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BMAJ-II, uma Fosfolipase A2 Homóloga Básica da Peçonha da serpente Bothrops marajoensis com potencial parasiticida
Dissertação apresentada ao Programa de Pós- Graduação: Mestrado em Biologia Experimental (PGBIOEXP) da Fundação Universidade Federal de Rondônia (UNIR) como requisito final para a obtenção do título de Mestre em Biologia Experimental. Orientador: Prof. Dr. Leonardo de Azevedo Calderon.Peçonhas de serpentes contêm várias proteínas que apresentam potencial para serem
aplicadas em diversas áreas da saúde e medicina. Uma classe de toxina que vem sendo objeto de
estudo, são as fosfolipases A2 (PLA2s), as quais têm importante participação no envenenamento
ofídico, estando associadas a diversas respostas tais como processo inflamatório, miotoxicidade,
cardiotoxicidade, hemólise e outros que ocorrem em acidentes ofídicos. Além disso, componentes
de peçonhas de serpentes, tais como as L-aminoácido oxidases e PLA2s, demonstram potencial
antiparasitário, podendo ser úteis para o desenvolvimento de alternativas terapêuticas nessa área.
O presente trabalho teve como objetivo a purificação, caracterização bioquímica e biológica de
uma nova PLA2 básica de Bothrops marajoensis com potencial atividade parasiticida. A peçonha
foi fracionada aplicando duas etapas cromatográficas iniciando por troca iônica utilizando uma
resina CM Sepharose em pH 8,0. A fração de interesse foi selecionada para as etapas seguintes
baseada em sua massa molecular e tempo de retenção, e submetida a cromatografia de fase reversa
em coluna C18. Realizou-se análise por SDS-PAGE da toxina isolada nomeada Bmaj-II, uma
análise eletroforética bidimensional, o sequenciamento parcial de seus aminoácidos, um ensaio de
atividade enzimática, uma investigação das estruturas secundárias por dicroísmo circular e ensaios
de espalhamento de luz dinâmico. Em seguida, o potencial anti-parasitário da peçonha de B.
marajoensis e de Bmaj-II foi avaliado contra promastigotas de Leishmania infantum e
epimastigotas de Trypanosoma cruzi in vitro em concentrações de 6,25 a 100 μg/mL, e contra
formas intraeritrocíticas de Plasmodium falciparum em concentrações entre 0,09 e 12,5 μg/mL.
Posteriormente, a atividade citotóxica sobre células hospedeiras HepG2 foi avaliada. A Bmaj-II
mostrou-se homogênea com uma massa molecular confirmada por espectrometria de massa
MALDI-TOF2 de 13.956 Da. Apresentou-se um pI de 9,68 indicando compatibilidade de massa e
pI de PLA2s de peçonhas de serpentes (svPLA2) básicas. Os resultados dos demais ensaios de
caracterização estrutural sugerem a Bmaj-II como PLA2 homóloga Lys49 com uma alta tendência
de formar agregações. A toxina isolada demonstrou significativa atividade antiparasitária contra
todos os protozoários, contra L. infantum e T. cruzi aproximadamente 30% em concentração de
100 μg/mL, sendo observado também, uma atividade substancialmente maior da peçonha, entre
60-80% em concentração de 100 μg/mL. A atividade da peçonha e da Bmaj-II contra P. falciparum
apresentou IC50 de 0,14 ± 0,08 e 6,41 ± 0,64 μg/mL, respectivamente, com valores de CC50 de
citotoxicidade contra células HepG2 de 43,64 ± 7,94 e 53,07 μg/mL, respectivamente. Os
resultados obtidos mostram o isolamento da Bmaj-II, uma PLA2 Lys49 inédita da peçonha de
Bothrops marajoensis além de evidenciar sua atividade microbicida sobre L. infantum, T. cruzi, e
P. falciparum. O estudo do seu potencial biotecnológico em relação à leishmaniose, a doença de
Chagas e a malária deve ser aprofundado