Escherichia coli, produtoras de shigatoxinas, detectadas em fezes de bovinos leiteiros e em diferentes pontos do processo de ordenha

Este trabalho teve como objetivo determinar a prevalência de Escherichía calí produtoras de shigatoxinas e E. calí dos sorogrupos 0157, 0111 e 0113 em rebanhos leiteiros do Município de Jaboticabal-SP. A presença de seqüências stx1, stx2e eae foi detectada pela reação em cadeia da polimerase (PCR) em amostras de fezes, água, leite, mão de ordenhador, insuflador de ordenhadeira e teto. Todas as amostras stx e eae positivas foram submetidas a uma nova reação de PCR para detecção das seqüências rfb 0157, 0111 e 0113. Observou-se uma alta prevalência (72,16%) de seqüências stx nas fezes dos bovinos. Os coeficientes de prevalência das seqüências rfb 0157, 0111 e 0113 nas fezes dos bovinos foram, respectivamente, 14,77%, 0,2% e 30,83%. Detectaram-se seqüências stx em amostras de água (19,51 %), leite (33,33%), mão de ordenhador (3,57%), e teto (7,14%). Ainda nas amostras de água e leite foram detectadas Escheríchía colí 0157 e 0113. Por meio da separação imunomagnética, isolou-se 53,62% das amostras PCR 0157 positivas, sendo destas 72,97% produtoras de enterohemolisina. Foram isoladas 25% das amostras PCR 0113 positivas. Animais de todos os rebanhos (100%) apresentaram em suas fezes STEC e E. calí 0113 e os sorogrupos 0157 e 0111 foram observados em 60,0% e 10,0% dos rebanhos, respectivamente. Concluiu-se que a alta prevalência de STEC detectada em rebanho leiteiro evidenciou que as fezes de bovinos desempenham um papel importante na contaminação ambiental e podem oferecer risco de agravo à saúde pública.The objective of this study was to determine the prevalence of Shigatoxigenic Escherichía colí (STEC) and STEC serogroups 0157, 0111 and 0113 in feces, water, milk, milkman's hands, teat and teatcup sampled in dairy farms in Jaboticabal-SP. Samples were collected from 10 herds and assessed for the presence of the virulence genes stX1, stX2 and eae by polymerase chain reaction (PCR). Ali stx and eae positive samples were submitted to a second PCR reaction targeting the sequences rfb 0157, rfb 0111 and rfb 0113. High prevalence of stx was detected (72,16%) in fecal samples, whereas the prevalence of sequences rfb 0157, rfb 0111and rfb 0113 were 14,77%, 0,2% and 30,83%, respectively. Sequence stx was detected in water (19,51 %), milk (33,33%), milkman's hands (3,57%) and teat samples (7,14%). It was also detected Escheríchía colí 0157 and 0113 in water and milk samples. It was isolated, by immunomagnetic separation, 53,62% of the PCR positive samples, from these, 72,97% were enterohaemolytic. 25% of the 0113 PCR positive samples were isolated. STEC was identified in ali herds (100%), and serogroups 0157, 0111 and 0113 were observed in 60%, 10% and 100% of the herds, respectively. In conclusion, the high STEC prevalence detected in dairy herds evidences that bovine feces might play an important role as a contamination source in the region of Jaboticabal.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Shigatoxigenic Escherichia coli serogroups O157, O111 and O113 in feces, water and milk samples from dairy farms

Este trabalho teve como objetivo determinar a prevalência de Escherichia coli Shigatoxigênicas dos sorogrupos O157, O111 e O113 em bovinos leiteiros, água e leite de propriedades rurais do Município de Jaboticabal/SP. Para isso, foram colhidas 454 amostras de fezes, 54 amostras de água e 30 amostras de leite e pesquisada a presença de seqüências stx1, stx2 e eae pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Todas as amostras stx e/ eae positivas foram submetidas a uma nova reação de PCR para detecção das seqüências rfb O157, rfb O111 e rfb O113. Uma alta ocorrência (59,9%) de stx foi detectada nas fezes dos bovinos. Os coeficientes de prevalência das seqüências rfb O157, O111 e O113 nas fezes dos bovinos foram, respectivamente, 18,9%, 3,3% e 30,4%. Todas as seqüências foram encontradas com maior freqüência em bezerros e novilhas. As seqüências eae e stx2 foram as mais detectadas entre as amostras de fezes. Foram detectados 1,9% e 3,3% de seqüências stx na água e no leite, respectivamente. Nas amostras de água observou-se uma baixa prevalência de O113 e não foram detectadas O157 e O111. Nenhum dos sorogrupos pesquisados foi encontrado nas amostras de leite. STEC foram identificadas em todos os rebanhos (100%) e os sorogrupos O157, O111 e O113 foram observados em 40,0%, 50,0% e 90,0% dos rebanhos. Conclui-se que a prevalência de STEC em fezes de bovino, no Município de Jaboticabal/SP é alta, caracterizando-a como importante via de contaminação ambiental para esses microrganismos.The objective of this study was to determine the prevalence of Shigatoxigenic Escherichia coli (STEC) and STEC serogroups O157, O111 and O113 in feces, water and milk sampled in dairy farms in Jaboticabal, SP, Brazil. Feces (n=454), water (n=54) and milk samples (n=30) were collected from 10 herds and assessed for the presence of the virulence genes stx1, stx2 and eae by polymerase chain reaction (PCR). All stx and eae positive samples were submitted to a second PCR reaction targeting the sequences rfb O157, rfb O111 and rfb O113. High prevalence of stx was detected (59.9%) in fecal samples, whereas the prevalence of sequences rfb O157, rfb O111 and rfb O113 was 18.9%, 3.3% and 30.4%, respectively. All sequences were detected more frequently in calves and heifers. Sequences stx2 and eae were prevalent in the fecal samples. stx sequences were detected in 1.9% and 3.3% of water and milk samples, respectively. Low prevalence of E. coli O113 was observed in water samples, whereas no E. coli O157 or E. coli O111 was detected. Furthermore, none of the serogroups were identified in milk samples. STEC was identified in all herds (100%), and serogroups O157, O111 and O113 were observed in 40%, 50% and 90% of the herds, respectively. In conclusion, the high STEC prevalence detected in dairy herds evidences that bovine feces might play an important role as a contamination source in the region of Jaboticabal, Brazil.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

ISOLATION OF SHIGATOXIGENIC ESCHERICHIA COLI SEROGROUPS O157 AND O111 BY ISOLAMENTO DE CEPAS DE ESCHERICHIA COLI SHIGATOXIGÊNICAS SOROGRUPOS O157 E O111 POR SEPARAÇÃO IMUNOMAGNÉTICA APÓS DETECÇÃO POR PCR (NOTA DE PESQUISA)

<span><p align="justify">The objective of this study was to verify the isolation tax by immunomagnetic separation (IMS) of strains of Shigatoxin producing <em>Escherichia coli</em> serogroups O157 and O111 in dairy farms in Jaboticabal-SP, Brazil, starting from positive samples, detected by the polimerase chain reaction (PCR). Initially feces, water and milk samples were submitted to a selection process, through a PCR multiplex, in order to detect the presence of sequences <em>stx<sub>1</sub>, stx<sub>2</sub> </em>and<em> eae</em>. All of the positive samples in this first phase were submitted to a new PCR reaction targeting the sequences <em>rfb</em> O157 and<em> rfb</em> O111, what resulted in, respectively, 14.8% and 0.2% of positive feces samples for those serogroups and 2.4% and 10.0%, respectively, of water and milk positive samples for the serogroup O157. Those PCR positive samples were submitted to IMS, isolated strains of <em>E. coli</em> O157, were obtained of only 53.6% of the feces samples. There were no isolated strains of <em>E. coli</em> O157 from water and milk samples, they were not also isolated strains of <em>E. coli</em> O111 from any sample type. In conclusion, IMS, although more sensitive than other techniques, still doesn’t allow the isolation of <em>E. coli</em> O157 and O111 strains, of 100% of the PCR positive samples.</p><p align="justify">KEY WORDS: <em>E coli </em>O111, <em>E. coli </em>O157, immunomagnetic separation, PCR, shigatoxin.</p></span> <span><p align="justify">Este trabalho teve como objetivo verificar a taxa de isolamento por separação imunomagnética (IMS) de cepas de <em>Escherichia coli</em> produtoras de shigatoxinas dos sorogrupos O157 e O111 em rebanhos leiteiros do Município de Jaboticabal, SP, a partir de amostras positivas, detectadas pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Inicialmente, amostras de fezes, água e leite foram submetidas a um processo de triagem, por meio de uma PCR multiplex, a fim de detectar a presença de seqüências <em>stx<sub>1</sub></em>, <em>stx<sub>2 </sub></em>e <em>eae</em>. Submeteram-se todas as amostras positivas nesta primeira fase a uma nova reação de PCR para detecção das seqüências <em>rfb</em> O157 e O111, o que resultou em, respectivamente, 14,8% e 0,2% de amostras de fezes positivas para esses sorogrupos e 2,4% e 10,0%, respectivamente, de amostras de água e leite positivas para o sorogrupo O157. Essas amostras PCR positivas foram submetidas à IMS, obtendo-se cepas isoladas de <em>E. coli</em> O157, de apenas 53,6% das amostras de fezes. Não se isolaram cepas de <em>E. coli</em> O157 de amostras de água e leite, nem cepas de <em>E. coli</em> O111 de nenhum tipo de amostra. Concluiu-se que a IMS, embora mais sensível que outras técnicas, ainda não permite o isolamento de cepas de<em> E. coli</em> O157 e O111, de 100% de amostras PCR positivas. </p>PALAVRAS-CHAVES: <em>E. coli </em>O157, <em>E. coli </em>O111, PCR, separação imunomagnética shigatoxina</span&gt

Avaliação da eficiência da desinfecção de teteiras e dos tetos no processo de ordenha mecânica de vacas

O presente trabalho teve como objetivos avaliar a eficiência do processo de desinfecção de teteiras por imersão em solução desinfetante utilizando duas fontes de cloro, hipoclorito de sódio e cloro orgânico, a dinâmica de cloro residual nesses dois tipos de soluções, ao longo do processo de ordenha, e a eficiência de três métodos de desinfecção: imersão, spray e esponja na remoção de microrganismos dos tetos de vacas em lactação, utilizando o cloro como desinfetante. Foram determinados os números de coliformes totais, coliformes fecais, Staphylococcus sp e microrganismos mesófilos nas amostras colhidas das teteiras, dos tetos e da solução desinfetante. Os resultados obtidos demonstraram que a prática da desinfecção de teteiras entre vacas, utilizando-se hipoclorito de sódio ou dicloroisocianurato de sódio como fontes de cloro, na concentração em torno de 150ppm não foi eficiente na redução dos microrganismos presentes nas teteiras. A solução desinfetante a base de dicloroisocianurato de sódio apresentou maior estabilidade. Os métodos de desinfecção dos tetos proporcionaram redução nos números de microrganismos pesquisados, em todos os tratamentos utilizados, mostrando ser uma ferramenta simples para minimizar o risco de transmissão de patógenos durante a ordenha e aumentar a qualidade microbiológica do leite produzido.The purpose of this investigation was to evaluate the efficiency of the teatcup disinfection process by immersion into a disinfectant solution, using sodium hypochlorite and organic chlorine, to verify the residual chlorine dynamics in both solutions during milking time, and to evaluate three premilking disinfection methods: immersion, spray and sponge. Total coliforms, fecal coliforms, Staphylococcus sp and mesophilic microorganism counting was done. The results showed that the disinfecting clusters between individual cows, using immersion in sodium hypochlorite or organic chlorine solutions with a concentration of 150ppm, was not efficient for the rubber teatcup microorganism reduction. The organic chlorine solution showed more stability. Teatcup is a potential microorganism vehicle for milk and the mammary gland. Disinfection of the teats reduced the number of the microorganisms studied in all treatments, showing to be a simple method that can be used to reduce the microrganism transmission risks during milking and to increase the microbial quality of the milk.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Comparison of methods for the detection of biofilm formation by Staphylococcus aureus isolated from bovine subclinical mastitis

Biofilm formation is considered to be a selective advantage for Staphylococcus aureus mastitis isolates by facilitating bacterial persistence in the udder. It requires attachment to mammary epithelium, proliferation and accumulation of cells in multilayers. The objective of this study was to determine the sensitivity and specificity of three techniques for the detection of S. aureus biofilm-positive strains. Two phenotypic tests, including growth on microtitre plates and Congo red agar, were compared with a PCR technique using 94 S. aureus strains obtained from cows with subclinical mastitis from two farms in the state of São Paulo. These strains were characterised by in vitro slime production on Congo red agar, biofilm formation on microtitre plates and the presence of the icaA and icaD genes. The results revealed that 85% of the isolates tested produced slime on the Congo red agar, 98.9% of the isolates produced biofilms in vitro by adhering to sterile 96-well U bottom polystyrene tissue culture plates, and 95.7% of the isolates carried the icaA and icaD genes. The results of the phenotypic tests for biofilm formation were compared with those of the molecular analysis, and the sensitivity and specificity of the Congo red agar test were 88.9% and 100%, respectively, while those of the microtitre plate test were 100% and 25%, respectively. When the phenotypic methods for the detection of biofilm producers, namely growth on microtitre plates and Congo red agar, were compared, the sensitivity and specificity were 86% and 100%, respectively. Therefore, growth on Congo red agar and the microtitre plate test are methods that could be used to determine whether an isolate has the potential for biofilm production.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq