Η επίδραση ενός προγράμματος άσκησης παράλληλα με θεραπεία ενζυμικής υποκατάστασης σε ασθενείς με νόσο Pompe

Η ασθένεια Pompe είναι μια σπάνια αυτοσωμική διαταραχή η οποία χαρακτηρίζεται από την έλλειψη της όξινης α-γλυκοσιδάσης, που έχει σαν αποτέλεσμα τη συσσώρευση γλυκογόνου στα λισοσωμάτια. Η όψιμη μορφή της ασθένειας χαρακτηρίζεται από προοδευτική δυσλειτουργία των σκελετικών και αναπνευστικών μυών. Σε συνδυασμό με την πρόσφατα προταθείσα θεραπεία ενζυμικής υποκατάστασης, έχουν προταθεί θεραπείες όπως η δίαιτα πλούσια σε πρωτεΐνες και η άσκηση, παρόλο που λίγα είναι γνωστά για την αποτελεσματικότητα στη φυσική κατάσταση των ασθενών. Ο σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν να διερευνήσει την επίδραση της άσκησης στη μυϊκή δύναμη και τη σύσταση του σώματος σε πέντε (5) ασθενείς με Pompe όψιμης έναρξης, οι οποίοι συμμετείχαν σε θεραπεία ενζυμικής υποκατάστασης. Όλοι οι ασθενείς ακολούθησαν ένα πρόγραμμα 20 εβδομάδων αεροβικής άσκησης και ασκήσεων με αντιστάσεις, υπό την επίβλεψη ειδικού. Πριν και μετά την προπονητική περίοδο η σύσταση του σώματος μετρήθηκε με τη μέθοδος απορροφησιομετρίας διπλοενεργειακής δέσμης ακτινών X ενώ η ισομετρική μυϊκή δύναμη μετρήθηκε με ένα ειδικό δυναμόμετρο. Η λειτουργική ικανότητα μετρήθηκε με τη δοκιμασία 6 λεπτών περπάτημα. Μετά την προπονητική περίοδο παρατηρήθηκε μία στατιστικώς σημαντική αύξηση στη μυϊκή δύναμη (15-50% στα διάφορα μέρη του σώματος, ρ < 0.05) και στην απόσταση που περπάτησαν στα 6 λεπτά (203.8±177 m πριν vs. 248.2±184 m μετά, ρ< 0.01), ενώ η συνολική μάζα σώματος και η μάζα των κάτω άκρων δεν άλλαξε σημαντικά. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η άσκηση έχει ένα θετικό αποτέλεσμα στη μυϊκή δύναμη και τη λειτουργική ικανότητα σε ασθενείς με Pompe όψιμης έναρξης που λαμβάνουν θεραπεία ενζυμικής αποκατάστασης

Frequence of specific <i>KRAS</i> and <i>BRAF</i> mutations cases analyzed by SSEQ and ASLNAqPCR.

<p>SSEQ, Sanger sequencing; ASLNA, allele specific quantitative PCR using 3′-locked nucleic acid modified primers (ASLNAqPCR); NT, not tested, since ASLNAqPCR primers were designed to identify only the seven most common codon 12−13 <i>KRAS</i> mutations.</p

Primers and beacon probes.

<p>bp, base pair. “+” precedes LNA-modified nucleotides.</p

Statistical measures of performance for Sanger sequencing and ASLNAqPCR.

<p>SSEQ, Sanger sequencing; ASLNA, allele specific quantitative PCR using 3′-locked nucleic acid modified primers (ASLNAqPCR); PPV, positive predictive value; NPV, negative predictive value; ACC, accuracy; FDR, false discovery rate.</p

<i>BRAF</i> Pyrosequencing analysis of cases with discordant results between ASLNAqPCR and Sanger sequencing.

<p>SSEQ, Sanger sequencing; ASLNA, allele specific quantitative PCR using 3′-locked nucleic acid modified primers (ASLNAqPCR); WT, wild type; NP, not performed due to lack of additional DNA; CRC, colonic adenocarcinoma; met, metastatic; LN, lymph node; PTC papillary thyroid carcinoma. ^aASLNAqPCR primers designed to identify only the <i>BRAF</i> V600E mutation. ^bReal time ASLNAqPCR quantitative data. ^cPercentage of the tumor/non neoplastic cells ratio estimated in the area dissected for DNA extraction.</p

<i>KRAS</i> mutations in primary colon carcinoma (n = 163) compared with data reported in the literature

<p>ASLNA, allele specific quantitative PCR using 3′-locked nucleic acid modified primers (ASLNAqPCR); NT, not tested, since ASLNAqPCR primers were designed to identify only the seven most common codon 12–13 <i>KRAS</i> mutations. ^a References [Bamford et al., 2004; Karapetis et al., 2008; Neumann et al., 2009].</p

ASLNAqPCR and corresponding Sanger sequencing of four representative tumor samples analyzed for <i>KRAS</i> mutations.

<p>Sample A is wild type, samples B, C and D are <i>KRAS G12D</i> mutated with varying amounts of tumor vs. non neoplastic cells; assuming that <i>KRAS G12D</i> is heterozygous, quantitation of mutated DNA by ASLNAqPCR (ΔCT method) is consistent with 70% of mutated cells in sample B, 40% of mutated cells in sample C, 4% of mutated cells in sample D; in sample D the <i>KRAS G12D</i> mutation is detected only by the ASLNAQPCR due to its high analytical sensitivity.</p

Standard curve titration of ASLNAqPCR for <i>BRAF.</i>

<p>Serial dilution of the <i>BRAF V600E</i> mutated OCUT cell line DNA in wild type DNA. Gray squares correspond to 50%, 20%, 10%, 5%, 1%, 0,1%, 0.01% mutant to wild type DNA ratios (duplicate samples). The titration slope is −2.985, R² is 0.991 (top right), corresponding to a PCR efficiency of 116.2%.</p

Schematic illustrating mutations detected by Sanger and Next Generation sequencing versus the proportion of neoplastic cells in the sample.

<p>NGS, Next Generation Sequencing; Mut cases, cases with any mutation; Del Ex19, deletion in exon 19; Other muts, mutations other than exon 19 deletion or L858R.</p

Results of sequencing analysis of <i>EGFR</i> gene after Sanger (A-C-E) and Next Generation (B-D-F) sequencing.

<div><p>A-B) an exon 19 deletion detected by both Sanger (A) and NGS (B); the percentage of mutated alleles identified by NGS was >20%. C-D) the L858R detected by both Sanger (C) and NGS (D); the percentage of mutated alleles identified by NGS was >20%. E-F) an exon 19 deletion detected by NGS (F) but not by the Sanger method (E); the percentage of mutated alleles identified by NGS was <20%.</p> <p>Blue arrows in A and in C indicate the starting nucleotide of deletion and the mutated nucleotide, respectively; black arrows in F indicate homopolymer stretches (e.g. four adenines).</p></div