasing over the years. Since the transportation sector is one of the great contributors of greenhouse gas (GHG) emissions, it is necessary to motivate people to leave their car at home and use public transport. However, service providers must meet passengers' needs in a more personalized way and improve the quality of the service they offer. This project aims to provide a tool that positively impacts the required shift towards sustainability, and it relies on the exchange of passenger information to achieve this goal. The challenge proposed by the company, OPT, is based on the creation of new solutions for the interaction between operator and passenger through the Smartphone. Given that OPT is headquartered in Porto, its area of intervention par excellence is focused on the Metropolitan Area of Porto (MAP). The project focused on the acquisition of passenger data from this same area to characterize it in terms of urban mobility. The study has the MAP as a starting point however, the goal is to create a solution that is scalable to any city. The project began by characterizing the current situation regarding passenger information in the metropolitan area of Porto and a passenger survey was conducted to understand their perception towards information in public transports. Despite the available app offer, there are opportunities for improvement in the context of the integration of essential app functionalities and user experience. In addition, a bilateral interaction between the two stakeholders is needed in order to generate relevant information from user feedback. In this way, a new mobile application concept for public transport was designed to co-create value and improve the quality of service and allow seamless mobility across the travel network. Taking into account the commercial potential of this project, the strategies of innovation and business are based on the optimization of resources and value for the clientAo longo dos anos, a consciencialização das populações relativamente ao meio ambiente tem vindo a aumentar. O setor dos transportes, nomeadamente o de passageiros, tem um grande impacto na emissão de gases poluentes e, por isso, a utilização do veículo próprio como meio de transporte de eleição tem de ser reduzida. Para isto, é necessário que o transporte público se torne apelativo e sirva as necessidades das pessoas de forma personalizada e com qualidade. Este projeto é desenvolvido de acordo com a premissa de melhoria da qualidade dos transportes públicos e baseia-se na troca de informação para atingir este objetivo. O desafio lançado pela OPT assenta na criação de novas soluções para a interação entre operador e passageiro. Tendo em conta que a OPT está sediada no Porto, a sua área de intervenção por excelência foca-se na Área Metropolitana do Porto (AMP) e, por isso, o projeto focou-se na aquisição de dados desta mesma área para a caracterizar em termos de mobilidade. O estudo tem a AMP como ponto de partida, no entanto, o objetivo é criar uma solução que seja escalável para qualquer cidade. Para analisar o estado da informação ao público na área metropolitana do Porto, procedeu-se ao levantamento da oferta e à realização de um inquérito aos passageiros. Apesar de existir alguma oferta relativamente a aplicações móveis que disponibilizam informação, existem oportunidades de melhoria no contexto da integração de funcionalidades essenciais e user experience. Além disso, a evolução indica uma interação entre os intervenientes de forma a que se possa gerar informação relevante a partir do feedback do utilizador. Desta forma, foi concetualizado um novo modelo de aplicação móvel para os transportes públicos. O objetivo é baseado na co-criação de valor para melhorar a qualidade do serviço e permitir uma mobilidade contínua, motivando assim para a utilização dos transportes coletivos. Tendo em conta o potencial comercial deste projeto, reflete-se sobre as estratégias de inovação e negócio tendo por base a otimização dos recursos e o valor para o clienteMestrado em Engenharia e Gestão Industria

Health (dis)equalities and social isolation and loneliness in the older people: a qualitative study

Demographic ageing is currently a major concern worldwide and has been growing at an accelerated pace, which is why it is important to reflect on the aspects that can be preponderant in the process of growing old. Therefore, this study aims to understand the perspective of elderly people in Póvoa de Varzim regarding the factors that influence (in)equality in health, as well as social isolation and loneliness. A qualitative study was carried out and a total of 37 participants were recruited to take part in 4 focus groups, using the intentional non-probabilistic sampling method. The focus groups were analyzed on the basis of thematic analysis. Findings show that the factors that seem to influence health inequalities are related to accessibility to health services (general functioning and appointments), as well as socioeconomic and demographic aspects, which are also at the heart of social isolation and loneliness, alongside community factors. These results have contributed to a better understanding of existing health inequalities and how older people perceive social isolation and loneliness, thus making it possible to understand the helical process inherent in the subject under study. In this way, it has allowed the development of possible actions and/or strategies at the level of policies and the organization of services and communities, in which the Occupational Therapist also plays a fundamental role that will contribute to a transformation of the ageing paradigm and the promotion of a healthy life for older people

Pre-service teacher education in Angola: how student teachers perceive the practicum

Pre-service teacher education is a major political priority in Angola so as to promote educational and social development in the country. Pedagogical supervision is understood as a strategy that should support innovation towards better teacher qualification and more learning-centred curricula. However, there is a lack of studies about how teacher education programmes are perceived by both students and teacher educators. The study here reported is part of a PhD project conducted by the first author in a teacher training institution (Namibe Teacher Training School – Angola), focusing on perceptions of the practicum through survey questionnaires administered to student teachers, school supervisors, institutional supervisors and programme/ practicum coordinators across nine teacher education programmes. We will focus on the student teachers’ views of the practicum as regards the goals and practices of supervision, the supervisor profile, the quality of educational practices at school, and the development of professional competences. Results point out mismatches between student teachers’ ideal conceptions of the practicum (what they believe to be more important) and the way they experience it (what they perceive to be more present in practice). Those mismatches may generate dissatisfaction as regards the fulfilment of student teachers’ expectations and indicate the need to improve teacher development practices in this context. The gap between ideals and reality can be partially understood with reference to constraints and improvement measures pointed out by the student teachers as regards school conditions (e.g. large classes, student misbehaviour and learning problems, shortage of resources), insufficient previous training to face the practicum, supervisors’ lack of updated knowledge about supervisory strategies and educational innovation, and lack of appropriate communication and coordination between schools and the teacher training institution. These problems are also pointed out by the other participants in the study, which reinforces the need to undertake changes in this context. It is expected that this kind of studies may instigate institutions to discuss the role of practicum experiences as regards teacher qualification and educational change, not only in terms of what should be done but also in terms of how student teachers and teacher educators perceive reality as compared to their aspirations, thus taking into account their voices as a springboard for reflection and change.This work is funded by CIEd – Research Centre on Education, Institute of Education, UMinho, UID/CED/01661/2013 – through national funds of FCT/MCTES-PT. The first author holds a PhD scholarship granted by FCT (SFRH/BD/103201/2014). The authors wish to thank the Namibe Teacher Training School in Angola and the research participants for their collaboration in the study

Parametric imaging of FET PET using nonlinear based fitting

Tese de mestrado integrado em Engenharia Biomédica e Biofísica , apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2016A importância do uso de aminoácidos marcados com isótopos radioativos em estudos de Tomografia de Emissão de Positrões (PET) tem sido amplamente demonstrada. Dentro deste grupo de traçadores, a metionina marcada com 11C tem sido o mais estudado. No entanto, a curta semi-vida do radioisótopo 11C tem levado ao desenvolvimento de marcadores análogos. Os marcadores com o radioisótopo 18F revelam-se os mais promissores para deteção de tumores no cérebro. Mais especificamente, o marcador O-(2-18F-Fluoroetil)-L-tirosina (FET) provou ser de grande importância na determinação da dimensão de tumores cerebrais e dos locais onde realizar a biopsia, no planeamento do tratamento a aplicar, e na deteção de recorrências. Foi também demonstrado que a forma como o FET é metabolizado ao longo do tempo depende do grau do tumor em estudo. Em gliomas de alto grau (HGG), a taxa de captação do FET é caracterizada por um pico inicial, seguido de uma diminuição da captação de FET, enquanto que em gliomas de baixo-grau (LGG) a taxa de captação do marcador tem um aumento contínuo ao longo do tempo. O presente estudo contou com 11 pacientes (3 mulheres, 8 homens, idade: 45 ± 15 anos) com tumores cerebrais primários não tratados confirmados por histologia. Seis pacientes foram diagnosticados com HGG, enquanto os restantes 5 foram diagnosticados com LGG. Os dados de PET foram adquiridos com o PET Insert do sistema híbrido Siemens 3T MR-BrainPET. As imagens foram segmentadas de forma a extrair apenas o volume correspondente ao tumor. Após a segmentação, calculou-se a média das curvas de tempo-atividade (TAC) dos volumes tumorais segmentados (STVs), e foram usados métodos de regressão linear e não linear para fazer o ajuste à TAC de cada volume. Para calcular os ajustes com o modelo linear, foram descartados os primeiros 5 minutos de aquisição. Os ajustes baseados na regressão não-linear foram aplicados à TAC correspondente à média entre os 2 e os 60 minutos de aquisição após a injeção. As imagens dos parâmetros foram calculadas a partir dos ajustes baseados na regressão não linear e aplicados a cada voxel. Foram testados três modelos não lineares diferentes: um modelo linear amortecido exponencialmente, um modelo linear amortecido exponencialmente e com um offset, e um modelo linear amortecido exponencialmente com o tempo dependente da raiz quadrada. Dos ajustes não lineares, foram extraídos dois parâmetros: a amplitude, A, e o parâmetro κ. De seguida, geraram-se as imagens dos parâmetros calculados sobre uma área tridimensional selecionada manualmente e contendo o tumor. Para tal, além dos três modelos não lineares, utilizou-se também o modelo linear, de modo a permitir uma comparação entre os diferentes métodos. No caso dos ajustes lineares, os parâmetros extraídos foram a ordenada na origem e o declive. Calcularam-se também as imagens dos parâmetros da regressão não linear usando o modelo linear amortecido exponencialmente com o tempo dependente da raiz quadrada para a cabeça inteira. Os modelos não-lineares foram mais precisos na reprodução das curvas de FET. Os modelos mais robustos foram os modelos lineares exponencialmente amortecidos sem offset. Nos ajustes aplicados à TAC média dos STVs, o modelo linear amortecido exponencialmente com o tempo dependente da raiz quadrada provou ser o que reproduz mais precisamente os dados, com valores de 2 entre 0,94 e 1,00. O parâmetro A do modelo linear amortecido exponencialmente com o tempo dependente da raiz quadrada foi o único que revelou uma diferença significativa entre HGG e LGG (p-value= 0.04, α=0.05). Ao gerar imagens paramétricas com base nos ajustes aplicados a cada voxel, os modelos de regressão não-linear com 2 parâmetros tiveram o melhor desempenho, com valores de 2 perto de 1. Combinando as imagens do parâmetro amplitude e as imagens da atividade total ao longo do tempo, foi possível distinguir entre graus tumorais. Os LGGs assumem valores de amplitude próximos dos valores do tecido saudável à sua volta, e por isso “desaparecem” da imagem paramétrica da amplitude. No caso dos HGGs, a imagem da amplitude reproduz a atividade no tumor. Os ajustes realizados com base na regressão linear devolveram valores de 2 próximos de zero, quer no caso dos STVs, quer no cálculo das imagens paramétricas. A distinção entre HGG e LGG é possível com base nas imagens paramétricas do declive, com os LGGs a assumirem valores de declive superiores aos do tecido saudável adjacente. Com os HGGs, a situação é a oposta: os valores do declive no tumor são inferiores aos do tecido saudável que o rodeia. Em geral, os modelos não lineares reproduzem melhor os dados provenientes de FET PET, mas a distinção entre HGG e LGG baseada num parâmetro apenas é melhor conseguida através de regressão linear. No entanto, a distinção entre HGG e LGG também é possível analisando simultaneamente as imagens dos parâmetros A e κ.The importance of radiolabeled amino acids in Positron Emission Tomography (PET) imaging of the brain has been demonstrated by several studies. The most well studied amino acid tracer is 11C-metionine, but because of the short half-life of 11C, 18F-labeled amino acid analogues have been developed for tumour imaging. A number of studies have proven the importance of O-(2-18F-Fluoroethyl)-L-tyrosine (FET) in determining the extent of cerebral gliomas, biopsy guidance, treatment planning, and detecting recurrence of brain tumours. It was also demonstrated that dynamic changes of FET accumulation in gliomas are variable. High-grade gliomas (HGG) are characterized by an early peak, followed by decrease of FET uptake, whereas the uptake in low-grade gliomas (LGG) steadily increases. Eleven patients (3 female, 8 male, age: 45±15 years) with untreated primary brain tumours and histopathologic confirmation were studied. Six patients had HGG, while the remaining 5 were diagnosed with LGG. PET acquisition was done with the PET Insert of a hybrid Siemens 3T MR-BrainPET system. For tumour volume fitting, a segmentation procedure was applied. After segmentation, the mean time-activity curve (TAC) of the segmented tumour volumes (STVs) was calculated. Linear and nonlinear regression were used to fit to the TAC of each volume. When performing the fits with the linear model, the first 5 minutes of acquisition were discarded. For the nonlinear regression, the fits were applied to the mean TAC from 2 to 60 minutes after injection. Parametric images were calculated based on nonlinear regression fitting of FET data in each voxel. Three different nonlinear models were tested: an exponentially damped linear model, an exponentially damped linear model with an offset, and an exponentially damped linear model with square-root time dependence. The considered nonlinear model parameters were amplitude, A, and κ. The parametric images of manually selected tridimensional volumes containing the tumour were generated. Linear regression based parametric images were also computed for comparison, and the assessed parameters were intercept and slope. Whole-head parametric images were calculated based on nonlinear regression fitting using the exponentially damped linear model with square-root time dependence. Nonlinear regression models were more accurate at reproducing FET TAC characteristics. The most robust models are the exponentially damped linear models without offset. For mean TAC fitting, a model with square-root time dependence reproduced FET activity curves more accurately, with coefficient of determination (2) values between 0.94 and 1.00. The A parameter from the exponentially damped linear model with square-root time dependence was the only one significantly different between HGG and LGG (p-value= 0.04, α=0.05). When generating parametric images based on voxel-wise fit, the nonlinear regression models with 2 parameters performed the best, with 2 close to 1. Visual distinction between tumour grades was possible by comparing the amplitude images with the images of the summed activity across time. In the amplitude, LGGs take values similar to the ones of the surrounding background, thus disappearing from the image. On the other hand, HGGs amplitude images reproduce tumour uptake. Linear regression model fits returned 2 values that were close to zero in both mean TAC fitting, and parametric image calculation. Grade distinction was possible based on the slope parameter alone, with LGGs showing higher slope values than the neighbouring tissue, and HGGs showing lower slope values than their surroundings. In general, though nonlinear models reproduce FET time activity curves more accurately, the distinction between low-grade and high-grade tumours based on one parameter only is better achieved by using linear regression model fitting. However, a reliable differentiation seems to be possible with joint analysis of A and κ parametric images

Hotel’s end users preferences on green hotel attributes : an application of the quality function deployment

Hotels have been suffering environmentally friendly pressure since customers are increasingly demanding more hotel green attributes. In order to identify which green attributes hotel end-users are positively perceived and how can the hotel meet the customer’s demand, this study, through the construction of a House of Quality, aims to identify which green features hoteliers should focus, without jeopardizing service quality. This research develops the Quality Function Deployment tool, House of Quality, since it establishes relationships between the hotel end-users’ ratings and the green hotel design features that fulfill the customer desires. By implementing a qualitative research methodology, the hotel customer’s preferences were analyzed through a survey. The data was collected through a questionnaire and it focused solely on the city of Porto, Portugal. Findings reveal that hotel end-users perceive as more important the attribute “Active system to detect and repair water leakage in toilets, sinks and showerheads”, followed by the implementation “Good sanitation practices (such as saving water)”. On the other hand, the “Change of bedsheets only upon request (option for multiple night guests)” and the “Use of low-flow toilets and sinks” were the least favorably perceived attributes. The HOQ construction reveals that hotels should prioritize the implementation of a program of “Waste reuse and recycling” and “Use of energy efficiency techniques and technologies”.Os hotéis têm vindo a sofrer uma pressão “amiga do ambiente”, dado que os consumidores procuram cada vez mais atributos ecológicos nos hotéis. De forma a identificar quais os atributos ecológicos avaliados positivamente pelos consumidores finais dos hotéis e de que forma o hotel consegue responder à procura dos consumidores, este estudo, através da construção da House of Quality, pretende identificar quais as funcionalidades ecológicas nas quais os hotéis se devem focar, sem prejudicar a qualidade do serviço. Esta investigação desenvolve a ferramenta da Quality Function Deployment, a House of Quality, visto que estabelece uma relação entre a importância avaliada pelos consumidores finais dos hotéis e as características ecológicas de design nos hotéis que satisfazem os desejos dos consumidores. Através da adoção de uma metodologia qualitativa, as preferências dos consumidores do hotel foram analisadas através de um inquérito. Os dados foram recolhidos através de um questionário distribuído na zona da cidade do Porto, Portugal. Os resultados revelam que os consumidores finais dos hotéis consideram mais importante a existência de um “Sistema ativo de deteção e reparação de fugas de água em sanitas, lavatórios e chuveiros”, seguido pela implementação de “Boas práticas sanitárias (tal como a poupança de água)”. Por outro lado, a “Mudança dos lençóis apenas quando pedido (opção para estadias de várias noites)” e o “Uso de sanitas e lavatórios com baixa pressão de água” foram os atributos ecológicos avaliados menos favoravelmente. A construção da House of Quality revela que os hotéis deviam priorizar a implementação de um programa de “Gestão de Resíduos e Reciclagem” e o “Uso de técnicas e tecnologias com eficiência energética”

Ex vivo expansion of human Tfh-like cells from blood and inflammatory environments

Tese de mestrado, Ciências Biofarmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019Follicular helper T cells (Tfh) are essential components of the adaptive immune system. Interactions between Tfh and B cells play an essential part in humoral immunity, given that this T cell subset is characterized by their B cell helper activity, provision of B cell differentiation signals and formation and maintenance of germinal centers (GCs) within secondary lymphoid organs. Tfh cells have been associated with a variety of diseases, including infectious and inflammatory diseases. Dysregulated Tfh proliferation and cell function have been correlated with contribution to the pathogenesis or poor prognosis of certain autoimmune diseases over the past decade. On the other hand, the presence of Tfh-like cells in breast cancer has also been linked to protective functions. Thus, despite advances in the study of Tfh cell biology, a lack of understanding remains regarding Tfh-like cell subpopulations recently identified in disease conditions. The present study aimed to expand a PD-1+HLA-DR+ CD4+ Tfh-like subpopulation ex vivo in order to define optimal proliferation conditions and functionally analyze expanded cells. Several cell culture conditions were tested, using different concentrations of anti-CD28 and cytokine combinations, to induce differentiation of healthy human CD4+ T cells into PD-1+HLA-DR+ Tfh-like cells. The differentiated population expressed the Tfh markers Bcl-6 and IL-21, confirming a Tfh-like gene signature. Furthermore, expanded cells appeared to display a phenotype relatable to that of Tfh-like subpopulations formerly identified and associated with pathogenic and defensive roles in rheumatoid arthritis and breast cancer, respectively. More specifically, PD-1+HLA-DR+ CD4+ T cells exhibited production of the cytokines IL-10, IFN-γ and TNF-α, as well as the expression of the transcription factors T-bet and Foxp3. These findings suggest the potential of ex vivo generated Tfh-like cells to exert functions analogous to resembling cells characterized in vivo. The relevance of this study lies in the possibility for ex vivo expansion to consist in a useful tool to induce in vivo expansion in certain types of cancer, when linked to protective function. Otherwise, this approach allows knowledge extension regarding pathogenic populations emerging from autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis. In conclusion, this work evidences the need to further research Tfh function, presents future directions and provides perspective on factors to be considered that might ultimately contribute to the development of novel therapeutic strategies targeting Tfh-like cells.As células T auxiliares foliculares (Tfh) são um subtipo de células T CD4+ de memória caracterizadas pela expressão de CXCR5, PD-1, ICOS, IL-21 e do seu fator de transcrição chave, Bcl-6, que se localizam principalmente nos centros germinativos (GCs) de órgãos linfoides secundários. No entanto, estas células T CD4+ CXCR5+ também podem ser encontradas no sangue periférico humano, sendo referidas como células Tfh circulatórias (cTfh). Devido à atividade auxiliar que caracteriza as células Tfh, em conjunto com o fornecimento de sinais de diferenciação a linfócitos B e a sua necessidade para a formação e manutenção de GCs nos órgãos linfoides secundários, as interações entre células Tfh e células B desempenham um papel essencial na imunidade humoral. Desde a sua descoberta, as células Tfh têm sido associadas a diversas doenças, incluindo doenças infeciosas e inflamatórias. A desregulação na proliferação e função celular das células Tfh tem sido correlacionada com a contribuição destas células para a patogénese ou mau prognóstico de certas doenças autoimunes ao longo da última década. Por outro lado, a presença de células semelhantes a Tfh (Tfh-like) no cancro da mama também tem sido associada a funções protetoras. Assim, apesar dos avanços no estudo da biologia de células Tfh, ainda existe uma escassez de conhecimento relativamente a subpopulações de células Tfh-like. O presente estudo teve como objetivo expandir uma subpopulação de células Tfh-like CD4+ PD-1+HLA-DR+ ex vivo, a fim de definir as suas condições ótimas de proliferação e de analisar funcionalmente as células expandidas. Este fenótipo Tfh-like foi escolhido devido à prévia evidência de que uma população de células T CD4+ PD-1hi que co-expressam o complexo principal de histocompatibilidade de classe II (MHC II), onde se insere o marcador de ativação tardia de células T, HLA-DR, se encontravam expandidas no sangue periférico de pacientes com artrite reumatoide soropositiva e a redução dessas células correlacionou-se com uma redução na atividade da doença. Numa primeira fase, células T CD4+ foram isoladas por separação magnética a partir de amostras de sangue de dadores saudáveis. De forma a induzir a diferenciação das células T CD4+ em células Tfh-like PD-1+HLA-DR+, diversas condições de cultura celular foram testadas, utilizando diferentes concentrações de anti-CD28 e diferentes condições de estimulação de citoquinas. Foram testadas as concentrações de 2, 5 e 10 μg/mL de anti-CD28 a fim de alcançar condições adequadas de proliferação para o desenvolvimento de células Tfh-like, uma vez que foi demonstrado que o aumento na concentração de anti-CD28 em combinação com uma elevada concentração de anti-CD3 poderia levar ao aumento da ativação de células T. O aumento nos níveis de expressão da molécula PD-1 exibido pelas células T CD4+ de memória PD-1+HLA-DR+ com a adição das citoquinas TGF-β e IL-6 ao meio de cultura, em combinação com um ligeiro aumento na percentagem destas células, foram fatores determinantes para a seleção da concentração de 5 μg/mL para o anti-CD28. Quando os níveis de expressão de CXCR5 foram medidos nesta condição, foi evidente a escassez de células PD-1+HLA-DR+ CXCR5+ antes e após a cultura celular, pelo que a presença deste recetor não foi considerada uma característica importante para a definição do fenótipo Tfh-like expandido. Esta observação está de acordo com estudos previamente realizados em que foram identificadas diversas populações de células Tfh-like CXCR5- em tecidos inflamados não-linfoides. As condições de estimulação de citoquinas testadas foram baseadas em estudos prévios onde as citoquinas TGF-β, IL-6, IL-12, IL-21, IL-23, IL-27 foram utilizadas para induzir a diferenciação de células com um fenótipo Tfh-like. Quando as células T CD4+ foram cultivadas na presença de TGF-β e IL-21 ou TGF-β em conjunto com IL-6 e IL-21, verificou-se uma expansão ligeiramente mais percetível das células PD-1+HLA-DR+. Também foi observada uma tendência para o aumento dos níveis de expressão de PD-1 em comparação com as condições de estimulação sem estas citoquinas presentes. Tendo estes resultados em conta, estas foram as condições de estimulação selecionadas. Todas as condições de estimulação testadas foram conduzidas na presença da citoquina IL-2. Apesar desta citoquina ser reconhecida como um potente inibidor da diferenciação de células Tfh, comprometendo a manutenção ou sobrevivência de células T que se encontram a divergir na direção da via de diferenciação Tfh, na ausência desta citoquina não foi possível identificar células vivas na população de linfócitos obtida ao fim de 5 dias de cultura celular. Esta observação sugere que as células T CD4+ não sobreviveram num meio deficiente em IL-2. Em adição a esta citoquina, a presença de anti-CD3 e anti-CD28 também foi incluída em todas as condições de estimulação, de forma a mimetizar o processo in vivo de ativação de células T onde são necessários a ativação do complexo TCR, do qual proteínas CD3 fazem parte, e sinais de co-estimulação. Após diferenciação das células nas condições de polarização selecionadas, foi efetuada uma análise à expressão de marcadores de células Tfh, nomeadamente o fator de transcrição repressor Bcl-6 e a citoquina IL-21, confirmando uma assinatura genética semelhante à de células Tfh. Além disso, as células resultantes desta expansão exibiram um fenótipo relacionado com o de subpopulações de células Tfh-like recentemente identificadas e associadas a papéis patogénicos e defensivos na artrite reumatoide e no cancro da mama, respetivamente. Mais especificamente, as células T CD4+ PD-1+HLA-DR+ obtidas exibiram produção das citoquinas IL-10, IFN-γ e TNF-α, bem como a expressão dos fatores de transcrição T-bet e Foxp3. Estes resultados, complementados por evidências reportadas em estudos anteriores que relacionam funções das citoquinas analisadas neste trabalho com a artrite reumatoide e/ou o cancro da mama, sugerem o potencial das células Tfh-like geradas ex vivo para a execução de funções análogas às das células Tfh-like caracterizadas in vivo. É também importante referir que foi verificada a ausência de relevância estatística relativa às diferentes percentagens de células produtoras de citoquinas obtidas entre todas as condições de estimulação testadas, o que indica que as células expandidas partilham uma única assinatura genética que se traduz também na partilha de uma única funcionalidade. Esta hipótese foi confirmada pela falta de relevância estatística que também se identificou nos resultados adquiridos na análise à expressão dos fatores de transcrição Bcl-6, T-bet e Foxp3. Este trabalho contribui positivamente para a área abrangida neste estudo na medida em que foi demonstrado que a expansão ex vivo de células Tfh-like facilita o estudo de novas subpopulações que surgem em diversas condições de doença. Existe também a possibilidade da expansão ex vivo da subpopulação de células Tfh-like CD4+ PD-1+HLA-DR+ consistir numa ferramenta de investigação útil com o objetivo de induzir a expansão in vivo destas células em certos tipos de cancro, caso estudos futuros permitam relacionar esta população de células a uma função protetora. Caso contrário, esta abordagem experimental poderá permitir o aprofundamento do conhecimento sobre populações patogénicas emergentes de doenças autoimunes, como a artrite reumatoide. No entanto, existe a necessidade de realização de análises fenotípicas adicionais em estudos futuros com vista a confirmar se as células aqui geradas são mais propensas a desempenhar funções associadas a um papel protetor ou detrimentoso. Em conclusão, este trabalho evidencia a necessidade de investigação adicional relativamente à função de células Tfh para definir a sua absoluta função em contexto de doença. São também apresentadas direções futuras e perspetivas sobre os fatores a serem considerados, de forma a superar limitações do sistema identificadas neste trabalho, e e que podem contribuir para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas direcionadas às células do tipo Tfh.The studies presented in this thesis were performed at CEDOC-NMS/UNL – Centro de Estudos de Doenças Crónicas, NOVA Medical School, Universidade NOVA de Lisboa, under the scientific supervision of PhD Sofia Arriaga Cerqueir