Kartierung der von HLA-A*01, -A*02 und -A*24 vermittelten anti-adenoviralen zytotoxischen T-Zellantwort

Human adenovirus infections are a serious threat to immunocompromised individuals, especially stem cell transplantation patients, and a considerable cause of mortality. Although the T cell immune response seems to be essential for the control and clearance of the disease and correlates with a positive course of disease, few adenoviral CD8 T cell epitopes have been identified and their clinical relevance has remained largely unknown. This study was therefore aimed at applying the strategy of reverse immunology and mapping the cytotoxic T cell epitopes from adenovirus for three important HLA allotypes. The main focus was the identification of immunodominant epitopes that elicit T cell responses in most infected hosts of the appropriate HLA genotype. Therefore, the SYFPEITHI algorithm was applied to predict likely epitopes from the primary sequences of three proteins (hexon, pVIII, E1A) of two viral strains (Ad2, Ad5). Candidate epitopes were synthesized as peptides and the PBMCs of healthy donors examined for memory T cell responses specific to them. For this purpose specific T cells were amplified before testing in order to recognize weak responses difficult to detect ex vivo. The HLA restriction of the identified epitopes was verified by testing donors with and without the supposed allotype and by tetramer staining. Specific cell populations were further characterized phenotypically and functionally. For each of the three allotypes one immunodominant epitope could be identified, i.e. LTDLGQNLLY for HLA-A*01, LLDQLIEEV for HLA-A*02, and TYFSLNNKF for HLA-A*24. Furthermore, it became apparent that the T cell response mediated by HLA-A*02 is directed mainly against the protein E1A. The epitopes from E1A described here are the first to be described that are presented on MHC class I and not derived from the hexon protein. It could also be shown that no hierarchy amongst CD8+ T cell epitopes restricted by different HLA allotypes exists, but parallel, co-dominant responses are detectable. These results may prove to be useful in the effort to establish adoptive transfer strategies of adenovirus-specific T cells for the treatment of immunocompromised patients.Infektionen mit humanpathogenen Adenoviren stellen eine ernste Bedrohung für Menschen mit einem geschwächten Immunsystem dar, wie z.B. Patienten nach einer Stammzelltransplantation, und sind eine zahlenmäßig relevante Todesursache. Ob-wohl die T-Zell-Immunantwort für die Eindämmung und Beseitigung der Infektion offenbar essentiell ist und mit einem positiven Krankheitsverlauf korreliert, sind bisher nur wenige adenovirale CD8-T-Zell-Epitope identifiziert worden, und ihre klinische Relevanz ist größtenteils unbekannt. Deshalb sollte in dieser Arbeit nach dem Ansatz der reversen Immunologie eine Kartierung adenoviraler zytotoxischer T-Zell-Epitope für drei wichtige HLA-Allotypen erfolgen. Der Schwerpunkt lag hierbei insbesondere auf der Identifizierung immun-dominanter Epitope, die in den meisten Infizierten mit passendem HLA-Genotyp eine T-Zellantwort induzieren. Dazu wurden aus den Primärsequenzen dreier Proteine (Hexon, pVIII, E1A) aus zwei Virenstämmen (Ad2, Ad5) mit dem SYFPEITHI-Algorithmus wahrscheinliche Epitope vorhergesagt und als Peptide synthetisiert. PBMCs gesunder Spender wurden anschließend daraufhin untersucht, ob sie Gedächtniszellen enthielten, die gegen die Peptide spezifisch waren. Hierzu wurden spezifische T-Zellen im Vorfeld amplifiziert, um ex vivo schwer nachweisbare schwache Antworten erkennen zu können. Die HLA-Restriktion der identifizierten Epitope wurde über den Vergleich der Antworthäufigkeiten von Spendern mit und ohne den vermuteten Allotyp sowie Tetramerfärbungen überprüft. Adenovirusspezifische Zellpopulationen wurden alsdann phänotypisch und funktionell weiter charakterisiert. Für alle drei Allotypen konnte jeweils ein zytotoxisches T-Zell-Epitop als immundominant identifiziert werden, nämlich LTDLGQNLLY für HLA-A*01, LLDQLIEEV für HLA-A*02 und TYFSLNNKF für HLA-A*24. Des Weiteren wurde deutlich, dass die über HLA-A*02 vermittelte T-Zellantwort hauptsächlich gegen das Protein E1A gerichtet ist. Die hier beschriebenen Epitope aus E1A stellen somit die ersten auf MHC Klasse I präsentierten dar, die nicht aus dem Hexon-Protein stammen. Weiterhin konnte gezeigt werden, dass zwischen adenoviralen Epitopen mit unterschiedlicher HLA-Restriktion keine Hierarchie besteht, sondern parallele kodominante Antworten auftreten. Diese Ergebnisse könnten sich nützlich erweisen bei den Bemühungen, adoptive Transferstrategien für immungeschwächte Patienten zu entwickeln

Le domaine de Marly aujourd’hui

After a reminder of the historical evolution of the Domain of Marly — its creation, splendour, followed by its inevitable decline until the renewed interest of the twentieth century – the article clarifies the current context of this royal domain that became national land. The complexity of the legal, national and administrative situation explains the delay of Marly’s conservation, restoration and development compared to other major lands owned by the state, such as Versailles and Fontainebleau. New perspectives have opened through its attachment, since 2009, to the public institution of Versailles, with the sole ambition of development and opening Marly to the public.The implementation of a master plan for policy and management, expected for many years, will be an indispensible tool in the new policy of heritage development

Le domaine de Marly aujourd’hui

Après un rappel de l’évolution historique du domaine de Marly – sa création, sa splendeur, puis son déclin irrémédiable jusqu’au sursaut du début du xxe siècle –, l’article précise le contexte actuel de ce domaine royal devenu domaine national. La complexité de sa situation juridique, domaniale et administrative explique le retard pris à Marly pour sa sauvegarde, sa restauration et sa mise en valeur, par rapport aux autres grands domaines de l’État, comme Versailles ou Fontainebleau.De nouvelles perspectives s’ouvrent grâce au rattachement, depuis 2009, du domaine à l’établissement public de Versailles, avec comme seule ambition la valorisation et l’ouverture au public du domaine.La mise en œuvre d’un schéma directeur d’orientation et de gestion, attendue depuis tant d’années, sera l’outil indispensable de cette politique nouvelle de mise en valeur patrimoniale.After a reminder of the historical evolution of the Domain of Marly — its creation, splendour, followed by its inevitable decline until the renewed interest of the twentieth century – the article clarifies the current context of this royal domain that became national land. The complexity of the legal, national and administrative situation explains the delay of Marly’s conservation, restoration and development compared to other major lands owned by the state, such as Versailles and Fontainebleau. New perspectives have opened through its attachment, since 2009, to the public institution of Versailles, with the sole ambition of development and opening Marly to the public.The implementation of a master plan for policy and management, expected for many years, will be an indispensible tool in the new policy of heritage development

Haute-Vienne. Découverte de peintures murales dans l'église Saint-Eutrope des Salles-Lavauguyon

Mester de Parajd Gabor, Christen Marie-France de. Haute-Vienne. Découverte de peintures murales dans l'église Saint-Eutrope des Salles-Lavauguyon. In: Bulletin Monumental, tome 145, n°1, année 1987. pp. 109-113

Mass Spectrometry Reveals Changes in MHC I Antigen Presentation After Lentivector Expression of a Gene Regulation System

International audienceThe rapamycin-inducible gene regulation system was designed to minimize immune reactions in man and may thus be suited for gene therapy. We assessed whether this system indeed induces no immune responses. The protein components of the regulation system were produced in the human cell lines HEK 293T, D407, and HER 911 following lentiviral transfer of the corresponding genes. Stable cell lines were established, and the peptides presented by major histocompatibility complex class I (MHC I) molecules on transduced and wild-type (wt) cells were compared by differential mass spectrometry. In all cell lines examined, expression of the transgenes resulted in prominent changes in the repertoire of MHC I-presented self-peptides. No MHC I ligands originating from the transgenic proteins were detected. In vitro analysis of immunogenicity revealed that transduced D407 cells displayed slightly higher capacity than wt controls to promote proliferation of cytotoxic T cells. These results indicate that therapeutic manipulations within the genome of target cells may affect pathways involved in the processing of peptide antigens and their presentation by MHC I. This makes the genomic modifications visible to the immune system which may recognize these events and respond. Ultimately, the findings call attention to a possible immune risk