Determination of apoptosis and changes on cell cycle genes expressions in HL60 cell line induced with bendamustine

Amaç:Akut miyeloid lösemi (AML), hematopoetik öncül hücrelerin heterojen klonal bir hastalığıdır. Akut promiyelositer lösemi (APL), bir AML alt tipidir ve morfolojik olarak anormal promiyelositler ile karakterize edilir. APL’de görülen en belirgin kromozom düzensizliği ise 15. kromozomdaki promyelositik lösemi (PML) geni ile 17. kromozomdaki retinoik asit reseptör (RAR) alfa geninin translokasyonu sonucu bir füzyon proteini oluşturmasıdır. Bendamustin suda çözünebilen, beyaz, nitrojen hardal grubu ve bütirik asit yan zinciri bulundurması nedeniyle amfoterik özellik özellik gösteren mikrokristallin tozudur. Alkilleyici ajan olan bendamustin aynı zamanda pürin analoğu özelliği gösterir ve diğer alkilleyici ajanlara göre toksisite profili daha ılımlıdır. Bu çalışmada, bendamustinin APL hücre serisi olan HL60 hücreleri üzerindeki sitotoksik, sitostatik ve apoptotik etkileri incelenmiş ve hücre döngüsü, mitotik katastrof ve apoptoz ile ilişkili genlerinin ilaç ile muamele sonrasındaki ekspresyon değişimleri belirlenmiştir. Gereç ve yöntem: Çalışmamızda bendamustinin APL’ye model oluşturan HL60 hücreleri üzerindeki sitotoksik etkisini WST-1 testi ile, apoptotik etkisini Annexin V ve Apo Direct Tunnel methoduyla, sitostatik etkisini ise Cycletest Plus DNA Reagent Kit ile değerlendirilmiştir. Ayrıca bendamustinin HL60 hüce serilerindeki hücre döngüsü, mitotik katastrof ve apoptoz ile ilişkili genlerinin mRNA ekspresyonlarına etkisi kantitatif RT-PCR ile rölatif olarak belirlenmiştir. Bulgular: Bendamustinin sitotoksik etkisinin HL60 hücre serisi üzerinde yüksek dozlarda etkili olduğu belirlenmiştir. Bununla birlikte, apoptotik etkisinin her iki yöntem ile de doza bağımlı olarak anlamlı bir şekilde arttığı belirlenmiştir. Bendamustin ile 48 saat muamele sonrasında HL-60 hücrelerinde apoptoz ile ilişkili olduğu bilinen CASP3, CASP8, CASP9 ekspresyonlarını sırasıyla 2.4, 5.7, 6.8 kat arttırdığı saptanmıştır. Ayrıca mitotik katastrofi ile ilişkili olduğu bilinen Plk1 ekspresyonun 2.5 kat azaldığını ve tümör supresör olduğu bilinen Plk2 ekspresyonunda ise 17 katlık bir artma belirlenmiştir. Sonuç: Bulgularımız, bendamustinin apoptoz ve mitotik katastrof gibi hücre ölüm mekanizmaları üzerinde etkili olduğunu ve APL’ nin tamamlayıcı tedavisinde alternatif bir tedavi olarak kullanılabileceğini göstermektedir.Purpose:Acute myeloid leukemia (AML), is a heterogeneous clonal disorder of hematopoietic progenitor cells. Acute promyelocytic leukemia (APL), is a subtype of AML and characterized by aberrant morphology of promyelocytes. the most specific chromosomal disorder that occurs in APL patients is (15;17) translocation. This translocation the promyelocytic leukemia (PML) gene on chromosome 15 and the retinoic acid receptor (RAR) alpha gene on chromosome 17 fuse and produce a PML-RAR? fusion protein. Bendamustine is a water soluble, white, microcrystalline powder with amphoteric properties due to a nitrogen mustard group and a butyric acid side chain. Bendamustine acts as an alkylating agent and also has purine analog activity. Bendamustine has more moderate toxicity profile than the other alkylatingg agents. in our study, it is aimed to investigate cytotoxic, cytostatic and apoptotic effects of bendamustine on APL cell line HL60. Also we aime to evaluate the effect of bendamustine on HL60 cells according to the expression of genes including several signal transduction pathways such as; cell cycle, mitotic catastrophe and apoptosis, Materials and methods: Cytotoxic effect of bendamustine on HL60 cell line was assessed by WST-1 assay, apoptotic effect by Annexin V and Apodirect Tunnel assay and cytostatic effect by Cycletest Plus DNA Reagent Kit. Also the effect of bendamustine on expression levels of several cell cycle, mitotic catastrophe and apoptosis related genes in HL60 was determined by quantitative RT-PCR relatively. Results: We determined that bendamustine has cytotoxic effect on HL60 cell line with high-dose treatment. Also we found that Bendamustine significantly induces apoptosis in dose dependent manner and has no cytostatic effects on HL60 cells. After the 48 hours treatment with bendamustine, expression levels of apoptosis related CASP7, CASP8, CASP9 genes were upregulated 2.4, 5.7, 6.8 fold in HL60 cells, relatively. Also expressions of mitotic catastrophe related genes Plk1downregulated 2.5 fold and Plk2 which as known as tumor suppressor gene, upregulated 17 fold. Conclusion: Our data suggest that Bendamustine is effective on cell death mechanisms such as apoptosis ve mitotic catastrophe and can be used in supplement as a alternative treatment

Küçük Hücreli Dışı Akciğer Kanseri Hastalarında Onkogen Mutasyonlarının Araştırılması

Objective: Non-small-cell lung cancer (NSCLC) having a high incidence rate remains importance as cancer subtype with the highest mortality. Mostly, the manifestation of symptoms in advanced stages severely restrict treatment success. In the recent years, the suppression of onco-proteins occuring as a result of genetic alterations provide an important contribution to the success of treatment. Detection of molecular changes in the tumor has contributed person-specific treatments to come into prominence. Revealing the frequency and the correlations with the aim of increasing treatment success of these moleculer variations which can vary from society to society and person to person in each country are important. There are insufficient data related to (NSCLC) oncogene frequencies and the correlations in our country. Diagnosis and treatments have been arranged and assumed to be similar to the western societies. The forming of national data belonging to our country is likely to increase treatment success and clinician benefit in terms of diagnosis and treatment strategies. In the present study, it was aimed to determine frequencies of observed mutations inducing formation of oncogene in tumor paraffin blocks and correlations of (NSCLC) diagnosed cases. Material-Method: Genomic DNA isolation was performed using the paraffin block sections belonging to a total of 80 patients, whose diagnosis were NSCLC. Epidermal growth factor receptor (EGFR), kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog (KRAS), v- RAS neuroblastoma viral oncogene homolog (NRAS), v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog (BRAF), phosphatidyl inositol-3-kinase catalytic alpha polypterid (PIK3CA), human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) mutations were searched using Cobas z (Roche Diagnostic) RT-PCR devices and commercial mutation kits (Roche Diagnostics, Amoy Diagnostics). Findings: EFGR, KRAS, PIK3CA, BRAF and NRAS mutations were determned in 7, 23, 6, 1 and 1 of the cases, respectively. HER2 mutation was not detected in any case. PIK3CA mutation togetherness at the one case, having KRAS mutation, has been revealed. Results: Our results show that we have a profile similar to the mutation profile of the western societies apart from PIK3CA frequency in our country. PIK3CA mutation frequency was found to be 7,5%, which is greater than the 1-4% range shown in the literature Taking PIK3CA mutations in diagnosis and treatment into account more can contribute to the success of treatment.Amaç: Yüksek insidansa sahip olan Küçük Hücreli Dışı Akciğer Kanseri (KHDAK) en yüksek mortaliteye sahip kanser alt tipi olarak önemini korumaktadır. Çoğunlukla belirtilerin ileri evrelerde kendini göstermesi tedavi başarısını önemli ölçüde kısıtlamaktadır. Son yıllarda, tümör dokusunda meydana gelen genetik değişiklikler sonucu ortaya çıkan onko-proteinlerin baskılanabilmesi tedavi başarısına önemli katkı sağlamıştır. Tümördeki bu moleküler değişimlerin tespiti kişiye özgü tedavilerin ön plana çıkmasına katkı sağlamıştır. Toplumdan topluma ve kişiden kişiye farklılık gösterebilen bu moleküler değişimlerin tedavi başarısını artırmak amacıyla her ülkedeki sıklık ve korelasyonlarının ortaya konması önem arz etmektedir. Ülkemizde KHDAK onkogen sıklık ve korelasyonlarına dair yeterli veri bulunmamaktadır, tanı ve tedavi batılı toplumlara benzer olduğu varsayılarak düzenlenmektedir. Ülkemize ait verilerin oluşturulması, tanı ve tedavi stratejileri açısından klinisyene fayda sağlaması ve böylece tedavi başarısını artırabilmesi bakımından önemlidir. Bu amaçla çalışmamızda KHDAK tanılı olguların tümör parafin bloklarında onkogen oluşumuna sebep olan ve sık gözlemlenen mutasyonların sıklıklarının ve korelasyonlarının belirlenmesi amaçlanmıştır. Materyal-Metot: Tanısı KHDAK olan toplam 80 hastaya ait parafin blok kesitlerinden genomik DNA izolasyonu yapılmıştır. Ticari mutasyon kitleri (Roche Diagnostics, Amoy Diagnostics) kullanılarak Cobas z (Roche Diagnostics) RT-PCR cihazında Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü (EGFR), Kirsten sıçan sarkoma viral onkogen homoloğu (KRAS), v-Ras Nöroblastom viral onkogen homoloğu (NRAS), v-Raf Murine sarkoma viral onkogen homoloğu (BRAF), Fosfatidil inozitol-3-kinaz katalitik alfa polipertid (PIK3CA), İnsan Epidermal Büyüme Faktör Reseptörü 2 (HER2) mutasyonları araştırılmıştır. Bulgular: 80 olgunun 37’sinde toplam 38 mutasyon saptanmıştır. Olguların 7’sinde EGFR, 23’ünde KRAS, 6’sında PIK3CA, 1’inde BRAF ve 1’inde NRAS mutasyonu saptanmıştır. HER2 mutasyonu hiçbir olguda saptanmamıştır. KRAS mutasyonu bulunan bir olguda PIK3CA mutasyonu birlikteliği saptanmıştır. Sonuç: Sonuçlarımız; Ülkemizde PIK3CA mutasyon sıklığı dışında batılı toplumların mutasyon profiline benzer bir profile sahip olduğumuzu göstermektedir. Elde ettiğimiz PIK3CA mutasyon sıklığı %7,5’tir ve literatürdeki gösterilen %1-4 aralığının üzerindedir. Sonuçlarımız doğrultusunda PIK3CA mutasyonlarının tanı ve tedavide daha fazla dikkate alınmasının tedavi başarısına katkı sağlayabileceğini düşünmekteyiz

Rituximab’ın akut lenfoblastik lösemi ve kronik lenfositik lösemide JAK-STAT ve NF-?B sinyal yolaklarına etkileri

Objectives: Rituximab is a monoclonal antibody that targets the B-lymphocyte surface antigen CD20. It is used in the treatment of some diseases including B-cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL). There are a lot of data regarding effect of Rituximab on lymphoma cells. But, there is no satisfactory information about the effect of Rituximab on the signaling pathways in leukemia cells. in this study, it was aimed to understand the effect of Rituximab on JAK-STAT and NF-?B signaling pathways in B-cellacute lymphoblastic leukemia (B-ALL) and B-CLL. Material and methods: Apoptotic effect of Rituximab in the TANOUE (B-ALL) and EHEB (B-CLL) cell lines were evaluated by using the Annexin V method. mRNA expression levels of STAT3 and RelA were analysed by quantitative RT-PCR (Q-PCR). Alterations in STAT3 and RelA protein expressions were detected by using a chromogenic alkaline phosphatase assay after Western Blotting. Results: Rituximab had no apoptotic effect on both cell lines. Complement-mediated cytotoxicity was only detected in EHEB cells. mRNA and protein expressions of STAT3 and RelA genes were decreased following Rituximab treatment. Conclusion: Our preliminary results suggest that the use of Rituximab might be effective in B-ALL though both signaling pathways.Amaç: Rituximab, B-lenfosit yüzey antijeni CD20’yi hedefleyen bir monoklonal antikordur. B-hücre kronik lenfositik lösemi (B-KLL) gibi bazı hastalıkların tedavisinde kullanılmaktadır. Rituximab’ın lenfoma hücrelerindeki etkisi ile ilgili birçok veri vardır. Ancak, lösemi hücrelerindeki sinyal yolaklarına etkisi ile ilgili yeterli bilgi bulunmamaktadır. Bu çalışmada, Rituximab’ ın, B-hücre akut lenfoblastik lösemi (B-ALL) ve B-KLL’deki JAK-STAT ve NF-?B sinyal yolakları üzerindeki etkisinin anlaşılması hedeflenmiştir. Gereç ve Yöntem: Rituximab’ ın TANOUE (B-ALL) ve EHEB (B-KLL) hücre hatlarındaki apoptotik etkisi Annexin V yöntemi ile belirlendi. STAT3 ve RelA’nın mRNA ekspresyon seviyeleri kantitatif RT-PCR (Q-PCR) ile analiz edildi. STAT3 ve RelA protein ekspresyonlarındaki değişimler Western Blot sonrası kromojenik alkalen fosfataz analizi ile tespit edildi. Bulgular: Rituximab’ın her iki hücre hattında apoptotik etkisi bulunmamaktadır. Kompleman-aracılı sitotoksisite sadece EHEB hücre hattında saptanmıştır. Rituximab uygulaması sonrası STAT3 ve RelA’nın mRNA ve protein ekspresyonları azalmıştır. Sonuç: İlk sonuçlarımız, Rituximab kullanımının B-ALL’ de her iki sinyal yolağı aracılığıyla etkili olabileceğini düşündürmektedir

Hydroxycinnamic Acids in Wild Blueberry and Effects of Hydroxycinnamic Acids on Apoptosis Induction in Cancer Cell Culture

: In this study, the fruits and leaves of wild blueberries grown naturally in our country will be evaluated by using different infusion and boiling methods. Blueberry teas; leaves, raw fruit, dried and shredded raw fruit, fruit beans and seedless raw fruit of different infusions were used after boiling them for 1 min, 3 min, 5 min, 7 min, 10 min. Phenolic levels were determined by LC MS/MS technique. The antioxidant and activities of all products in the vitro HCT-116 colon cancer cell line were analyzed by spectrophotometric methods. MDA and TEAC were evaluated for antioxidant activity. Cytotoxicity and viability tests were performed by adding WST-8 (Water Soluble Tetrazolium Salt-8) solution. For apoptosis, TRAIL and Apaf-1 ELISA Kit were used for the activation of caspases of intrinsic and extrinsic pathways

Ferulik asitin lipopolisakkaridaz ile induklenmiş insan lösemi monositik hücrelerinde sitokin salınımına etkisi

Amaç: Makrofajlar doğal immün cevabı başlatan ve patojenle ilk temasta bulunan hücreler olarak kabul edilmektedir. Hem hücreler arası ilişkiler hem de inflamatuar mediyatörlerin salınımı yoluyla doğal immün ve inflamatuar yanıtta etkin rol oynamaktadırlar. İnsan THP-1 lösemi monositik hücreleri, makrofajların in vitro olarak fonksiyonlarını, mekanizmalarını ve sinyal yollarını araştırmak için en çok kullanılan hücre dizisidir. Lipopolisakkarit makrofaj farklılaşmasını başlatmak için yaygın olarak kullanılan uyarıcılar arasında yer almaktadır. Ferulik asidin, indüklenebilir nitrik oksit sentaz, kaspazlar ve siklooksijenaz (COX)-2 dahil olmak üzere proinflamatuar sitokinlerin ekspresyonunu ve/veya aktivitesini inhibe ettiği bilinmektedir. Bu çalışmada, lipopolisakkarit ile indüklenen THP-1 monosit hücrelerinde Ferulik asidin sitokin (COX-1, IL-l?, IL-1?, TNF-?, IL-6, IL-10, NF-k? ve IFN-y) düzeyleri üzerindeki etkisini araştırmayı amaçladık. Gereç ve Yöntem: TNF alfa seviyeleri farklı konsantrasyonlarda ve zamanlarda LPS eklenerek ölçüldü ve en uygun konsantrasyon ve süre belirlendi. COX-1, IL-l?, IL-l?, TNF-?, IL-6, IL-10, NF-k? ve IFN-y'nin sitokin miktarları, inkübasyon sürelerinin sonunda toplanan süpernatanlarda ELISA ile ölçüldü. Bulgular: Ferulik asidin, NF-k? inhibisyonu ile lipopolisakkarit ile indüklenen THP-1 hücrelerinde artan TNF-?, IL-l? ve IL-l? ekspresyonunu inhibe ettiğini bulduk. Sonuç: Ferulik asidin LPS ile indüklenen THP-1 hücrelerinde sitokin salınımı üzerindeki etkisinin gösterilmesi, aşırı inflamatuar yanıtın tedavisinde ve oto-immün hastalıklara karşı korunmada etkili olabileceğini düşündürd

The evaluation of t(12;21) TEL-AML1 translocation in acute lymphoblastic leukemia patients by real-time qRT-PCR with 5-year follow-up results.

Ege Üniversitesi, Tıp FakültesiAmaç: Bu çalışmada akut lenfoblastik lösemi (ALL) ön tanılı olgularda t(12;21) translokasyonu gerçek zamanlı kantitatif revers transkriptaz polimeraz zincir reaksiyonu (qRT-PZR) yöntemi kullanılarak kantite edildiObjectives: This study aims to quantify the t(12;21) translocation in cases pre-diagnosed with acute lymphoblastic leukemia (ALL) using the real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) method

Revealing genome-wide mRNA and microRNA expression patterns in leukemic cells highlighted “hsa-miR-2278” as a tumor suppressor for regain of chemotherapeutic imatinib response due to targeting STAT5A

BCR-ABL oncoprotein stimulates cell proliferation and inhibits apoptosis in chronic myeloid leukemia (CML). For cure, imatinib is a widely used tyrosine kinase inhibitor, but developing chemotherapeutic resistance has to be overcome. In this study, we aimed to determine differing genome-wide microRNA (miRNA) and messenger RNA (mRNA) expression profiles in imatinib resistant (K562/IMA-3 μM) and parental cells by targeting STAT5A via small interfering RNA (siRNA) applications. After determining possible therapeutic miRNAs, we aimed to check their effects upon cell viability and proliferation, apoptosis, and find a possible miRNA::mRNA interaction to discover the molecular basis of imatinib resistance. We detected that miR-2278 and miR-1245b-3p were most significantly regulated miRNAs according to miRNome array. Upregulating miR-2278 expression resulted in the inhibition of resistant leukemic cell proliferation and induced apoptosis, whereas miR-1245b-3p did not exhibit therapeutic results. Functional analyses indicated that AKT2, STAM2, and STAT5A mRNAs were functional targets for miR-2278 as mimic transfection decreased their expressions both at transcriptional and translational level, thus highlighting miR-2278 as a tumor suppressor. This study provides new insights in discovering the mechanism of imatinib resistance due to upregulating the tumor-suppressor hsa-miR-2278 which stands for a functional therapeutic approach, inhibited leukemic cell proliferation, induced apoptosis, and regain of chemotherapeutic drug response in CML therapy. © 2015, International Society of Oncology and BioMarkers (ISOBM).Ege University Research Fund (APAK 2013-TIP/083