Regulación de síntesis de enzimas pécticas en "Fusarium oxysporum" f. sp. "radicis lycopersici" : purificación y caracterización de pectín y pectato liasas

Tesis de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Ciencias Biológicas, leída el 25-04-1997En esta tesis se han estudiado las enzimas pecticas de fusarium oxysporum f.sp. Radicis-lycopersici (forl). Inicialmente se analizo la síntesis de distintas polisacaridasas (poligalacturonasa, pectin liasa, beta-1,4-glucanasa, avicelasa y beta-glucosidasa), para a continuación centrarse en las condiciones optimas de cultivo para la producción de las enzimas pecticas y caracterizacion de las mismas. La regulacion de las enzimas pecticas de forl (pectin liasa, pectato liasa y poligalacturonasa) se ha estudiado valorando las actividades enzimáticas, los patrones de expresion genica mediante traducciones in vitro y posteriores electroforesis y con la utilización de sondas especificas. Se ha demostrado una induccion por acido galacturonico y represion catabolica por glucosa. A diferencia de los resultados de otros autores no se ha detectado mayor produccion de liasas en los cultivos a ph 8,0. Se han detectado tres formas con actividad liasa, con pis de 9,20, 9,00 y 8,65, y cuatro con actividad poligalacturonasa, la principal con pi 7,35, dos con pis 6,85 y 6,55, y una minoritaria con pi 9,30. Las tres liasas actúan sobre pectina y pectato en condiciones alcalinas y tienen un absoluto requerimiento de calcio. La mas alcalina tiene preferencia por pectina, mientras que las otras dos por pectato. Las poligalacturonasas son mas activas a ph acido y son inhibidas por calcio. La pectin liasa tiene un comportamiento de tipo "endo" mientras que las pectato liasa y poligalacturonasa tienen un comportamiento de tipo "exo". Por ultimo se han purificado y caracterizado las tres liasas demostrándose un efecto sinergistico entre las dos pectato liasas. La adición de una fracción rica en pectin metilesterasa aumento la actividad de las tres liasas en presencia de pectina, lo que parece indicar que la desmetilacion de la pectina favorece la acción de las liasasFac. de Ciencias BiológicasTRUEpu

Heterologous Expression of a Plant Small Heat-Shock Protein Enhances Escherichia Coli Viability under Heat And Cold Stress Ref.: 1

A small heat-shock protein (sHSP) that shows molecular chaperone activity in vitro was recently purified from mature chestnut (Castanea sativa) cotyledons. This protein, renamed here as CsHSP17.5, belongs to cytosolic class I, as revealed by cDNA sequencing and immunoelectron microscopy. Recombinant CsHSP17.5 was overexpressed in Escherichia coli to study its possible function under stress conditions. Upon transfer from 37°C to 50°C, a temperature known to cause cell autolysis, those cells that accumulated CsHSP17.5 showed improved viability compared with control cultures. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis analysis of cell lysates suggested that such a protective effect in vivo is due to the ability of recombinant sHSP to maintain soluble cytosolic proteins in their native conformation, with little substrate specificity. To test the recent hypothesis that sHSPs may be involved in protection against cold stress, we also studied the viability of recombinant cells at 4°C. Unlike the major heat-induced chaperone, GroEL/ES, the chestnut sHSP significantly enhanced cell survivability at this temperature. CsHSP17.5 thus represents an example of a HSP capable of protecting cells against both thermal extremes. Consistent with these findings, high-level induction of homologous transcripts was observed in vegetative tissues of chestnut plantlets exposed to either type of thermal stress but not salt stres

DNA methylation and adaptive response in forest tree species

Progressive increase of temperatures as well as longer seasonal drought periods revealed by climate studies correspond to fast environmental changes that forest species face with their actual genetic background. Natural selective processes cannot develop an adaptive response within this time frame. Thus the capability of forest tree species to adapt to the new environments will depend on their genetic background, but also rely on their phenotypic plasticity. Several reports have shown the involvement of epigenetic modifiers as the basis of the phenotypic plasticity, and in particular to the adaptation to abiotic stresses. DNA methylation (methylation of cytosine residues)is one the most important epigenetic modification in eukaryotes. Itis involved in specific biological processes such as gene transcription regulation, gene silencing, mobile element control or genome imprinting.Therefore, there is a great interest in analyzing cytosine methylation levels and distribution within the genom

Regulación de síntesis de enzimas pécticas en "Fusarium oxysporum" f. sp. "radicis lycopersici" : purificación y caracterización de pectín y pectato liasas

En esta tesis se han estudiado las enzimas pecticas de fusarium oxysporum f.sp. Radicis-lycopersici (forl). Inicialmente se analizo la síntesis de distintas polisacaridasas (poligalacturonasa, pectin liasa, beta-1,4-glucanasa, avicelasa y beta-glucosidasa), para a continuación centrarse en las condiciones optimas de cultivo para la producción de las enzimas pecticas y caracterizacion de las mismas. La regulacion de las enzimas pecticas de forl (pectin liasa, pectato liasa y poligalacturonasa) se ha estudiado valorando las actividades enzimáticas, los patrones de expresion genica mediante traducciones in vitro y posteriores electroforesis y con la utilización de sondas especificas. Se ha demostrado una induccion por acido galacturonico y represion catabolica por glucosa. A diferencia de los resultados de otros autores no se ha detectado mayor produccion de liasas en los cultivos a ph 8,0. Se han detectado tres formas con actividad liasa, con pis de 9,20, 9,00 y 8,65, y cuatro con actividad poligalacturonasa, la principal con pi 7,35, dos con pis 6,85 y 6,55, y una minoritaria con pi 9,30. Las tres liasas actúan sobre pectina y pectato en condiciones alcalinas y tienen un absoluto requerimiento de calcio. La mas alcalina tiene preferencia por pectina, mientras que las otras dos por pectato. Las poligalacturonasas son mas activas a ph acido y son inhibidas por calcio. La pectin liasa tiene un comportamiento de tipo "endo" mientras que las pectato liasa y poligalacturonasa tienen un comportamiento de tipo "exo". Por ultimo se han purificado y caracterizado las tres liasas demostrándose un efecto sinergistico entre las dos pectato liasas. La adición de una fracción rica en pectin metilesterasa aumento la actividad de las tres liasas en presencia de pectina, lo que parece indicar que la desmetilacion de la pectina favorece la acción de las liasa

Vertical product differentiation and social health systems in a market for prescription drugs

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