Нарушение в генах фолатного и метионинового цикла у женщин с привычным невынашиванием беременности

ISMP Institutul Mamei şi Copilului, Centrul de Sănătate a Reproducerii şi Genetică MedicalăBackground: Pathogenesis in recurrent pregnancy loss (RLP) is complex and involves the interaction of multiple genetic and environmental factors. Is supposed that genetic polymorphisms in MTHFR (C677T and A1298C), MTR (A2756G) and MTRR (G66A) genes may be associated with the risk of recurrent pregnancy loss. In this study, we aimed to investigate the association between the polymorphism of MTHFR, MTR, MTRR genes and pregnancy loss. Methods: In this study, we determined the genotypic frequencies of the MTHFR, MTR, MTRR gene polymorphisms in a sample of 274 women from Moldova, 166 with 2 and more miscarriages and 108 without a history of miscarriages, with 2 healthy births. The genomic DNA was extracted from the peripheral blood collected on EDTA. The methods used to study polymorphisms were PCR and PCR-RFLP. Statistical analysis was performed using the www.gen-exp.ru site. Results: The results of this study showed that women with recurrent pregnancy loss have a higher proportion of the MTHFR677TT, MTHFR 677CT, MTR2756AG, MTRR66GG genotype compared with the control group, does not present significant differences between the study group and control (p>0.05). The test Hardy-Weinberg was applied for the control and research group. Have been established no statistically significant differences (p>0.05) between the observed and theoretically expected genotypic frequencies for MTHFRC677T, MTHFR A1298C, MTR A2756G polymorphisms, but for MTRR G66A polymorphism have found the Hardy-Weinberg disequilibrium in control and research groups (χ2 =22.81, p=0.000, respectively χ2 =28.31, p=0.000). Conclusion: Our study revealed the role of folate and methionine cycle genes polymorphisms (MTHFR, MTR, MTRR) in the etiology of recurrent pregnancy loss showed no correlation between the results obtained from the two groups (χ2 0.05), but the risk of pregnancy loss is higher for women carrying MTR 2756AG genotype, OR=1.38, 95% CI [0.81-2.34], as well as MTRR 66AA genotype (OR=1.19, 95% CI [0.21-6.59]).Актуалъностъ: Патогенез привычного невынашивания беременности (ПНБ) сложный и включает взаимодействие нескольких генетических и экологических факторов. Предполагается, что генетические полиморфизмы в генах MTHFR (C677T и A1298C), MTR (A2756G) и MTRR (G66A) могут быть связаны с риском ПНБ. В этом исследовании, мы изучали корреляции между этими полиморфизмами и ПНБ. Методы: Определялись генотипические частоты полиморфных генов MTHFR, MTR, MTRR у 274 женщин из Молдовы, из которых 166 женщин с двумя и > потерями и 108 без потерь с 2 нормальными родами. Геномную ДНК экстрагировали из периферической крови. Были использованы следующие молекулярно-генетические методы: PCR и PCR-RLFP. Статистическая обработка с использованием сайта www.gen-exp.ru. Результаты: Результаты данного исследования показали, что женщины с привычным невынашиванием имеют более высокую долю MTHFR677TT, MTHFR 677CT, MTR 2756AG, MTRR 66GG генотипа по сравнению с контрольной группой, но данные величины не являются статистически значимыми (р>0,05). Тест Харди-Вайнберга был проведён в группе исследуемой и контрольной группе и при сравнении наблюдаемых генотипических частот и теоретически ожидаемым для MTHFR C677T, MTHFR A1298C, MTR A2756G, не было выявлено статистически значимых различий (р>0,05), но для полиморфизма MTRR G66A наблюдалось статистически значимое отклонение от распределения Харди-Вайнберга в исследуемой и контрольной группе (χ2 =22,81, р=0,000, соответственно χ2 =28,31, р=0,000). Выводы: Исследование не выявило существенных различий между частотами генотипов в двух исследуемых группах (χ2 0,05), но риск ПНБ выше в 1,5 раза для женщин, несущих MTR 2756AG генотип, OR=1.38, 95% CI [0.81-2.34], а также несущих MTRR 66AA генотип (OR=1.19, 95% CI [0.21-6.59])

Оценка витамина D у детей с первичным ожирением

IP Universitatea de Stat de Medicină și Farmacie Nicolae Testemițanu, IMSP Institutul Mamei și CopiluluiÎn ultimele decenii, prevalența excesului ponderal la copii a crescut constant în întreaga lume. Situația este îngrijorătoare, deoarece are impact atât asupra sănătății actuale a copilului, cât și asupra celei de viitor adult. Apariția excesului ponderal presupune interacțiuni multiple între diverși factori: genetici, sociali, comportamentali, metabolici, celulari și moleculari, în urma cărora se produc modificări în echilibrul energetic. Constituind o tulburare cronică a stării de nutriție, caracterizată prin creșterea greutății corporale pe seama țesutului adipos, obezitatea mai este însoțită de dereglarea verigilor evidente ale metabolismului glucidic, lipidic și proteic și de o serie de comorbidități. Cei 100 de copii participanți în cercetare au fost testați în vederea identificării markerilor biochimici și hormonali, a nivelului 25(OH) vitamina D, ce denotă o afectare asociată obezității. Scopul cercetării a fost aprecierea nivelului vitaminei D în corelație cu indicele masei corporale și unii parametri biochimici la copiii cu obezitate primară. La copiii cercetați s-a observat un nivel mediu crescut al hormonului paratiroidian, care se corelează cu un deficit de Ca și vitamina D. Așadar, obezitatea primară la copii se asociază cu un deficit evident de 25(OH) vitamina D.In recent decades, the prevalence of overweight in children has steadily increased throughout the world. The situation is worrying, because it has it mark on both the current child’s health and the adult’s future. The occurrence of overweight involves multiple interactions between genetic, social, behavioral, metabolic, cellular and molecular factors resulting in changes in the energy balance. Being a chronic nutritional disorder, characterized by increased body weight due to fat, obesity is accompanied by disruptions of obvious links of glucose, lipid and protein metabolism, and a series of comorbidities. The 100 children participating in the research tested to identify the biochemical and hormonal markers, level 25(OH) Vitamin D, which denotes an obesity related disorder. The aim of the research was to evaluate the Vitamin D level in correlation with BMI and some biochemical parameters in children with primary obesity. An elevated PTH level, correlated with a deficiency of Ca and Vitamin D, observed in the analyzed children. Therefore, primary obesity in children is associated with an apparent shortage of 25(OH) Vitamin D.За последние десятилетия распространенность избыточного веса у детей неуклонно возрастала во всем мире. Ситуация тревожная, потому что она влияет как на здоровье нынешнего ребенка, так и на будущее взрослого. Возникновение избыточного веса включает в себя множественные взаимодействия между генетическими, социальными, поведенческими, метаболическими, клеточными и молекулярными факторами, что приводит к изменениям энергетического баланса. Будучи хроническим нарушением питания, характеризующимся увеличением массы тела из-за жира, ожирение сопровождается нарушением явных связей метаболизма глюкозы, липидов и белков, и ряда сопутствующих заболеваний. 100 детей, участвовавших в исследовании, были протестированы для выявления биохимических и гормональных маркеров, уровня 25(OH) витамина D, который обозначает заболевание, связанное с ожирением. Целью исследования являлось определение уровня витамина D в корреляции с ИМТ и некоторыми биохимическими показателями у детей с первичным ожирением. У анализируемых детей наблюдался повышенный средний уровень ПТГ, связанный с дефицитом Ca и витамина D. Таким образом, первичное ожирение у детей связано с явной нехваткой 25(ОН) витамина D

Проблемы диагностики митохондриальных нарушений: описание клинических случаев

Introducere. Maladiile mitocondriale sunt cele mai frecvente tulburări neurometabolice moștenite, ce pot apărea la orice vârstă și sunt provocate de mutații ale genelor din ADN-ul mitocondrial (ADNmt), dar și ADN-ul nuclear (ADNn) care codifică proteinele mitocondriale structurale sau cele implicate în funcția mitocondrială. Rapoarte de caz. Primul caz este cel al unui băiat, născut la termenul de 40 sa, prin operație cezariană urgentă din cauza insuficienței secundare a forțelor de contracție cu greutatea de 2900 g, scor Apgar 6/7, în cuplu non-consangvin. Având în vedere prezența acidozei metabolice profunde, hiperalaninemie, tablou clinic manifestat prin convulsii, decompensare metabolică, hepatomegalie, deteriorarea bruscă și progresivă a stării de sănătate s-a suspectat o eroare înnăscută de metabolism, cu predilecție o patologie mitocondrială. Pe parcursul internării starea pacientului s-a complicat iar în pofida măsurilor de resuscitare, s-a constatat moarte clinică a nou-născutului. Post-mortem a fost efectuată secvențierea Sanger completă a genomului mitocondrial, însă nu s-a denotat nici o mutație patologică la nivelul ADNmt. Pacientul 2, se prezintă primar la vârsta de 15 ani, copil I, din cuplu non-consangvin, născut la termen cu acuze la pierdere bruscă a vederii la ochiul drept de la vârsta de 14 ani, iar peste 2-3 săptâmâni și la ochiul stâng, dureri oculare la privier, nistagm, toleranță scăzută la efort fizic, fatigabilitate, scotom centra relative la ochiul stâng și scotom central absolut la ochiul drept. În rezultatul secvențierii Sanger a fost identificată mutația m.11778G>A, sugestivă pentru Neuropatia optică ereditară Leber (LHON). Discuții. În cele două cazuri ilustrate mai sus, am dorit să evidențiem că diagnosticarea patologiei mitocondriale primare este dificilă și chiar și atunci când tabloul clinic și investigațiile biochimice sugerează prezența certă a unei boli mitocondriale, diagnosticul molecular genetic este cel care face diferența. Concluzii. Având în vedere că maladiile mitocondriale sunt asociate cu diverse manifestări și simptome clinice eterogene, subliniem importanța unei abordări integrative multidisciplinare la nivel clinic, biochimic, imagistic și genetic pentru diagnosticul, managementul și tratamentul pacienților cu simptomatologie sugestivă maladiilor mitocondriale.Введение: Митохондриальные заболевания являются наиболее распространенными наследственными нейрометаболическими нарушениями, которые могут появиться в любом возрасте и вызваны мутациями в генах митохондриальной ДНК (мтДНК), а также ядерной ДНК (яДНК), которые кодируют структурные митохондриальные белки или белки, участвующие в митохондриальной функции. Описание клинических случаев: Первый случай – мальчик, рожденный в срок 40 недель путем экстренного кесарева сечения по поводу вторичной недостаточности сократительной способности матки, массой 2900 г, оценка по шкале Апгар 6/7, у некровнородственной пары. Учитывая наличие глубокого метаболического ацидоза, гипераланинемии, клинической картины, проявляющейся судорогами, метаболической декомпенсацией, гепатомегалией, внезапным и прогрессирующим ухудшением самочувствия, заподозрили врожденное нарушение метаболизма, преимущественно митохондриальную патологию. При госпитализации состояние больного осложнилось и, несмотря на проведенные реанимационные мероприятия, констатирована клиническая смерть новорожденного. Было проведено посмертное полное секвенирование митохондриального генома по Сэнгеру, но патологических мутаций мтДНК обнаружено не было. Пациент 2, впервые обратился в возрасте 15 лет, первый ребенок от некровнородственной пары, родился в срок, с обвинениями в внезапной потере зрения на правый глаз с 14 лет, через 2-3 нед. также в левом глазу, боль в глазу при взгляде, нистагм, низкая переносимость физической нагрузки, повышенная утомляемость, относительная центральная скотома левого глаза и абсолютная центральная скотома правого глаза. В результате секвенирования по Сэнгеру была идентифицирована мутация m.11778G>A, что свидетельствует о наследственной атрофииb зрительных нервов Лебера (LHON). Обсуждения: В двух приведенных выше случаях мы хотели подчеркнуть, что диагностика первичной митохондриальной патологии затруднена, и даже когда клиническая картина и биохимические исследования указывают на определенное присутствие митохондриального заболевания, решающую роль играет молекулярно-генетический диагноз. Заключение: Учитывая, что митохондриальные заболевания связаны с различными гетерогенными клиническими проявлениями и симптомами, мы подчеркиваем важность междисциплинарного интегративного подхода на клиническом, биохимическом, инструментальном и генетическом уровне для диагностики, ведения и лечения пациентов с симптоматикой, указывающей на митохондриальные заболевания

Гены II фазы (GSTM1, GSTT1, GSTM1) детоксикации ксенобиотиков у женщин с привычным невынашиванием беременности

ISMP Institutul Mamei şi Copilului, Centrul de Sănătate a Reproducerii şi Genetică MedicalăBackground: Recurrent pregnancy loss (RPL) is a multifactor and distressing disease. There are still approximately half of the RPL patients with cause not being identified to date. Is supposed that genetic polymorphisms in glutathione S-transferases (GSTs) may be associated with the risk of recurrent pregnancy loss. In this study, we aimed to investigate the relationship between the polymorphism of GSTM1, GSTT1, GSTP1 and the pregnancy loss. Methods: A case-control study of 100 cases with RPL and 100 healthy women was conducted. Was investigated DNA of 100 healthy children aged up to 17 years, in order to make a comparative analysis of GST polymorphisms in Moldova with other countries. They were genotyped for polymorphisms of GSTM1, GSTT1 and GSTP1 using PCR, PCR/RLFP methods. Results: We found that the frequencies of genotypes between cases and controls have no significant difference (p>0.05). 43% of the cases with RPL and 51% of the controls had the GSTM1 null genotype [odds ratio (OR)=0.72, 95% confidence interval (CI)=0.49-1.07)]. On the other hand, 28% of the cases and 35% of the controls had the GSTT1 null genotype (OR = 0.72; 95% CI=0.47-1.10). The frequency of GSTP1 gene of the cases and control is the following: GSTP1 Ile/Ile–49% and 51% (OR=0.92; 95%CI=0.53-1.71); GSTP1 Ile/Val–42% and 43% (OR=0.96; 95%CI=0.55- 1.68); GSTP1 Val/Val–9% and 6% (OR=1.55; 95%CI=0.53-4.53). However, the differences in genotype frequencies between the study and control group are not statistically significant (P>0.05). The comparative analysis performed in the healthy population of Moldova and other countries have found that the frequency of GSTM1 null genotype in Moldova (50%) is similar to that in Ukraine, Italy, Russia, Egypt and Brazil (p>0.05), The frequencies of genotypes GSTT1(+) and GSTT1 0/0 in the Moldavian population are 64% and 36%, respectively differ significantly from the population investigated previously (p<0.05). Frequency of the GSTP1 polymorphism (GSTP1 Ile/Ile=37%; GSTP1 Ile/Val=53%; GSTP1 Val/Val=10%) differs from the same data in Ukraine, Russia and Turkey. Conclusion: The polymorphism of GSTM1, GSTT1, GSTP1 cannot be associated with the risk of recurrent pregnancy loss in Moldovan women.Актуалъностъ: Привычное невынашивание беременности (ПНБ) является многофакторной болезнью. У более половины пациентов с ПНБ причина этой болезни не было выявлена. Предполагается, что генетические полиморфизмы в глутатион S-трансфераз (GST) могут быть связаны с риском ПНБ. В этом исследовании, мы стремились обнаружить взаимосвязь между полиморфизмом GSTM1, GSTT1, GSTP1 и ПНБ. Методы: Было проведено исследование случай-контроль в выборке 100 женщин с НБ и 100 здоровых женщин-без прерывания беременности в анамнезе. Все исследованные женщины проживают в Молдове. Было генотипировано ДНК 100 здоровых детей в возрасте до 17 лет для популяционного анализа GST полиморфизма в Республике Молдова. Для генотипирования полиморфизмов GSTM1, GSTT1 и GSTP1 использовались молекулярно-генетические методы PCR, PCR/RLFP. Результаты: Нулевой генотип GSTM1 был выявлен в 43% случаев в группе с ПНБ и 51% в контрольной группе (OR=0.72, 95%Cl=0.49-1.07). Нулевой генотип GSTT1 был установлен в 28% случаев в группе с ПНБ и 35% в контроле (OR=0.72, 95%Cl=0.47-1.10). Частота генотипов GSTP1 Ile/Ile-49% и 51%; GSTP1 Ile/Val-42% и 43%; GSTP1 Val/Val-9% и 6% (в основное группе и контрольной соответственно). Однако, различия в частоте генотипов между исследуемой и контрольной группах не являются статистически значимыми (p>0.05). Сравнительный анализ популяционных частот выявил, что генотип GSTM1(+) встречается в РМ с частотой 50%, как в Украине, Италии, России, Египте. Частоты встречаемости генотипов GSTT1(+) и GSTT1 0/0 в популяции РМ составляют 64% и 36%, соответственно и значительно отличается от этих стран (р<0.05). Частоты полиморфизма GSTP1(GSTP1 Ile/Ile=37%; GSTP1 Ile/Val=53%; GSTP1 Val/Val=10%) отличается от данных Украины, России и Турции. Выводы: Полиморфизмы GSTM1, GSTT1, GSTP1 не ассоциированы с ПНБ у молдавских женщин

Determinarea creatininei urinare la pacienţii cu alcaptonurie

Introducere. Nivelul creatininei urinare este utilizat pentru a recalcula concentraţiile multor metaboliţi la estimarea vitezei de excreţie a lor cu urina, în cazurile în care colectarea urinei nictemerale este dificilă. Metoda Jaffe, bazată pe reacţia de reducere a anionului picrat în picramat cu creatinina şi utilizată pe scară largă, este simplă şi ieftină, dar nu-i suficient de selectivă faţă de alte substanţe reducătoare, care pot fi prezente în urină. La pacienţii cu alcaptonurie (AKU), acidul homogentisic (HGA), un metabolit anormal, este excretat cu urina în cantităţi destul de mari. În condiţiile metodei Jaffe, HGA nu interacţionează imediat cu acidul picric, dar se oxidează în mediu alcalin cu oxigenul atmosferic, formând produse de culoare închisă (Fig. 1), fapt ce duce la rezultate majorate considerabil pentru creatinină. Scopul lucrării: Crearea unei variante a metodei Jaffe selective faţă de acidul homogentisic. Materiale şi Metode. Spectrofotometru UV-VIS "Lambda-25" (Perkin Elmer), probe de urină normală şi de la pacienţi cu alcaptonurie, substanţe de referinţă creatinină şi HGA, reagenţi (acid picric, hidroxid de sodiu). Descrierea metodei elaborate: Toate operaţiunile s-au efectuat la temperatura aerului 20°C T 1°C, adăugând probele şi reactivele la aceiaşi temperatură. La 20 ml urină de analizat sau soluţie standard creatinină »1 mg/ml (8.84 mMol/l) se adaugă 1.6 ml apă, 0.4 ml soluţie acid picric 1% şi, în ultimul rând, 0.4 ml soluţie hidroxid de sodiu 0.75 Mol/l; se agită scurt. Exact după 3 minute de la adăugarea soluţiei hidroxid de sodiu se măsoară absorbanţa optică la lungimile de undă 520 şi 600 nm. Soluţie de compensare se foloseşte proba preparată din 20 ml apă în loc de urină. Concentraţia creatininei în urină (X, mMol/l) se calculează conform formulei: X = CSt • AU,520 - 2• 3 • AU,600/ ASt520 - 2• 3 • ASt,600 în care: CSt - concentraţia soluţiei standard creatinină, mMol/l; AU520 şi AU,600 - valori de absorbanţă optică a probei, preparate din urină, la 520 şi 600 nm corespunzător; ASt,520 şi ASt,600 - valori de absorbanţă optică a probei, preparate din soluţia standard creatinină, la aceleaşi lungimi de undă. Rezultate. Pe bază analizei spectrelor UV-VIS ale probelor model (Fig. 2) s-au selectat 2 lungimi de undă pentru măsurare: 520 nm, utilizată şi în metoda Jaffe tradiţională datorită raportului optim dintre absorbanţa acidului picramic (produsul reducerii acidului picric cu creatinina) şi absobanţă de fon a reactivului, şi 600 nm - în afara benzii de absorbanţă a acidului picramic. Coeficientul 2.3 în formula de calcul este raportul dintre valorile absorbanţei produselor de oxidare a HGA în mediu alcalin la 520 şi 600 nm. Totodată s-a observat că, în prezenţa HGA, răspunsul analitic pentru creatinină scade în timp, probabil din cauza interacţiunii dintre acidul picramic şi produsele intermediare a oxidării HGA de natură chinonă. Din acest motiv reacţia trebuie de efectuat la temperatură constantă şi în timp limitat. Metoda propusă a fost testată pe probe de urină de la pacienţii cu alcaptonurie (AKU 1, AKU 2, AKU 3, AKU 4) şi cu fenilcetonurie (urină fără HGA) (Control 1, Control 2, Control 3), comparând rezultatele cu cele obţinute prin metoda HPLC, utilizată ca metoda de referinţă (Tabelul 1). Metoda oferă rezultate veridice pentru creatinina urinară independent de prezenţa HGA. Concluzii: A fost creată o variantă simplă şi fiabilă a metodei Jaffe, cu măsurarea la 2 lungimi de undă, utilă pentru determinarea creatininei urinare la pacienţii cu alcaptonurie

Determinarea creatininei urinare la pacienții cu alcaptonurie

Introduction. Urinary creatinine is used to recalculate the concentrations of many metabolites in cases where nictemeral urine collection is difficult. The Jaffe method, widely used for this purpose, is simple and inexpensive, but not selective enough. In patients with alkaptonuria, homogentisic acid, excreted in the urine, is oxidized in alkaline environment, forming dark-colored products, leading to considerably increased results for creatinine. The aim of the study. The development of a Jaffe method variant, selective for homogentisic acid. Materials and Methods. „Lambda- 25” UV-VIS spectrophotometer (Perkin Elmer), normal urine samples, urine from patients with alkaptonuria, reference substances, reagents (picric acid, sodium hydroxide). Results. A modified variant of the Jaffe method with two wavelength measurements has been proposed, based on UV-VIS spectra analysis of the products of the interaction of creatinine with picric acid, of the metabolites obtained by homogentisic acid oxidation, as well as the kinetics of both reactions. The analytic response was calculated by the difference: A(520)-2.3·A(600). The method provides true results for creatinine in patients with alkaptonuria and it is comparable to the traditional Jaffe method after random error (CV up to 5% for medium concentrations). Conclusions. A simple and reliable variant of the Jaffe method has been developed, useful for the determination of urinary creatinine in patients with alkaptonuria.Introducere. Creatinina urinară este utilizată pentru a recalcula concentrațiile multor metaboliți în cazurile în care colectarea urinei nictemerale este dificilă. Metoda Jaffe, utilizată pe scară largă în acest scop, este simplă și ieftină, dar nu-i suficient de selectivă. La pacienții cu alcaptonurie, acidul homogentisic, excretat cu urina, se oxidează în mediu alcalin, cu oxigenul atmosferic, formând produse de culoare închisă, ceea ce duce la rezultate considerabil majorate pentru creatinina. Scopul lucrării. Crearea unei variante a metodei Jaffe, selective față de acidul homogentisic. Materiale și Metode. Spectrofotometru UV-VIS „Lambda-25” (Perkin Elmer), probe de urină normală și de la pacienți cu alcaptonurie, substanțe de referință, reagenți (acid picric, hidroxid de sodiu). Rezultate. Pe bază analizei spectrelor UV-VIS ale produselor interacțiunii creatininei cu acidul picric și a produselor de oxidare a acidului homogentisic, precum și a cineticii ambelor reacții, a fost propusă o variantă modificată a metodei Jaffe cu măsurare la două lungimi de undă, în care răspunsul analitic este diferența: A(520)-2.3·A(600). Metoda oferă rezultate veridice pentru creatinina la pacienții cu alcaptonurie și este comparabilă cu metoda tradițională Jaffe după eroare aleatorie (CV până la 5,0% pentru concentrații medii). Concluzii. A fost creată o variantă simplă și fiabilă a metodei Jaffe, utilă pentru determinarea creatininei urinare la pacienții cu alcaptonurie

DETERMINATION OF URINARY CREATININE IN PATIENTS WITH ALKAPTONURIA

Universitatea de Stat de Medicină şi Farmacie „Nicolae Testemiţanu”, Chişinău, Republica MoldovaIntroducere. Creatinina urinară este utilizată pentru a recalcula concentrațiile multor metaboliți în cazurile în care colectarea urinei nictemerale este dificilă. Metoda Jaffe, utilizată pe scară largă în acest scop, este simplă și ieftină, dar nu-i suficient de selectivă. La pacienții cu alcaptonurie, acidul homogentisic, excretat cu urina, se oxidează în mediu alcalin, cu oxigenul atmosferic, formând produse de culoare închisă, ceea ce duce la rezultate considerabil majorate pentru creatinina. Scopul lucrării. Crearea unei variante a metodei Jaffe, selective față de acidul homogentisic. Materiale și Metode. Spectrofotometru UV-VIS „Lambda-25” (Perkin Elmer), probe de urină normală și de la pacienți cu alcaptonurie, substanțe de referință, reagenți (acid picric, hidroxid de sodiu). Rezultate. Pe bază analizei spectrelor UV-VIS ale produselor interacțiunii creatininei cu acidul picric și a produselor de oxidare a acidului homogentisic, precum și a cineticii ambelor reacții, a fost propusă o variantă modificată a metodei Jaffe cu măsurare la două lungimi de undă, în care răspunsul analitic este diferența: A (520)-2.3·A (600). Metoda oferă rezultate veridice pentru creatinina la pacienții cu al captonurie și este comparabilă cu metoda tradițională Jaffe după eroare aleatorie (CV până la 5,0% pentru concentrații medii). Concluzii. A fost creată o variantă simplă și fiabilă a metodei Jaffe, utilă pentru determinarea creatininei urinare la pacienții cu alcaptonurie.Introduction. Urinary creatinine is used to recalculate the concentrations of many metabolites in cases where nictemeral urine collection is difficult. The Jaffe method, widely used for this purpose, is simple and inexpensive, but not selective enough. In patients with alkaptonuria, homogentisic acid, excreted in the urine, is oxidized in alkaline environment, forming dark-colored products, leading to considerably increased results for creatinine. The aim of the study. The development of a Jaffe method variant, selective for homogentisic acid. Materials and Methods. „Lambda-25” UV-VIS spectrophotometer (Perkin Elmer), normal urine samples, urine from patients with alkaptonuria, reference substances, reagents (picric acid, sodium hydroxide). Results. A modified variant of the Jaffe method with two wavelength measurements has been proposed, based on UV-VIS spectra analysis of the products of the interaction of creatinine with picric acid, of the metabolites obtained by homogentisic acid oxidation, as well as the kinetics of both reactions. The analytic response was calculated by the difference: A (520)-2.3·A (600). The method provides true results for creatinine in patients with alkaptonuria and it is comparable to the traditional Jaffe method after random error (CV up to 5% for medium concentrations). Conclusions. A simple and reliable variant of the Jaffe method has been developed, useful for the determination of urinary creatinine in patients with alkaptonuria

The importance of plasma amino acid profiling in the diagnosis of inborn errors of metabolism: analytical – prospective study

Introducere. Erorile înnăscute de metabolism (EIM) alcătuiesc un grup larg de tulburări cauzate de un defect genetic al proteinelor care au rol enzimatic, de transport, receptor sau structural. Incidența cumulativă a EIM în diferite populații este în jur de 1:500 – 800 nou-născuți. Recunoașterea și intervenția timpurie sunt esențiale pentru a evita consecințele dezastruoase asociate cu EIM. Fenotipul pacienților cu EIM este foarte eterogen și numai în combinație cu teste metabolice specializate poate conduce spre un diagnostic corect. Scopul studiului a fost definit ca evaluarea importanței profilului aminoacizilor plasmatici în diagnosticul EIM. Material și metode. Cuantificare aminoacizilor, prin cromatografie lichidă de înaltă performanță la analizatorul Shimadzu LC-20 cu derivatizare post-coloană cu OPA, a fost realizată în plasma a 15 pacienți cu vârste cuprinse între 0-13 ani, selectați în urma consultului genetic în baza criteriilor de includere și excludere. Părinții tuturor copiilor au semnat consimțământul în urma informării detaliate cu privire la studiu. Suplimentar au fost realizate teste complementare cum ar fi cromatografie lichida cuplată cu spectroscopie de masă în pete de sânge uscate și spectroscopie prin rezonanță magnetică nucleară în urină. Rezultate. Investigațiile de primă linie au arătat dezechilibru acido – bazic (33,3%), hipoglicemie (46,6%), valori crescute ale acidului lactic (46,6%) și amoniacului (20%). Au fost identificate valori anormale ale concentrației aminoacizilor în plasma a 4 copii (27%). Valori mărite ale glicinei (544 μmol/L, valori de referință 70,72 – 256,36 μmol/L), de rând cu raportul crescut al glicinei în lichid cefalorahidian / plasmă (0,147, normal < 0.02) au fost identificate în cazul unui pacient cu convulsii, comă și arest respirator, făcându-se suspect pentru Hiperglicinemie Noncetotică. Nivel crescut de fenilalanină (Phe 1568µmol/L, valori de referință 26.52 – 221 µmol/L) a fost identificat la un pacient suspect pentru Fenilcetonurie în urma rezultatelor screening-ului neonatal (Phe > 3mg/ dL). La fel, valoarea raportului dintre aminoacizii Phe și tirozină (Tyr) în jur de 17 este specific pentru forma clasică a Fenilcetonuriei. Concentrații crescute de alanină (> 450 µmol/L) au fost observate în cazul a 2 pacienți prezentând acidoze metabolice severe și valori ridicate ale acidului lactic fiind sugerată o eroare metabolică cu implicare mitocondrială. Rezultatele screening-ului metabolic neonatal extins și spectroscopiei RMN au îngustat spectrul suspiciunilor, facilitând astfel diagnosticul. În toate cazurile cu profil anormal al aminoacizilor în plasma se necesită aplicarea testelor genetice confirmatorii. Concluzii. Analiza cantitativă a aminoacizilor este un instrument important pentru diagnosticul EIM de „tip intoxicație” și monitorizarea nutrițională a persoanelor cu diagnostic deja stabilit.Introduction. Inborn errors of metabolism (IEM) make up a large group of disorders caused by an inherited defect of proteins that have enzymatic, carrier, receptor or structural roles. The cumulative prevalence of IEM in different populations is around 1:500 – 800 newborns, despite the fact that some of these disorders are extremely rare when taken individually. Early recognition and intervention are essential to avoiding disastrous consequences associated with IEM. The phenotype of IEM patients is very heterogeneous and only in combination with specialized metabolic test it can lead to a correct diagnosis. The aim of the study was defined as evaluation of importance of plasma amino acid profile in the diagnosis of IEM. Material and methods. Plasma amino acids quantification have been performed by high performance liquid chromatography on Shimadzu LC-20 with post column derivatization with OPA in 15 patients aged from 0 to 13 years old, selected through medical genetic counseling, based on inclusion and exclusion criteria. Inform consent has been signed by parents after receiving all necessary information regarding the study. Additionally, liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) on dried blood spots and Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (H1-NMR) on urine has been done as complementary tests. Results. The first line investigations showed acid-base imbalance (33,3%), hypoglycemia (46,6%), high lactate level (46,6%) and high ammonia level (20%). Plasma amino acid concentrations were abnormal in 4 patients (27%). Increased glycine (544 μmol/L, reference values 70,72 – 256,36 μmol/L), along with elevated glycine in cerebrospinal fluid (CSF) / plasma ratio (0,147, normal < 0.02) was detected in a patient with seizures, coma, and respiratory arrest indicating non-ketotic hyperglycinemia. High level of phenylalanine (Phe 1568µmol/L, reference values 26.52 – 221 µmol/L) has been identified in a patient suspected for Phenylketonuria after neonatal screening results (Phe > 3mg/dL). Also the ratio Phe / Tyr around 17 was specifically appreciated as for classical form of PKU. High alanine concentration (> 450 µmol/L) has been observed in two patients presenting severe metabolic acidosis and high lactate level, suggesting for a metabolic error with mitochondrial involvement. The results from extended newborn screening and NMR spectroscopy narrowed the spectrum of suspected diseases, facilitating the diagnosis. Molecular genetic tests are required for the confirmation of disease in all cases. Conclusions. Quantitative amino acids analysis is an important tool for the diagnosis of “intoxication type” of IEMs and nutritional monitoring of individuals with already established diagnosis

Dislipidemia sindromală – raportare de caz clinic a unei familii cu sindrom Alström

Institute of Mother and Child, Chisinau, Republic of Moldova “Nicolae Testemitanu” State University of Medicine and Pharmacy, Republic of MoldovaСиндром Альстрёма. (ALMS) является аутосомно-рецессивным заболеванием, вызванным мутациями в гене ALMS1. Представляется случай семьи (мальчик - 9 мес. и девочка 17 - лет), в которой первоначально диагностирован нистагм, фотофобия и дистрофия сетчатки. Физическое обследование и анализ истории болезни предполагали синдром Альстрёма. Анализ секвенирования эгзома выявила в гене ALMS1 две гетерозиготные мутации: (c.8164C> T (p.Arg2722 *) в экзоне 10 и c.8656 C>Tp.(Arg2886) chr2) гена ALMS1, что подтвердило диагноз. Пациенты с синдромом Альстрёма достигают взрослого возраста со значительным бременем заболевания, которое постоянно снижает качество их жизни. Дистрофия сетчатки, ожирение, инсулинорезитентность сахарный диабет 2 типа, двусторонняя нейросенсорная тугоухость и низкий рост – вот лишь некоторые из многих проблем, возникающих при ведении этих пациентов. Дислипидемию при тщательном наблюдении и раннем выявлением можно лечить, следуя изменением образа жизни, а фармакологические вмешательства необходимы для эффективного лечения с целью предотвращения сердечно-сосудистых заболеваний. Дислипидемия является как правило результатом несбалансированной диеты, но в данном случае, нарушение представлено как симптом проявления генетического расстройства (Alström syndrome).Sindromul Alström (ALMS) este o patologie recesivă autozomală cauzată de mutații ale genei ALMS1. Raportăm cazul unei familii cu 2 copii (băiat 9 luni și o fetiță de 17 ani), diagnosticați inițial cu nistagmus, fotofobie și distrofia retinei. Datele anamnestice, obiective și clinice au determinat suspecția sindromului Alström. Analiza prin secvențiere a întregului exon a relevat 2 variante heterozigote ale genei ALMS1: (c.5926deIGp Glu19765erfs.8chr2.73679577 și c.8656 C>Tp. (Arg2886) chr2.737177739), ceea ce a confirmat diagnosticul. Pacienții cu sindromul Alström ating vârsta adultă cu o povară semnificativă a bolii care le reduce continuu calitatea vieții. Distrofia retinei, obezitatea, diabetul zaharat de tip 2, insulinorezistența, surditatea neuro-senzorială bilaterală și hipostatura sunt doar câteva dintre numeroasele provocări ale managementului acestor pacienți. Aceste tulburări pot fi controlate prin detectarea lor precoce și monitorizarea adecvată. Dislipidemia ușoară până la moderată poate fi gestionată prin respectarea modificărilor stilului de viață, iar intervențiile farmacologice sunt esențiale pentru un tratament eficient în vederea prevenirii bolilor cardiovasculare. Dislipidemia este generată de o alimentație dezechilibrată, dar în cazul prezentat, aceasta a servit ca unicul semn biochimic din cadrul unui sindrom genetic (Alström syndrome)

Врожденный гипотиреоз и роль неонатального скрининга в раннем диагнозе в Республике Молдова.

Congenital hypothyroidism and the role of neonatal screening in early diagnosis of CH in the Republic of Moldova.Hipotiroidismul congenital (CH) reprezintă una dintre cele mai frecvente cauze de retard mental care poate fi prevenit, cu o incidență la nivel mondial de 1:3000-4000 de nou-născuți. Manifestările clinice sunt adesea subtile sau nu sunt prezente la naștere. Lu&acirc;nd &icirc;n considerație că diagnosticul de HC poate fi omis &icirc;n perioada postnatală, iar printre consecințele acestuia este retardul mental ireversibil, se recomandă prezența unui screening neonatal al HC pentru inițierea unui tratament c&acirc;t mai precoce. &Icirc;n Republica Moldova, screening-ul HC a fost restabilit pe o perioada de 4 luni, printr-un proiect pilot cu IBL International (Germania). Materialul cercetării au servit fi șe de screening neonatala 7956 nou-născuți aleși aleatoriu. Evaluarea fi șelor a fost realizată prin metoda ELISA cu utilizarea reactivelor din setul &rdquo;TSH neonatal screening ELISA&rdquo;, furnizată de IBL International (Germania). Valori ale TSH &gt;20 mIU/L au fost considerate pragul de cut-off pentru hipotiroidism congenital. &Icirc;n urma analizei primare, 7941 nou-născuți aveau valorile normale ale TSH (&lt;10 mIU/L), 10 copii aveau valori cuprinse &icirc;ntre 10 și 20 mIU/L; 5 copii &ndash; valori &gt;20 mIU/L. Drept urmare, 1:530 nou-născuți au fost suspecți pentru HC, iar 1:3978 nou-născuți s-au confi rmat cu Hipotiroidism Congenital &icirc;n cohorta analizată. Se recomandă reinițierea screeningului neonatal pentru Hipotiroidism Congenital. &nbsp;Врожденный гипотиреоз и роль неонатального скрининга в раннем диагнозе в Республике Молдова