Design, construction, sequence analysis and bioinformatics study of RTB-ipaD gene cassette: A new way in generation of Shigellosis vaccine

زمینه و هدف: شیگلا شایع ترین عامل اسهال می‌باشد. آنتی‌ژن پلاسمیدی IpaD برای تهاجم باکتری به درون سلول میزبان ضروری می‌باشد. یکی از چالش‌ها در باره واکسن مخاطی علیه شیگلا بر پایه پروتئین IpaD قدرت پایین آن می‌باشد. به نظر می‌رسد که با متصل کردن IpaD به یک ناقل و ادجوانت مناسب همچون زیر واحد B سم ریسین، می‌توان پروتئین IpaD را بسیار ایمنوژنیک نمود. این مطالعه به منظور تولید وکتور بیانی نوترکیب دارای کاست ژنی RTB-ipaD، آنالیز تعیین توالی و بررسی بیوانفورماتیکی آن انجام گرفته است. روش بررسی: در این مطالعه ژن های RTB و (163-483) ipaD در وکتور pGEM-T همسانه‌سازی شدند. ژن ipaD به روش برش آنزیمی با ژن RTB به همراه لینکر کد کننده GPGP در وکتور pGEM متصل شد. سپس قطعه کایمریک RTB-ipaD در وکتور بیانی pET28a(+) زیر همسانه‌سازی گردید. در پایان آنالیز تعیین توالی و بررسی بیوانفورماتیکی کاست ژنی انجام گرفت. یافته‌ها: صحت ساخت کاست ژنی RTB-ipaD در وکتور بیانی pET28a(+) با واکنش PCR و هضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت. نتایج حاصل از تعیین توالی کاست ژنی مطابق با توالی ذخیره شده در بانک ژنی بود. مطالعات بیوانفورماتیکی بر مبنای شاخص سازگاری کدون نشان داد این کاست قابلیت بیان در گیاه ترانس ژن و برخی سویه های باکتری اشرشیاکلی را دارد. نتیجه‌گیری: اتصال RTB به عنوان ناقل و ادجوانت به آنتی‌ژن IpaD رویکردی نوین و مطلوب در جهت تولید واکسن مخاطی شیگلوزیس می‌باش