Estandarización de un protocolo de obtención de ADN genómico para la cuantificación de 5mC en brotes epicórmicos de Tectona grandis L.

The present investigation was carried out with the objective of defining an extraction and purification method that it provided deoxyribonucleic acid (DNA) appropriate to determine the percentage of 5mC in the genomic DNA of epicormics buds of Tectona grandis L. During the standardization of the protocol four methods were compared: 1 -classic based on saline shock solution with CTAB (hexadecil trimetil ammonium bromide), 2 - Kit of extraction of DNA plants DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) according to the protocol recommended by the maker, 3 - Kit of extraction of DNA plants DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) modified with phenol employment without silicon columns, 4 - Kit of extraction of DNA plants DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) modified with phenol and additionally silicon columns employment. The samples extracted with CTAB method, generated totally non valid electroferograms for the nucleosides presence. Valid electroferograms were obtained only when the DNA was extracted and purified with the Kit DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) modified with phenol and additionally using silicon columns, with this protocols only desoxinucleosides is obtained being verified the high purity of the samples. We described an extraction and purification method that provided genomic DNA of teak based on the phenol employment and purification with columns of SiO2, appropriate to determine in a precise way the percentage of 5mC in the genomic DNA of epicormics buds of Tectona grandis L.Keywords: extraction, methyl cytosine, metilation, purification, TeakLa presente investigación se realizó con el objetivo de definir un método de extracción y purificación que proporcionara ácido desoxirribonucleico (ADN) adecuado para determinar el porcentaje de 5 mC presente en el ADN genómico de brotes epicórmicos de Tectona grandis L. Durante la estandarización del protocolo de extracción de ADN se compararon cuatro métodos: 1- clásico basado en una solución amortiguadora salina con CTAB (hexadecil trimetil bromuro de amonio), 2- Kit de extracción de ADN de plantas DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) según el protocolo recomendado por el fabricante, 3- Kit de extracción de ADN de plantas DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) modificado con el empleo de fenol sin columnas de silicio, 4- Kit de extracción de ADN de plantas DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) con modificaciones que incluyeron el empleo de fenol y columnas de silicio. Las muestras extraídas con el método del CTAB, generaron en su totalidad electroferogramas no válidos por la presencia de nucleósidos. En cuanto a las muestras purificadas mediante el kit de extracción DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN) se pudo apreciar que solo se obtuvieron electroferogramas válidos cuando se empleó el fenol y adicionalmente las columnas de silicio, verificándose la pureza de las muestras, de cuya hidrólisis se obtienen solamente desoxinucleosidos. Se logró un de método de extracción y purificación que proporcionó ADN genómico de teca, basado en el empleo de fenol y purificación del ADN con columnas de SiO2, adecuado para determinar de forma precisa el porcentaje de metilación de residuos citosina en yemas de brotes epicórmicos de Tectona grandis L.Palabras clave: extracción, metilación, metil citosina, purificación, Tec

Cnn1 inhibits the interactions between the KMN complexes of the yeast kinetochore

El pdf del artículo es la versión de autor.-- et al.Kinetochores attach the replicated chromosomes to the mitotic spindle and orchestrate their transmission to the daughter cells. Kinetochore-spindle binding and chromosome segregation are mediated by the multi-copy KNL1 Spc105, MIS12 Mtw1 and NDC80 Ndc80 complexes that form the so-called KMN network. KMN-spindle attachment is regulated by the AuroraB Ipl1 and MPS1 Mps1 kinases. It is unclear whether other mechanisms exist that support KMN activity during the cell cycle. Using budding yeast, we show that kinetochore protein Cnn1 localizes to the base of the Ndc80 complex and promotes a functionally competent configuration of the KMN network. Cnn1 regulates KMN activity in a spatiotemporal manner by inhibiting the interaction between its complexes. Cnn1 activity peaks in anaphase and is driven by the Cdc28, Mps1 and Ipl1 kinases. © 2012 Macmillan Publishers Limited. All rights reserved.P.D.W. acknowledges financial support from the Italian Association for Cancer Research (grant 8840). T.R.H. recognizes support from the N.I.H. (grant GM087461) and the American Cancer Society (grant IRG 58-006-50). T.U.T. acknowledges a Cancer Research U.K. senior fellowship and Wellcome Trust program grant. L.J.B. acknowledges a doctoral fellowship from the European School of Molecular Medicine.Peer Reviewe