Characterization of human and rodent native and recombinant adenosine A2B receptors by radioligand binding studies

Adenosine A2B receptors of native human and rodent cell lines were investigated using [3H]PSB-298 [(8-{4-[2-(2-hydroxyethylamino)-2-oxoethoxy]phenyl}-1-propylxanthine] in radioligand binding studies. [3H]PSB-298 showed saturable and reversible binding. It exhibited a KD value of 60 ± 1 nM and limited capacity (Bmax = 3.511 fmol per milligram protein) at recombinant human adenosine A2B receptors expressed in human embryonic kidney cells (HEK-293). The addition of sodium chloride (100 mM) led to a threefold increase in the number of binding sites recognized by the radioligand. The curve of the agonist 5′-N-ethylcarboxamidoadenosine (NECA) was shifted to the right in the presence of NaCl, while the curve of the antagonist PSB-298 was shifted to the left, indicating that PSB-298 may be an inverse agonist at A2B receptors. Adenosine A2B receptors were shown to be the major adenosine A2 receptor subtype on the mouse neuroblastoma x rat glioma hybrid cell line NG108-15 cells. Binding studies at rat INS-1 cells (insulin secreting cell line) demonstrated that [3H]PSB-298 is a selective radioligand for adenosine A2B binding sites in this cell line

Intérêt du traitement antidotique par glucarpidase dans le retard d’élimination du méthotrexate (MTX) : la question de la fonction rénale.

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Implication de récepteurs P2X et P2U dans l’effet constricteur de l’ATP sur le lit vasculaire pancréatique

Nous avons étudié, sur le lit vasculaire pancréatique du Rat, les effets de l’ATP dans deux conditions expérimentales différentes. 1) En présence d’indomé-thacine, inhibiteur de la cyclooxygénase et de la formation de prostacycline (PGI2), l’ATP (substance agissant sur les récepteurs P2Y vasodilatateurs et P2X et P2U vasoconstricteurs) a été utilisé à une concentration (165 µM) qui ne modifie pas, par elle-même, le débit vasculaire pancréatique. L’indomé-thacine (10 µM) permet de révéler un effet vasocons-tricteur de l’ATP : il apparaît une diminution du débit, qui est faible mais significative et durable. Cet effet est différent de celui induit par la stimulation des récepteurs P2X et rappelle celui dû à l’activation des récepteurs P2U. 2) En présence de tosilate de 2,2’pyridylisatogène (PIT) utilisé à deux concentrations différentes, l’une (5 µM) bloquant les effets de type P2Y sur la cellule B insulino-sécrétrice et les vaisseaux pancréatiques, l’autre (25 µM) bloquant les effets de type P2X sur les vaisseaux. Selon la concentration de PIT utilisée, les effets de l’ATP sur les vaisseaux sont différents. Dans les deux cas, l’ATP n’induit qu’une vasoconstriction, mais la diminution du débit présente une cinétique totalement différente. En présence de 5 µM de PIT, il apparaît une vasoconstriction importante et immédiate, suivie d’une vasoconstriction moins prononcée mais durable, qui peuvent être attribuées respectivement à un effet sur les récepteurs P2X et sur les récepteurs P2U. Cette hypothèse est confortée par le fait que l’utilisation de PIT à 25 µM supprime totalement la vasoconstriction immédiate et intense mais transitoire et qu’il n’existe plus qu’une vasoconstriction de type P2U, progressive et durable. De ces données, il ressort que : 1) la PGI2 joue un rôle dans les effets vasodilatateurs de l’ATP; 2) aux concentrations utilisées, le PIT ne bloque pas la vasoconstriction induite par l’activation des récepteurs P2U ; 3) l’effet de l’ATP sur les vaisseaux pancréatiques dépend d’un équilibre entre ses effets vasodilatateurs liés à une activation des récepteurs P2Y et ses effets vasoconstricteurs qui font intervenir deux types de récepteurs P2X et P2U