Produccion de compuestos antimicrobianos por Enterococcus mundtii tw278 para aumento de la seguridad microbiologica en alimentos

Introducción: Las bacterias lácticas (BL) producen una gran cantidad de compuestos antimicrobianos como ácidos órganicos, peróxido de hidrógeno, diacetilo, bioemulsificantes y bacteriocinas, que son conocidas por ser eficaces contra las bacterias patógenas y del deterioro de los alimentos.Objetivo: Seleccionar una cepa de BL productora de bacteriocina y bioemulsificanteMateriales y Métodos: Se evaluó el sobrenadante libre de células (SLC) de 60 cepas de BL, aisladas de medio marino Patagónico, para realizar un screening por actividad antimicrobiana (metodología ?spot on the lawn?) y bioemulsificante (Índice de Emulsificación 24 h (IE24) frente a diferentes sustratos hidrofóbicos). Se evaluaron diferentes medios de cultivo y temperaturas de incubación. Cepas indicadoras: Listeria innocua ATCC 33090, L. innocua 6a, L. monocytogenes Scott A, L. monocytogenes ATCC 7644, Escherichia coli ATCC 35218, E. coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 29212, E. faecium sp., Pseudomonas aureuginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Salmonella ATCC 13076 y S. typhimurium 14028s. Resultados: Sólo el SLC de E. mundtii tw278 mostró actividad antimicrobiana y bioemulsificante, en los medios LAPTg y LAPTw (suero de leche reemplaza glucosa), ambos sin el agregado de Tween 80, a una temperatura de 25°C. Esta cepa presentó además una producción de bacteriocinas de 204800 UA/mL en LAPTg a 30°C, mientras que en el medio LAPTw fue de 1600 UA/mL frente a L. monocytogenes Scott A. El IE24 frente a kerosene, aceite de girasol, de canola, de soja fue superior al 50% mientras que para los aceites de oliva y uva fue de 37 y 22%, respectivamente. Por otro lado, el SLC no inhibió el crecimiento de Salmonella ATCC 13076 pero sí de todas las demás cepas indicadoras probadas. Conclusiones: Los resultados expuestos en el presente trabajo son prometedores en términos de lograr una producción de bioemulsificantes y bacteriocinas en un medio que contiene suero de leche como fuente de C de bajo costo. Además, demuestran que la producción de bacteriocinas así como la de bioemulsificante por la cepa E. mundtii Tw278 depende de la temperatura de incubación, así como de la fuente de C empleada. Concluimos, que esta cepa así como sus metabolitos presentan un elevado potencial para ser aplicados en un alimento y así aumentar la seguridad microbiológica del mismo.Fil: Gomez, Johana Stefani. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Vallejo, Marisol. Universidad Nacional de la Patagonia "San Juan Bosco"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Marguet, Emilio Rogelio. Universidad Nacional de la Patagonia "San Juan Bosco"; ArgentinaFil: Perotti, Nora Ines. Universidad Nacional de Tucuman. Facultad de Cs.exactas y Tecnología. Departamento de Ingeniería En Procesos y Gestion Industrial. Laboratorio de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Gianni de Carvalho, Katia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaVI Simposio Latinoamericano de Inocuidad AlimentariaCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaAsociación Argentina de Microbiologí

Aislamiento de bacterias lácticas probióticas productoras de bacteriocinas a partir de salame regional

Introducción: Las bacterias lácticas (BL) son importantes en los productos alimentarios fermentados, evitando el crecimiento de microorganismos patógenos y causantes de la descomposición de los alimentos, mediante la acidificación y la producción de compuestos antimicrobianos, lo que incrementa su seguridad microbiológica.Objetivo: Aislar BL probióticas con actividad antimicrobiana de salame artesanal producido en Trancas (Tucumán, Argentina) y evaluar su efectividad en el control de Listeria monocytogenes durante el almacenamiento de yogur.Materiales y Métodos: Se realizó el aislamiento e identificación de BL por secuenciación del gen 16S RNA y tinción de GRAM. Se evaluó la capacidad para crecer en MRS agar adicionado de bilis (3 g/L) y resistencia a tracto gastrointestinal (TGI) in vitro, empleándose solución de NaCl (0,5% p/v) conteniendo pepsina (3 g/L), con pH 1,5, 2, 2,5 y 3 (jugo gástrico, JG) y la misma solución conteniendo bilis (10 g/L), con pH 8 (jugo entérico, JE). Los cultivos fueron expuestos al JG por 120 min y en seguida al JE por 24 h. A los sobrenadantes libre de células (SLC) se les evaluó su capacidad inhibitoria (por ?spot on the lawn?) contra Listeria innocua ATCC 33090, L. innocua 6a, L. monocytogenes Scott A, L. monocytogenes ATCC 7644, Escherichia coli ATCC 35218, E. coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 29212, E. faecium sp., Pseudomonas aureuginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Salmonella ATCC 13076 y S. typhimurium muk 14028s. Se determinó el principio activo causante de la inhibición por neutralización, calentamiento a 100°C y tratamiento con proteinasa K y lipasa. Se evaluó la capacidad inhibitoria de BL seleccionadas y/o bacteriocinas sobre L. monocytogenes Scott A durante el almacenamiento de yogur por 15 días a 4°C.Resultados: Se seleccionaron 2 colonias para su identificación, Lactobacillus sp. JK01 y Enterococcus sp. JK05. La actividad antimicrobiana en LAPTg a 30°C fue de 12800 UA/mL y de 409600 UA/mL, respectivamente, frente a L. innocua ATCC 33090. El SLC de Lactobacillus sp. JK01 no inhibe a E. colI ATCC 25922, P. aureuginosa ATCC 27853 y S. typhimurium muk 14028s. Ninguna de las cepas pudo inhibir el crecimiento de Salmonella ATCC 13076, el SLC de Enterococcus sp. JK05 inhibe el crecimiento de las demás cepas indicadoras probadas. El efecto inhibitorio no se vio afectado cuando se neutralizó y calentó el medio ni cuando se lo trató con lipasa, mientras que proteinasa K si afectó la inhibición. Ambas cepas crecen en MRS agar adicionado con bilis, se seleccionó a Enterococcus sp. JK05 para ser sometida al TGI in vitro, por presentar mayor actividad y espectro de inhibición más amplio. Después de la exposición por 120 min al JG, Enterococcus sp. JK05 continúa viable en las 4 condiciones probadas. La transferencia para el jugo entérico resulto en la reversión parcial del efecto causado por el jugo gástrico. Con respecto al modelo alimentario de yogur, la población de L. monocytogenes Scott A en presencia del extracto de bacteriocina (104 UA/mL) disminuye desde 6 log UFC/ml el día 1 hasta desaparecer el día 15, en el caso donde Listeria se encontraba en presencia de Enterococcus sp. JK05 desaparece en el día 10, mientras que en las muestras control el crecimiento de Listeria alcanzó 9 log UFC/ml luego de 8 h de fermentación y disminuyó 5 unidades log al finalizar el ensayo.Conclusiones: Los resultados obtenidos demuestran que Enterococcus sp. JK05 es un potencial probiótico, y su aplicación, así como de su bacteriocina, para inhibir el crecimiento de L. monocytogenes y otros patógenos causantes de enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs), resultaría beneficiosa a lo largo de la vida útil esperada de un alimento procesado.Fil: Gomez, Johana Stefani. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Diaz, Santiago. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Perotti, Nora Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Gianni de Carvalho, Katia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaVI Simposio Latinoamericano de Inocuidad Alimentaria y III Simposio Argentino de Inocuidad AlimentariaCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaAsociación Argentina de MicrobiologíaInternational Association of Food Protectio

Interação GUV de POPC com amostras bioemulsificantes produzidas por Enterococcus mundtii 278

No laboratório de Cristalografia do IFUSP foi realizada a produção de bioemulsificante e a avaliação do mecanismo de ação em relação a membranas modelo representadas por GUVs (vesiculas lipidicas gigantes). Houve um investimento grande na produção do bioemulsionante: 200 mL de LAPw (extrato de levedura 10g/L, peptona 15g/L e soro de leite 10g/L), inoculado com 1% (v/v) de um cultivo durante a noite da cepa Enterococcus mundtii 278. As condições de incubação foram: 25 °C, 24 h e um pH inicial de 6,5. Os experimentos com GUVs foram realizados para avaliar o efeito do bioemulsionante em membranas biologicas. As vesiculas foram formadas por eletroformação, diluindo os lipidios (POPC-lipidio neutro) em uma solução de sacarose 0,2M. Em seguida as GUVs formadas foram diluidas em uma solução de glucose 0,2M para observação por microscopia de contraste de fase (Zeiss 200invertido). Com amostras altamente diluídas, alguns efeitos foram observados. Com 0,14 mg/mL pouca interação foi observada. Começando em 0,28 mg/mL, as moléculas de bioemulsificante interagem com as membranas. Como consequência, a membrana expeled filamentos e brotos.Fil: Gianni de Carvalho, Katia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Gomez, Johana Stefani. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Donato, Maressa. Universidade de Sao Paulo; BrasilFil: Itri, Rosangela. Universidade de Sao Paulo; BrasilFil: Colin, Veronica Leticia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; Argentin

Control de la población de listeria monocytogenes scott A en modelo alimentario de hamburguesas

Introducción y Objetivos: La capacidad de Listeria monocytogenes para crecer en un amplio rango de temperaturas y bajo pH, y su alta tolerancia a la sal, dificultan su control en alimentos. Un medio prometedor para controlar e incluso reducir las poblaciones de L. monocytogenes en los alimentos, es mediante el uso de bacteriocinas de bacterias lácticas (BL), ya sean producidas in situ o agregadas a los mismos. En el presente estudio, se planteó como objetivo evaluar la capacidad de tres extractos concentrados de bacteriocinas, provenientes de los cultivos de Enterococcus mundtii Tw56, Tw802 y Tw807, para inhibir el crecimiento de L. monocytogenes Scott A en un modelo alimentario de hamburguesas. Materiales y Métodos: Los extractos antilisteria fueron obtenidos empleando el método de purificación descripto por Yang et al. (1992), seguido de una cromatografía de fase reversa. Las hamburguesas se prepararon a partir de los músculos del cuadríceps femoral según el método descrito por Acuña et al.(2015), La carne molida se fraccionó (A-E) y se inocularon de la siguiente manera: porción A: L. monocytogenes Scott A 104 UFC/g; porción B: E. muntiiTw56 o Tw802 o Tw807 107 UFC/g; porción C: extracto antilisteria (104 UA/g) de E. muntii Tw56 o Tw802 o Tw807; porción D: L. monocytogenes Scott A 104 UFC/g y E. muntii Tw56 o Tw802 o Tw807 107 UFC/g y porción E: L. monocytogenes Scott A 104 UFC/g y extracto antilisteria (104 UA/g) de E. muntiiTw56 o Tw802 o Tw807. Las porciones A, B y C, son los controles de L. monocytogenes Scott A, BL (E. muntii Tw56 o Tw802 o Tw807) y los extractos antilisteria, respectivamente. Se almacenaron a 4 °C en placas de Petri estériles durante 15 días. Se tomaron muestras de cada condición los días 0, 1, 3, 5, 7, 10 y 15. Se prepararon diluciones decimales para realizar recuentos viables. Para el recuento de L. monocytogenes se empleó el medio Oxford Agar (Biokar) y para las BL el medio LAPTg con pH modificado a 5,5 incubados por 48 h a 37 °C, mientras que para mesófilos totales LAPTg con un pH neutro, incubado 48 h a 30 °C. Se realizaron dos ensayos independientes por duplicado. Resultados: La población de L. monocytogenes Scott A en el modelo alimentario de hamburguesas que contiene el extracto antilisteria de E. muntii Tw56 disminuyó desde 4 log UCF/g el día 0 hasta que desaparece completamente el día 3, y en presencia de los otros extractos desaparece recién en el día 7. Por otro lado, la población de L. monocytogenes en presencia de las BL productoras desaparece en el día 5. Mientras que, sin la adición de extractos ni de las BL, el crecimiento de L. monocytogenes se mantuvo constante durante los 15 días. Conclusiones: Los resultados obtenidos, evidencian el potencial de aplicación de dichos extractos así como el agregado de las BL productoras, para inhibir el crecimiento de L. monocytogenes a lo largo de la vida útil esperada de un alimento procesado.Fil: Gomez, Johana Stefani. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Pereira, Claudia Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Vallejo, Marisol. Universidad Nacional de la Patagonia "San Juan Bosco"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Marguet, Emilio Rogelio. Universidad Nacional de la Patagonia "San Juan Bosco"; ArgentinaFil: Gianni de Carvalho, Katia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaV Congreso Argentino de Microbiología de AlimentosCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaAsociación Argentina de Microbiologí

Production of Surface-Active Compounds by a Hydrocarbon-Degrading Actinobacterium: Presumptive Relationship with Lipase Activity

The replacement of synthetic surface-active compounds (SACs) by their microbial counterparts is carving out a niche for themselves in the field of bioremediation. However, the high cost of microbial products has limited their application at a realistic scale. In the current study, several hydrocarbon-degrading microorganisms were assayed as potential SAC producers in low-cost liquid media. Only the strain CC10, placed within the class Actinobacteria, was able to produce emulsifying molecules by using a combination of sugarcane vinasse or crude glycerol (as cheap carbon substrates) with urea or peptone (as nitrogen sources). The emulsifying activity of the supernatants and the stability of emulsions formed with motor oil depended on the carbon and nitrogen sources. However, the biodegradability of these metabolites was only associated with the carbon substrate, and it was always higher than the two tested synthetic surfactants, sodium dodecyl sulfate and Triton X-100. Also, a positive linear association between emulsifying and lipase activities of the CC10 supernatants was detected (r = 0.781; p = 0.219), with the maximum activities detected in the glycerol-peptone supernatant. Interestingly, this supernatant was able to emulsify different oily substrates, a property that could be used to increase the efficiency of the treatment of effluents with high fat content.Fil: Colin, Veronica Leticia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Bourguignon, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Gomez, Johana Stefani. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Gianni de Carvalho, Katia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Ferrero, Marcela Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Amoroso, Maria Julia del R.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia; Argentin

Assessment of the bioprotective potential of lactic acid bacteria against Listeria monocytogenes in ground beef

Lactic acid bacteria can be considered as natural biopreservative and good biotechnological alternative to food safety. In this study, the antilisterial compounds produced by Enterococcus isolates from the Patagonian environment and their effectiveness for the control of Listeria monocytogenes in a food model were studied. Enterococcus isolates whose cell-free supernatant presented activity against Listeria monocytogenes were identified and evaluated for their virulence factors. The activity of the antimicrobial compounds produced by Enterococcus sp. against Listeria monocytogenes Scott A in meat gravy and ground beef during refrigerated storage was tested. The results indicated that ten Enterococcus isolates presented activity against Listeria monocytogenes and none of the selected strains presented virulence factors. L. monocytogenes in the food models containing the antilisterial compounds produced by Enterococcus sp. has decreased over the days, indicating that these compounds and cultures are an alternative to control the growth of L. monocytogenes in foods.Fil: Gomez, Johana Stefani. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Parada, Romina Belén. Universidad Nacional de la Patagonia "San Juan Bosco"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Vallejo, Marisol. Universidad Nacional de la Patagonia "San Juan Bosco"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Marguet, Emilio Rogelio. Universidad Nacional de la Patagonia "San Juan Bosco"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bellomio, Augusto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet Noa Sur. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Grupo de Investigación y Desarrollo del Noroeste Argentino | Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Grupo de Investigación y Desarrollo del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Perotti, Nora Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Gianni de Carvalho, Katia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; Argentin