O gene rbcL como barcode para identificação forense de Cannabis sativa

Cannabis sativa é uma das espécies mais antigas de plantas domesticadas e permanece como uma das culturas mais amplamente difundida e a droga ilícita mais consumida no mundo. Há uma grande difi culdade em identifi car e individualizar as amostras de Cannabis sp, difi cultando a correlação a prováveis locais de plantações ilegais, o que permitiria revelar rotas de tráfi co, relacionar grupos criminosos e distinguir amostras legais daquelas comercializadas como droga, onde o cultivo é permitido. A principal fi nalidade do DNA Barcode é o de proporcionar uma rápida e precisa identifi cação de organismos a partir de uma pequena região padronizada do genoma que ajuda a caracterizar e distinguir espécies e indivíduos não identifi cados para atribuir à espécie. Um dos genes candidatos é o ribulose-1,5-bisfosfato carboxilase/oxigenase (rbcL), utilizado como um sistema de DNA Barcode e presente no DNA dos cloroplastos das plantas, sendo o responsável pela produção subunidade maior da que converte dióxido de carbono e água em carboidratos.Nosso objetivo é o desenvolvimento de um protocolo efi ciente de extração de DNA e de sequenciamento do gene rbcL para análise forense de amostras apreendidas da Polícia Judiciária. DNA de amostras de Cannabis sativa,caracterizadas no ICCE/DGPTC/PCERJ, foi extraído utilizandoo Mini DNeasy Plant (Qiagen)no IPPGF/DGPTC/PCERJ. O material foi transferido para o LabFor/UFRJe um fragmento de 735 pb do gene rbcL foi amplifi cado através de um par de iniciadores descritos na literatura como universais para plantas.O fragmento foi sequenciado, com o protocolo do BigDye v3.1, usando ABI 3500 (Life Technologies). As comparações das sequências foram realizadas no software Geneious (Biomatters). A nossa sequência consenso de 559 pb foi comparada às seqüências que correspondem às regiões rbcL em Cannabis sativa depositadas no GenBank, e observamos a ocorrência de polimorfi smos (SNPs) entre as amostras dos Estados unidos, Reino Unido e China, sugerindo que se trata de uma assinatura genética para análise forense.Cannabis sativa is one of the oldest species of domesticated plants and crops remains one of the most widely deployed and most used illicit drug in the world. There is a great diffi culty in identifying and differentiating the samples of Cannabis sp, complicating the correlation of the likely places illegal plantations, which would reveal traffi cking routes, criminal groups relate and distinguish those samples legal marketed as a drug, where cultivation is permitted. The main purpose of the DNA barcode is to provide a rapid and accurate identifi cation of organisms from a standard small region of the genome that help characterize and distinguish between species and individuals not to assign the identifi ed species. A candidate gene is the ribulose-1 ,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase (rbcL), used as a DNA barcode system and present in chloroplast DNA of plants, and are responsible for producing large subunit of converting carbon dioxide and water into carbohydrates. Our goal is to develop an effi cient protocol for DNA extraction and sequencing ofrbcL gene for forensic analysis of seized samples of the Judicial Police. DNA samples from Cannabis sativa were characterized at ICCE/DGPTC/PCERJ and extracted using the DNeasy Plant Mini kit (Qiagen) at IPPGF/DGPTC/PCERJ. The material was transferred to LabFor/UFRJ and a fragment of 735 bprbcL gene was amplifi ed using a primer pair described in the literature as universal plants. The fragment was sequenced with the BigDye v3.1 protocol using ABI 3500 (Life Technologies). Comparisons of the sequences were performed in software Geneious (Biomatters). Our consensus sequence of 559 bp was compared to sequences that correspond to regions rbcL in Cannabis sativa deposited in GenBank, and observe the occurrence of polymorphisms (SNPs) between samples of the United States, Britain and China, suggesting that it is a genetic signature for forensic analysis