The Drosophila functional Smad suppressing element fuss, a homologue of the human Skor genes, retains pro-oncogenic properties of the Ski/Sno family

Over the years Ski and Sno have been found to be involved in cancer progression e.g. in oesophageal squamous cell carcinoma, melanoma, oestrogen receptor-positive breast carcinoma, colorectal carcinoma, and leukaemia. Often, their prooncogenic features have been linked to their ability of inhibiting the anti-proliferative action of TGF-ß signalling. Recently, not only pro-oncogenic but also anti-oncogenic functions of Ski/Sno proteins have been revealed. Besides Ski and Sno, which are ubiquitously expressed other members of Ski/Sno proteins exist which show highly specific neuronal expression, the SKI Family Transcriptional Corepressors (Skor). Among others Skor1 and Skor2 are involved in the development of Purkinje neurons and a mutation of Skor1 has been found to be associated with restless legs syndrome. But neither Skor1 nor Skor2 have been reported to be involved in cancer progression. Using overexpression studies in the Drosophila eye imaginal disc, we analysed if the Drosophila Skor homologue Fuss has retained the potential to inhibit differentiation and induce increased proliferation. Fuss expressed in cells posterior to the morphogenetic furrow, impairs photoreceptor axon pathfinding and inhibits differentiation of accessory cells. However, if its expression is induced prior to eye differentiation, Fuss might inhibit the differentiating function of Dpp signalling and might maintain proliferative action of Wg signalling, which is reminiscent of the Ski/Sno protein function in cancer

Deregulation of plasm-kinin generating system by aspartyl proteinases produced by Candida spp. through the activation/deactivation of the zymogens of the system

Drożdżopodobne grzyby z rodzaju Candida należą do oportunistycznych patogenów, które naturalnie występują w mikroflorze człowieka. Podczas zachowanej homeostazy nie zagrażają one swojemu gospodarzowi, ale jej zachwianie może spowodować przemianę z komensala w groźny patogen. Na drodze ewolucji drożdżaki te wykształciły szereg cech determinujących ich zjadliwość. Jednym z nich jest wydzielanie enzymów proteolitycznych, które oddziałując z kininogenem wielkocząsteczkowym zdolne są do produkcji pochodnych kininy odpowiedzialnych za powstawanie stanu zapalnego, którego pojawienie może sprzyjać rozsiewowi patogenu.Celem niniejszej pracy było zbadanie zdolności deregulacji osoczowego układu generacji kinin przez proteinazy aspartylowe produkowane przez drożdżopodobne grzyby z rodzaju Candida albicans oraz Candida parapsilosis na drodze aktywacji bądź dezaktywacji zymogenów tego układu.Udowodniono, iż poszczególne proteazy aspartylowe gatunków C. albicans i C. parapsilosis wykazują różnice w działaniu na prekalikreinę osoczową. Wszystkie z nich ingerują w strukturę zymogenu, jednak tylko SAP3 zdolna jest do jej aktywacji, tak, iż może produkować bradykininę z syntetycznego peptydu o sekwencji domeny czwartej kininogenu wielkocząsteczkowego. SAPP2 produkowany przez C. parapsilosis, wykazała zdolność do modyfikowania prekalikreiny tak, iż może częściowo ingerować w strukturę domeny 4, hydrolizując wiązania pomiędzy resztami argininy i seryny. Oddziaływaniez SAPP1, SAP2 oraz SAP9 prowadziło do degradacji prekalikreiny. Ich działanie zależy od pH i w przypadku SAPP1 pozwala na zaobserwowanie przejściowej aktywacji, a następnie inaktywacji kalikreiny osoczowej.Nie potwierdzono zdolności żadnej z badanych proteaz aspartylowych do aktywacji czynnika XII, zaobserwowano jednak zachowanie zdolności do autoaktywacji zymogenu nawet w ich obecności.Yeast-like fungi of the genus Candida are opportunistic pathogens that occur naturally in the human microflora. During maintained homeostasis they are not a treat to its host, but the imbalance of the natural microflora or the wealness of the immune system can convert them in a dangerous pathogen. These yeasts have developed a number of characteristics that determine their virulence. One of them is the secretion of proteolytic enzymes that, for instance, interact with a macromolecular kininogen to produce kinin derivatives responsible for inflammation, the appearance of which can promote spreading of the pathogen with the host organism.The aim of this study was to investigate the ability of the deregulation of the plasma kinin-generating system by aspartyl proteinases produced by Candida albicans and Candida parapsilosis through the activation or deactivation of the zymogens of the system.It was proven that the different aspartyl proteases of C. albicans and C. parapsilosis presented significant differences in their action on the plasma prekallikrein. All of these interfered with the structure of the zymogen, but only SAP3 was capable of activation, so that this modified protein was capable of bradykinin production from a synthetic peptide with the sequence matching that of the fourth kinin-contein domain of human kininogen. SAPP2 of C. parapsilosis presented its ability to modify prekallikrein, that was capable of partial interference with the domain structure 4, which consisted in hydrolyzing the bond between the arginine and serine residues. SAPP1, SAP2 and SAP9 led to the degradation of prekallikrein. Their effects depended on the pH and in the case of SAPP1 allowed to observe transient activation and inactivation of plasma kallikrein.No ability of aspartyl proteases to activate FXII was observed; however, the capacity of the zymogen to auto-activation was maintained, even in their presence

Biochemical analysis of preantral follicles subjected to the IVFG procedure with use of selected 3D organ culture models

Pęcherzyki jajnikowe powstają i dojrzewają w korze jajnika. Proces ten, zwany folikulogenezą, rozpoczyna się już w życiu płodowym, a jego prawidłowy przebieg jest kluczowy dla dojrzewania oocytu i osiągnięcia przez niego zdolności do zapłodnienia. Wzajemna regulacja wzrostu oocytu i otaczających go komórek ziarnistych jest konieczna dla rozwoju całego pęcherzyka. Wcześniejsze badania wykazały, że hodowle dwuwymiarowe in vitro, nie są wystarczające dla prawidłowego dojrzewania pęcherzyka. Na jego prawidłowy rozwój, dzięki utrzymaniu struktury przestrzennej, pozwalają narządowe hodowle trójwymiarowe. Na przebieg folikulogenezy ma wpływ wiele czynników, zarówno endogennych, takich jak hormony i czynniki wzrostu, jak i egzogennych, np. niektóre leki czy środowiskowe związki hormonalnie czynne EDCs (ang. endocrine disrupting chemicals). Materiał badawczy stanowiły pęcherzyki przedantralne niedojrzałych świń rzeźnych, hodowane przez 10 dni w kapsułach alginianowych oraz mikrobioreaktorach “liquid marbles” utworzonych z mikrocząsteczek PTFE. Pęcherzyki podzielono na grupy, aby zbadać wpływ androgenów endogennych: testosteronu (T, 1×10-7M/ml), steroidów anabolicznych: nandrolonu (N, 3×10-5M/ml) oraz antyandrogenów środowiskowych: winklozoliny (Vnz, 1,4×10-5M/ml). Wykonano przyżyciową analizę morfologiczną pęcherzyków w 2, 4 i 8 dniu hodowli, analizę żywotności (Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit) oraz analizę biochemiczną wybranych markerów wczesnych etapów folikulogenezy: FSHR, GDF-9 i AR (Western blot). Doświadczenie wykazało, że bardziej optymalną metodą hodowli pęcherzyków przedantralnych świni są mikrobioreaktory “liquid marbles”. Pozwoliły one na uzyskanie pęcherzyków o wysokiej żywotności. Zastosowany testosteron nie wpłynął znacząco na poziom wybranych białek markerowych. Nandrolon obniżył żywotność pęcherzyków i jakość oocytów. Winklozolina wykazała silne działanie apoptotyczne, drastycznie obniżając żywotność pęcherzyków.Ovarian follicles form and develop in the ovarian cortex. This process, called folliculogenesis, begins in utero, and is crucial for the oocyte maturation and its ability to be fertilized. Mutual oocyte – granular cells regulation of growth is necessary for the development of the entire follicle. Previous studies have shown that two-dimensional in vitro cultures are insufficient for the follicle maturation. Due to the ability to maintain follicle structure, properly developed follicles can be cultured within three-dimensional organ cultures. The folliculogenesis process can be modified by many factors: endogenous – such as hormones and growth factors, and exogenous – some drugs or endocrine disrupting chemicals (EDCs). Preantral follicles were isolated from immature porcine ovarian cortex and cultured for 10 days inside alginate capsule or „liquid marbles” microbioreactors of PTFE. Follicles were divided into three groups to test the influence of endogenous androgens – testosterone (T, 1×10-7M/ml), anabolic steroids: nandrolone (N, 3×10-5M/ml) and environmental antiandrogens: vinclozolin (Vnz, 1,4×10-5M/ml). The morphological analysis on 2, 4 and 8 day of culture, Live/Dead Viability/Cytotoxicity test and biochemical analysis (Western blot) of early foliculogenesis markers (FSHR, GDF-9, AR) has been made. The experiment has shown that „liquid marbles” microbioreactors are more optimal culture method for pig preantral follicles growth and development. Within prenatral follicles, after 10 days of culture in this 3D system, forming antrum was observed. The testosterone had no significant effect on selected marker proteins of foliculogenesis. The nandrolone reduced viability of the follicles and oocyte quality. Vinclozolin have shown a strong apoptotic effect, it drastically reduced follicle viability

Bombina mtDNA mass sequencing project

Współczesne nauki biologiczne opierają się w dużej mierze na sekwencjonowaniu materiału genetycznego. Metody sekwencjonowania opracowane w 1977 r. pozwoliły na poznanie pierwszych sekwencji. W kolejnych latach pojawiły się łatwo dostępne i stosunkowo tanie metody sekwencjonowania nowej generacji (NGS).Spośród całego materiału genetycznego na szczególną uwagę zasługuje mitochondrialny DNA. Jego zalety to niewielkie rozmiary, duża liczba kopii w jednej komórce oraz wysoki polimorfizm wewnątrzgatunkowy. Przekazywanie mtDNA głównie w linii matczynej ułatwia (na podstawie różnic w jego sekwencji) tworzenie drzew filogenetycznych. Duża zmienność sekwencji mtDNA obrazuje różnorodność gatunków, gdyż można się nim posłużyć jako markerem do ich identyfikacji.Contemporary biological science in large part uses knowledge gained from sequencing of the genetic material. Sequencing methods developed in 1977 have been supplemented in recent years with so called the Next Generation Sequencing that offer easy access to genes and genomes. Of all genetic material mitochondrial DNA is of special interest due to its small size, large number of copies inside one cell and high intraspecies polymorphism. Inheritance of mtDNA in the maternal line facilitates creating phylogenetic trees, based on sequence divergence. Large mtDNA sequence variation helps also to uncover species diversity, as mtDNA segments may be used as markers across morphologically dissimilar life stages in species identification

Synthesis and conformational analysis of benzoxazocinone

Głównym celem tej pracy była synteza i analiza konformacyjnych ośmioczłonowych benzannulowanych laktamów zawierających atom tlenu.Część literaturowa zawiera opis i wpływ na organizmy żywe połączeń zawierających w strukturze ośmioczłonowy pierścień heterocykliczny oraz metody otrzymywania takich układów.Wbadaniach własnych opisano wyniki i analizę pracy laboratoryjnej. Syntezę przeprowadzono poddając reakcji Schmidta odpowiednie ketony siedmioczłonowe. Otrzymano łącznie cztery izomery, z którego jeden został poddany reakcji N-metylowania.Analizę konformacyjną otrzymanych pięciu laktamów przeprowadzono w oparciu o modelowanie molekularne i badanie dynamicznego magnetycznego rezonansu jądrowego (DNMR). Modelowanie molekularne przeprowadzone zostało poprzez zlokalizowanie minimów energetycznych na powierzchni energii potencjalnej molekuły z zastosowaniem metody mechaniki molekularnej w polu siłowym MM+ (program HyperChem). Dalszą optymalizację konformacji prowadzono metodą DFT/ B3LYP (program Gaussian09). Obliczono stałe ekranowania i stałe sprzężenia spin-spin metodą GIAO/DFT w modelu solwatacyjnym uwzględniającym wpływ rozpuszczalnika. Porównanie danych eksperymentalnych z uzyskanymi z obliczeń pozwoliło na ustalenie dominujących konformacji przyjmowanych przez molekuły badanych związków w roztworze. Na podstawie analizy zmiany kształtu linii w widmach DNMR określono procesy konformacyjne, w które zaangażowane są cząsteczki badanych związków.The main objective of this work was the synthesis and conformational analysis of eight-membered benzannulated lactams, containing oxygen atomThe literature part contains description and impact of known heterocyclic eight-membered compounds on living organisms and selected synthesis methods.The own research part describes the results and analysis of laboratory work. Lactams were synthesized from corresponding seven-membered ketones by Schmidt reaction. There were four obtained isomers, one of which was undergone N-metylation reaction. Conformational analysis of five received lactams was based on molecular modeling and dynamic nuclear magnetic resonance (DNMR). Molecular modeling has been achieved by localizing energetic minimum on potential energy surface by molecular mechanics methods using MM+ force field as implemented in HyperChem program. Further optimization was carried out by DFT/B3LYP method (program Gaussian09). Shielding constants and spin-spin coupling constants were calculated by GIAO/DFT method, in solvation model, which includes the effect of the solvent. Comparing experimental and calculated data allowed to determine the dominant conformation of investigated compounds. Based on analysis of changes of line shapes in DNMR spectra the conformational process of studied compounds has been defined