DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE MÉTODO ANALÍTICO POR CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA PARA QUANTIFICAÇÃO DE ALENDRONATO DE SÓDIO EM LIPOSSOMAS MUCOADESIVOS

Introdução e objetivos: O alendronato de sódio é um fármaco da classe dos bifosfonados amplamente utilizado para prevenção e/ou tratamento da osteoporose1,2. A utilização de lipossomas mucoadesivos para veiculação desse fármaco através da via intranasal é uma estratégia promissora para contornar problemas relacionados à sua baixa biodisponibilidade oral e seus diversos efeitos colateriais2. Logo, o desenvolvimento e a validação de uma metodologia analítica capaz de quantificar o fármaco se fazem necessários para o desenvolvimento e estudo desse sistema nanoestruturado proposto. Metodologia: As análises foram realizadas em cromatógrafo VARIAN, equipado com detector de UV-Visível modelo PS325. A detecção ocorreu a um comprimento de onda de 266 nm. Foi utilizada coluna de fase reversa Zorbax extend-C18 (150x4,6mm) 5 μm – Agilent, mantida à temperatura de 35ºC. Eluição realizada por gradiente, utilizando, na primeira etapa, uma proporção de 75:20:5 (v/v%) e, na segunda, 65:30:5 (v/v%), sendo a fase móvel constituída por tampão pH 8 (citrato de sódio 0,05M e fosfato de sódio 0,05M):acetonitrila:metanol; fluxo de 1 mL/min e volume de injeção de 20μL. O método desenvolvido foi validado em relação à linearidade, precisão, exatidão e limite de quantificação. Resultados e discussão: A faixa de linearidade do método foi de 0,5 a 100 μg/mL (r = 0,9995) e o limite de quantificação de 2,5 μg/mL. A precisão apresentou DPR <5,0% e exatidão entre 95,0 – 105,0%, seguindo as especificações estabelecidas pela RDC 899/2003 da ANVISA. Conclusões: O método desenvolvido se mostrou linear, exato, preciso e capaz de quantificar o fármaco, podendo ser utilizado como ferramenta para o desenvolvimento de formulações contendo alendronato de sódio. Agradecimentos: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, Fundação de Apoio à Pesquisa

Characterization of 4-nerolidylcatechol encapsulated in liposomes: influence on phospholipid dynamics, drug stability and bioactivity

Submitted by Luanna Matias ([email protected]) on 2015-03-24T14:12:03Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marilisa Pedroso Nogueira Gaeti - 2011.pdf: 1666080 bytes, checksum: 19b32c55290366843f42da074251d027 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5)Approved for entry into archive by Luanna Matias ([email protected]) on 2015-03-24T14:50:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marilisa Pedroso Nogueira Gaeti - 2011.pdf: 1666080 bytes, checksum: 19b32c55290366843f42da074251d027 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5)Made available in DSpace on 2015-03-24T14:50:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marilisa Pedroso Nogueira Gaeti - 2011.pdf: 1666080 bytes, checksum: 19b32c55290366843f42da074251d027 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-11-03Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESLiposomes containing 4-nerolidylcatechol (4-NC), the main metabolite isolated from Pothomorphe umbellata, were obtained and characterized. The influence of liposomal encapsulation on the chemical stability of 4-NC and on the cytotoxicity profile of this drug was evaluated. Liposomal dispersion was prepared by lipid film hydration followed by extrusion through polycarbonate membranes. Entrapment efficiency for 4-NC was approximately 92%. Liposome mean diameter was 100 nm with a polydispersity index below 0.13. 4-NC encapsulated in liposomes (L4-NC) and in methanolic solution (F4-NC) were submitted to forced degradation tests (photostability and acid/base hydrolysis), monitored by HPLC. Photodegradation assay was performed according to ICH Guidelines, using a photostability chamber equipped with both UV and white light sources. Results demonstrated that liposomal encapsulation was able to markedly reduce 4-NC degradation rates for all the forced degradation conditions tested. L4-NC showed a half-live approximately 15% higher than F4-NC under light exposure. After 72 hours, acid and base hydrolysis of F4-NC lead to 13 and 16% of degradation, respectively. However, no degradation was observed in L4-NC. EPR spectra of the liposomal membrane showed that greatest changes in membrane properties were obtained when 5-doxyl stearic acid was used as the spin label, showing a marked decrease in the fluidity of the bilayer and indicating that 4-NC was located near the polar head groups of the phospholipid bilayer. F4-NC induces hemolysis under isotonic conditions whereas liposomal encapsulation protects erythrocytes from lysis. Following incubation with K562 cells, 4-NC showed a concentration-dependent cytotoxicity profile, while L4-NC exhibited a time and concentration-dependent profile, characterizing the liposomal formulation as a controlled release system.Lipossomas contendo 4-nerolidilcatecol (4-NC), principal metabólito isolado da Pothomorphe umbellata, foram preparados e caracterizados. A influência da encapsulação em lipossomas na estabilidade do 4-NC foi avaliada. A dispersão lipossomal foi preparada através do método de hidratação do filme lipídico seguido por extrusão em membrana de policarbonato. A eficiência de encapsulação foi de aproximadamente 92%. O diâmetro médio dos lipossomas obtidos foi de 100 nm, com índice de polidispersão em torno de 0,13. Amostras do 4-NC encapsulado em lipossomas (L4-NC) e em solução metanólica (F4-NC) foram submetidas a testes de degradação forçada (fotoestabilidade e hidrólise ácida/básica) e monitoradas por CLAE. Os resultados demonstraram que a encapsulação do 4-NC em lipossomas foi capaz de reduzir as taxas de degradação para todas as condições testas. O teste de fotoestabilidade foi realizado seguindo recomendações do ICH, em câmara de fotoestabilidade equipada com lâmpadas de UV e visível. L4-NC apresentou tempo de meia vida aproximadamente 15% maior quando comparado com a F4-NC. Após 72 horas, a hidrólise ácida e básica do F4-NC promove degradação de 13 e 16 % respectivamente. No entanto, não foi observada degradação em L4-NC para as mesmas condições de hidrólise testadas. Espectros de EPR dos lipossomas contendo 4-NC apresentaram mudanças nas propriedades da membrana quando marcados com o 5-doxil ácido esteárico (5-DSA), apresentando acentuada diminuição na fluidez da bicamada e indicando que o 4-NC está localizado próximo ao grupamento polar da bicamada lipídica. O 4-NC livre induz hemólise em condições isotônicas enquanto que a encapsulação em lipossomas protege os eritrócitos da lise. Após ensaio de citotoxicidade utilizando células K562, F4-NC apresentou perfil concentração dependente, enquanto que o L4-NC exibiu perfil concentração e tempo dependente, indicando que a formulação liposomal constitui um sistema de liberação controlada

DESENVOLVIMENTO DE PELLETS DE CETOPROFENO CONTENDO PECTINA EXTRAÍDA DE SOLANUM LYCOCARPUM ST. HILL

Introdução e objetivos: A pectina é um polímero natural utilizado na produção de formas farmacêuticas, tais como os pellets1,2. Pectina extraída dos frutos de Solanum lycocarpum (lobeira), apresenta grande potencial de utilização sustentável e aplicação tecnológica em razão de suas características particulares3. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi desenvolver pellets de cetoprofeno (fármaco modelo) contendo pectina comercial ou extraída de S. lycocarpum pela técnica de extrusão e esferonização e comparar suas características físicas. Metodologia: dispersões de pectina cítrica e de lobeira (5%, p/v) foram analisadas em viscosímetro rotacional. A massa molecular foi determinada pela técnica de espalhamento estático de luz. Os pellets foram compostos por celulose microcristalina, cetoprofeno e pectina, proporção de 40:40:20, respectivamente. A mistura de pós foi granulada com solução hidroetanólica de ácido cítrico 10% (p/v) contendo 5% (p/v) de povidona K-30. A massa úmida foi então extrusada e esferonizada. Os produtos obtidos foram analisados quanto ao seu tamanho e esfericidade. Resultados e discussões: A dispersão de pectina de lobeira apresentou viscosidade 200x menor e a massa molecular deste polímero foi cerca de 2,4x menor, quando comparada ao determinado para a pectina cítrica. Pellets com esfericidade e tamanho desejáveis foram obtidos quando a razão líquido umectante: massa sólida foi de 1:1 e 0,5:1, respectivamente, para a pectina cítrica e da lobeira. A menor quantidade de líquido nas formulações contendo pectina da lobeira sugere o menor grau de intumescimento da mistura de pós, o que favorece a obtenção de pellets com características físicas superiores. Conclusões: o uso de pectina de lobeira pode ser bastante vantajoso na produção de pellets visto a melhora nas propriedades da massa úmida frente ao observado para a pectina comercial. Agradecimentos: CNPq, Capes, FAPEG

DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇAO DE METODOLOGIA ANALÍTICA POR CLAE-UV PARA QUANTIFICAÇAO DA VITAMINA C

Introdução e objetivos: O ácido ascórbico (AA), também chamado de vitamina C, é bastante utilizado em formulações cosméticas de uso tópico devido sua potente atividade antioxidante e promoção da biossíntese de colágeno, desempenhando um importante papel no combate ao envelhecimento cutaneo1. A quantificação do AA nestas formulações cosméticas é importante durante etapas como o desenvolvimento e controle de qualidade. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um método analítico capaz de quantificar o AA. Metodologia: O AA foi quantificado por CLAE com detecção em 245 nm, usando como fase móvel hidrogenossulfato de tetrabutilamônio 2 mM e fluxo de 1,0 mL/min. Foi utilizada uma coluna C 18 (250 x 4,6 mm, 5 μm) a 25°C. Foram avaliados os parâmetros de linearidade, precisão, exatidão, seletividade e limite de quantificação, segundo o FDA (1996)2. Resultados e discussão: O método analítico proposto apresentou parâmetros de system suitability dentro do especificado (NTP USP > 2000; As. USP próximo a 1 e K’ >1), apresentando-se linear na faixa de concentração de 0,1 a 100 μg/mL com equação da reta y = 39,049x - 1,1753 e coeficiente de correlação maior que 0,99. O tempo de eluição da vitamina C foi de 3,2 minutos. Ainda, o método foi preciso e exato, com DPR e E% menores que 5%. Após análise dos componentes da formulação cosmética avaliada, pode-se verificar que o método foi seletivo, uma vez que nenhum componente da formulação foi capaz de interferir na quantificação do AA. O limite de quantificação do método foi de 100 ng/mL. Todos os parâmetros avaliados ficaram dentro do delimitado pela legislação consultada. Conclusão: Neste trabalho foi desenvolvido e validado um método analítico capaz de quantificar a vitamina C. Agradecimentos: CNPq, CAPES.Palavras-Chave: Vitamina C; método analítico; validação, ácido ascórbico

DESENVOLVIMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE DIFERENTES FORMULAÇÕES LIPOSSOMAIS CONTENDO VITAMINA C.

Introdução e objetivos: O ácido ascórbico (AA), também chamado de vitamina C, possui notória atividade antioxidante, desempenhando um importante papel no combate ao envelhecimento da pele¹. O AA é bastante instável sob diferentes condições, de modo que o desenvolvimento de formulações contendo o AA torna-se um desafio2,3. O objetivo deste trabalho foi desenvolver, caracterizar e avaliar diferentes formulações lipossomais contendo vitamina C para uso tópico. Metodologia: Os lipossomas foram formulados seguindo a técnica proposta por Senior & Gregoriadis (1989)4. Foram avaliados fatores como meio de reidratação utilizado e composição e proporção do material lipídico (fosfatidilcolina, colesterol e DOTAP). A concentração final de AA foi sempre de 5% (p/v). Os lipossomas foram caracterizados quanto ao tamanho, índice de polidispersão, pH, eficiência de encapsulação, rendimento de processo e estabilidade. Resultados e discussão: As formulações reidratas com água ácida e tampão ácido apresentaram tamanho e índice de polidispersão melhores quando comparados às formulações reidratadas com tampão fosfato-salino. Observou-se que o aumento de fosfatidilcolina (de 25 para 200mM) na formulação proporcionou uma maior eficiência de encapsulação. A utilização de colesterol na razão molar 1:4 de colesterol:fosfatidilcolina proporcionou eficiência de incorporação superior a 55%. Ainda, a adição de 25 mM de DOTAP (lipídeo catiônico), proporcionou eficiência de encapsulação de 65%, além de proporcionar potencial zeta superior a 30 mV. As formulações apresentaram-se estáveis por pelo menos 15 dias. Conclusão: Constatou-se que a formulação com maior quantidade de PC (200mM), 50mM de colesterol e 25mM de DOTAP foi a que apresentou melhor eficiência de encapsulação de vitamina C. Agradecimentos: CNPq, FUNAPE, CAPES

PREPARAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO E ESTABILIDADE DE NANOPARTÍCULAS POLIMÉRICAS CONTENDO ITRACONAZOL

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DESENVOLVIMENTO DE CARREADORES NANOESTRUTURADOS MULTICOMPATRIMENTAIS PARA TERAPIA ANTITUMORAL

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Estudo Estrutural de Microemulsões Contendo Testosterona por Espectroscopia de Infravermelho com Transformada de Fourier (FT-IR)

Introdução e Objetivos: Microemulsões são misturas estáveis, claras e isotrópicas de óleo, água, tensoativos e co-tensoativos. A compreensão desses sistemas exige uma caracterização refinada e abrangente, feita por uma combinação de técnicas complementares em conexão com modelos teóricos adequados deduzindo uma imagem estrutural, focando na observação de sua morfologia, de complexidade crescente devido à sua composição. A técnica de FT-IR tem sido utilizada pela sua alta sensibilidade para detectar interações entre moléculas de água em seu sítio e entre os tensoativos da interface. Esse trabalho tem por objetivo investigar, através desta técnica, o domínio em que a testosterona pode ser encontrada nas microemulsões propostas. Metodologia: Os espectros foram obtidos em espectrômetro 640-IR (VARIAN), utilizando a técnica de reflexão interna total ou reflectância total atenuada, em um intervalo de comprimento de onda de 4000 a 400 cm-1, com 16 scans. Resultados e discussão: O pico proveniente da leitura do grupamento O-H das microemulsões, que pode ser utilizado para medir a força das ligações de hidrogênio, ocorreu em frequências mais altas do que água pura, devido às interações entre a água, o tensoativo e o co-tensoativo. Essas interações são mais fracas que as que ocorrem na água pura. À medida que o teor de água nas microemulsões aumenta, o estiramento O-H é deslocado para frequências inferiores. A incorporação de testosterona teve efeito insignificante sobre a frequência de alongamento O-H, o que sugere seu posicionamento na parte oleosa da formulação, consistente com sua baixa solubilidade em água. Conclusão: O fármaco tem provável localização nos domínios hidrofóbicos, já que sua adição não influenciou a interface água-tensoativo. Também sugere a não alteração da microestrutura após a adição do fármaco. Agradecimentos: CNPq, FUNAPE, FAPEG e FINEP.Palavras-Chave: Microemulsão; Testosterona, FT-IR

FARMACOCINÉTICA DE PACLITAXEL E GENISTEÍNA COENCAPSULADOS EM UMA NANOPARTÍCULA MULTICOMPARTIMENTAL

Introdução e Objetivos: O Paclitaxel (PTX), é um potente fármaco antitumoral e aGenisteína (GEN), substância com propriedades anti-angiogênicas, ambos, co-encapsuladosnuma nanopartícula multicompartimental (NP), tornam-se uma potencial formulação paratratamento de tumores. Sendo assim, os principais parâmetros farmacocinéticos desses doisfármacos foram obtidos, após a administração da NP em camundongos swiss, através deum método de cromatografia líquida (LC) acoplada a espectrometria de massas (MS), quefoi desenvolvido e validado. Metodologia: Para investigar a farmacocinética do PTX e GENna NP, foi feita a administração intraperitoneal da NP nos camundongos, a uma dose de 10mg/kg de PTX e 12,5mg/kg de GEN coletando amostras de sangue em tempos prédeterminados,essas, foram preparadas por extração líquido-líquido e quantificadas por LCMSno intervalo de 5-2000ng/mL (PTX) e 10-5000 ng/mL (GEN). Resultados: Os principaisdados farmacocinéticos foram calculados para PTX e GEN: O Clearance foi de 434,35 e4686,71 (mL/hr/kg); T/2: 0,32 e 0,65 (1/h); Tmax: 8,00 e 0,17 (h); AUC(0-t): 21613,64 e2070,01 (hr*ng/mL); AUC(0-INF): 23023,12 e 2133,69 (hr*ng/mL); Cmax: 3120,09 e 2621,01(ng/mL); respectivamente. Conclusão: O método, devido à sua sensibilidade e seletividadeé capaz de quantificar PTX e GEN em matriz biológica para o estudo farmacocinético deuma formulação nanoestruturada

DESENVOLVIMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE DIAGRAMA DE FASES PSEUDO-TERNÁRIO PARA SISTEMAS TÓPICOS MICROEMULSIONADOS

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