Identificação de um polimorfismo de única base no gene rap-1 de Babesia bovis.

Babesia bovis provoca um grave quadro de anemia hemolítica em bovinos, resultando em grandes prejuízos devido à mortalidade, abortos, redução de fertilidade e queda da produção de carne e leite. O gene RAP-1 (Rhoptry-associated protein)1 de Babesia bovis codifica uma proteína de 60 KDa, que é reconhecida por anticorpos e linfócitos T de bovinos. O objetivo deste trabalho foi verificar a presença de polimorfismos no gene RAP-1 de Babesia bovis amplificado de material proveniente de búfalos infectados. Parte do gene RAP-1 de B. bovis foi amplificado por Nested-PCR. Foram sequenciadas amostras de quatro búfalos e de um bovino para que se pudesse comparar as sequências obtidas nestas espécies. As reações de seqüenciamento foram realizadas utilizando o Kit ABI PRISM® Big Dye terminator v. 3.1 cycle sequencing da Applied Biosystem. Os eletroferogramas gerados pelo seqüenciador ABI 3100 foram submetidos à análise de qualidade pelo programa Phred, que atribui um valor de qualidade a cada nucleotídeo identificado. Em seguida, foram submetidos ao programa de montagem Phrap que agrupa as sequências organizando-as em contigs. A visualização das sequências geradas e, conseqüentemente, dos SNPs foi realizada através do programa Consed. Não foi encontrada diferença entre a sequência de B. bovis isolada de bovino e as dos isolados de búfalos, no entanto, em relação à sequência depositada no banco de dados NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), foi encontrado um polimorfismo de única base (SNP) G/A no nucleotídeo 688. Verificou-se que este polimorfismo também estava presente na amostra obtida de bovino, pois o segmento do gene RAP-1 do isolado de bovino apresentou genótipo heterozigoto AG . Três isolados de búfalos também apresentaram o genótipo AG para este polimorfismo. O SNP identificado neste trabalho não está depositado no NCBI

Caracterização da atividade proteolítica dos produtos de excreção/secreção dos estágios larvares de cochliomyia hominivorax.

Larvas da mosca Cochliomyia hominivorax causam graves miíases em bovinos criados nas Américas Central e do Sul.As fêmeas colocam seus ovos nos bordos de ferimentos recentes, na pele dos animais, e as larvas se estabelecem graças à secreção/excreção de enzimas proteolíticas. Larvas de C. hominivoraxforam criadas no laboratório de sanidade animal da Embrapa Pecuária Sudeste. Após serem lavadassucessivamente em solução salina, solução salina adicionada de VancomicinaR e água destilada estéril, grupos de 50 larvas foram colocados em placas de Petri contendo 5mL de meio RPMI. Após incubação por 12 horas (L 1 e L2) ou 24 horas (L3) a 370 C, as larvas foram descartadas e o meio centrifugado. Osobrenadante obtido foi distribuído em alíquotas de 100 L e armazenado a -80°C. A atividade proteolítica foi investigada aplicando-se as amostras desses produtos nativos em gel de poliacrilamida napresença de dodecil sulfato de sódio em sistema de gradiente 5-12,5%, copolimerizado com gelatina ou com colágeno a 0,2%. A natureza da proteólise foi avaliada nos mesmos géis, nos quais as amostras foram aplicadas após incubação prévia com cada um dos seguintes inibidores de proteases: PMSF, TLCK, TPCK, E-64, DCI, Elastatinal e EDTA. A análise da atividade proteolítica dos extratos sobre colágeno e gelatina revelou a presença de perfis caracterizados por amplas áreas de hidrólise, na faixa que se estende desde a região de massa molecular aparente> 170 kDa até 29 kDa; por uma zona de hidrólise intensa na região de 170 a 102 kDa e várias bandas com massas aparentes entre 45 e 74 kDa. A inibição da atividade proteolítica dos extratos de L 1 foi obtida principalmente pela incubação com PMSF e DCI; de L2, com DCI eL3, com PMSF. Esse tipo de inibição sugere a predominância de enzimas do grupo das serina proteases. roteases.Agradeciment

SASM-Agri - Sistema para análise e separação de médias em experimentos agrícolas pelos métodos Scott - Knott, Tukey e Duncan.

Os testes estatísticos comumente utilizados para separação de médias em experimentos agrícolas apresentam resultados ambíguos e de difícil interpretação. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um software para analisar e separar médias pelo método de Scott-Knott, além dos métodos de Tukey e Duncan. O SASM-Agri foi desenvolvido utilizando-se o ambiente Borland Delphi, compatível com Windows 98 ou superior, o que permite importar dados de planilhas e exportar resultados para outros aplicativos. Os dados também podem ser transformados antes da análise. A validação foi realizada comparando-se os resultados gerados pelo software com resultados calculados manualmente. O sistema usou funções recursivas que agilizaram e aumentaram a precisão da apresentação dos resultados. Quando comparados aos outros métodos de separação de médias, o método de Scott-Knott facilitou a interpretação dos resultados. Os dados foram classificados em grupos diferentes e não houve sobreposição entre estes grupos. A sobreposição é característica de outros testes como Tukey e Duncan. O sistema desenvolvido torna possível usar o teste de scott-knott na análise de experimentos com vários tratamentos. O software está sendo utilizado para separar grupos de genótipos de cana-de-açúcar em relação à resistência às doenças. Uma versão gratuita de uso limitado do software está sendo distribuída mediante solicitação aos autores ou no site www.infoagro.uepg.br/~ralthaus/sasm/avaliacao/sasm-agri.exe