Efecto del plasma seminal en la conservación de semen en especies de uso zootécnico

El plasma seminal (PS) actúa como un medio de transporte para los espermatozoides a través del tracto reproductivo de la hembra y del macho, regula la osmolaridad del eyaculado a través de los componentes inorgánicos, es fuente de energía para los espermatozoides, brinda protección buffer contra los cambios de pH, protege a los espermatozoides de los efectos deletéreos de las especies reactivas del oxígeno a través de sus enzimas antioxidantes y regula la respuesta inmune del tracto reproductivo de la hembra. Las proteínas del PS han sido asociadas a eventos relacionados con la fertilización como la maduración espermática, la capacitación espermática, la interacción con el oviducto e incluso están implicadas en la interacción con el ovocito. En muchas especies, el PS es rutinariamente diluido o removido durante el proceso de criopreservación de semen; esto puede tener efectos positivos y/o negativos sobre la función espermática y la fertilidad. También el PS ha sido agregado luego del proceso de criopreservación. Los efectos que el PS tiene sobre el espermatozoide criopreservado varían entre especies, entre individuos de una misma especie y entre eyaculados de un mismo individuo. A pesar de un notable avance en el conocimiento de las funciones del PS, todavía existen controversias acerca del preciso rol del PS en la función espermática, en la fertilidad del macho y en el efecto que ejerce éste sobre los espermatozoides criopreservados.Seminal plasma (PS) acts as a transport medium for sperm through the reproductive tract of the female and male, regulates the osmolarity of the ejaculate through the inorganic components, is a source of energy for sperm, provides buffer protection against pH changes, protects sperm from the deleterious effects of reactive oxygen species through their antioxidant enzymes and regulates the female reproductive tract's immune response. PS proteins have been associated with fertilization events such as sperm maturation, sperm capacitation, interaction with the oviduct and are even involved in the interaction with the oocyte. In many species, PS is routinely diluted or removed during the semen cryopreservation process; this can have positive and/or negative effects on sperm function and fertility. The PS has also been added after the cryopreservation process. The effects that PS has on cryopreserved spermatozoa vary between species, between individuals of the same species and between ejaculates of the same individual. Despite a notable advance in the knowledge of the functions of PS, there is still controversy about the precise role of SP in sperm function, male fertility and its effect on cryopreserved spermatozoa.Fil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Hypoosmotic Test Combined with Coomassie Blue Staining in Llama Sperm

La integridad de las membranas plasmática y acrosomal es de gran importancia para determinar la capacidad fertilizante de los espermatozoides. Los objetivos de este trabajo fueron: 1) evaluar la funcionalidad de la membrana plasmática a través del tiempo mediante el test hipoosmótico (HOS) y 2) combinar la técnica de HOS con la tinción de Coomassie Blue (CB) para evaluar simultáneamente la funcionalidad de membrana y la integridad acrosomal en espermatozoides de semen fresco de llama. Se obtuvieron 12 eyaculados de 6 machos mediante electroeyaculación bajo anestesia general. Se realizó el test de endósmosis con y sin fijación en paraformadehído y evaluando a diferentes tiempos de conservación (0 hs sin fijar y 0, 2, 4 y 24 hs fijado). Una alícuota de la muestra fijada se procesó y se tiñó con CB. No se observaron diferencias significativas (p>0,05) en el porcentaje de espermatozoides con membranas funcionales al comparar la muestra no fijada y las muestras preservadas durante diferentes tiempos en la solución de fijación. Tampoco se observaron diferencias significativas (p>0,05) en el porcentaje de endósmosis en las muestras en las que sólo se realizó HOS y en las que se realizó HOS en combinación con CB. Es posible diferir el momento de la evaluación de la funcionalidad de membrana de los espermatozoides de llama mediante la técnica de HOS de la colecta del semen. La técnica dual (HOS + CB) permite evaluar en forma simultánea la funcionalidad de las membranas e integridad acrosomal en espermatozoides de semen fresco de llama, facilitando el trabajo a campo.To stablish sperm fertilization capacity membrane integrity and functionality are important characteristics to determine. The objectives of the present study were: 1) to evaluate the functionality of the plasma membrane over time by the hypoosmotic test (HOS) and 2) combined the HOS test with Coomassie Blue (CB) staining to simultaneously evaluate the functionality of membrane and acrosomal integrity in raw llama sperm. A total of 12 ejaculates from 6 adult llama males were collected using electroejaculation under general anesthesia. Hypoosmotic swelling test was performed with and without fixation in paraformaldehyde and the samples were evaluated over time (0 h without fixation and 0; 2; 4; and 24 h when fixed). To perform the CB stain one aliquot of the fixed samples was used. No significant differences (p>0.05) were observed in the percentage of sperm with membrane function when comparing fixed samples analyzed over time versus the samples not fixed. Also, no statistical differences (p>0.05) were observed on membrane functionality between the two protocols used; HOS test versus HOS combined with the CB stain. It is possible to differ the moment of the evaluation of the membrane functionality of llama spermatozoa using the HOS technique from the semen collection. The use of the dual technique (HOS + CB) allow the evaluation of sperm membrane function and acrosome status in raw llama semen with only one technique that can be applied on the field.Fil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pigretti, Carla. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Effect of seminal plasma on the sperm motility patterns and their relationship to the cryopreservation of llama semen

La pregunta que nos hacemos todos los que trabajamos en camélidos sudamericanos (CSA) es “¿Porqué si se insemina con la misma cantidad de espermatozoides motiles/vivos no se preña con semen criopreservado y si con el semen fresco? ”. La criopreservación de gametos permite conservar el material genético de reproductores de alta calidad genética por tiempo ilimitado y además permite transportar este material a lugares distantes de donde se encuentre el reproductor. La criopreservación de semen de camélidos sudamericanos (CSA) no ha tenido el mismo éxito que se ha observado en la especie bovina. Tanto en la llama como en la alpaca, aún se insemine con semen criopreservado el mismo número de espermatozoides vivos y móviles que con semen fresco, se obtienen muy bajos porcentajes de preñez (0 al 26%) (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Huanca et al., 2007; Giuliano et al., 2012a). Como consecuencia de esta situación, no hay campañas masivas de inseminación artificial (IA) con semen criopreservado. Diversos protocolos se han desarrollado con el fin de mejorar los resultados post-descongelado. Con respecto a los crioprotectores penetrantes, el glicerol al 7% (equilibrado a 5 °C) ha sido prácticamente el único crioprotector empleado (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Santiani et al., 2005; Morton et al., 2010). En menor medida se ha probado etilenglicol en alpacas (Santiani et al., 2005; 2013). En nuestro laboratorio, determinamos que el equilibramiento a temperatura ambiente y el uso de dimetilformamida al 7% como crioprotector penetrante, conservó la movilidad, viabilidad e integridad funcional de la membrana plasmática espermática y a su vez conservó la integridad y condensación de la cromatina de los espermatozoides de llama (Carretero et al., 2014). En el mismo trabajo, utilizando glicerol al 7%, observamos que un 87- 100% de los espermatozoides tenían el ADN fragmentado. Hasta la actualidad, la mayoría de los estudios realizados sobre criopreservación de semen de CSA se han centrado en determinar los efectos de diferentes crioprotectores y concentraciones de los mismos, temperaturas de equilibramiento y curvas de congelamiento sobre la viabilidad y la movilidad espermática.Everyone who work with camelids ask themselves “Why the pregnancy rate is higher using fresh semen versus frozen semen?”, This results are obtain even when the same amount of motile and viable spermatozoa are use in the artificial insemination. Gamete cryopreservation preserves the genetic material of males with superior genetic quality for unlimited time and also it allows the transport of this material to distant places where the males are located. Cryopreservation of South American Camelids (SAC) semen, didn’t had the same success that has been observed in cattle. Low pregnancy rates are obtain in llamas and alpacas when they are inseminated with frozen thawed spermatozoa (0 to 26%), even when the same amount of live and motile spermatozoa are inseminated compared to fresh semen used (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Huanca et al., 2007; Giuliano et al., 2012a). Because of these results no massive campaigns of artificial insemination (AI) with frozen/thawed semen are performed. Several protocols have been developed in order to improve outcomes, different cryoprotectants like glycerol 7% had been tested and is [practically the most used in cryopreserved semen (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Santiani et al., 2005; Morton et al., 2010). A small use has been giving to ethylene glycol but is been tested in alpaca semen (Santiani et al., 2005; 2013). In our laboratory, we determine that the equilibration at room temperature using dimethylformamide (7%) as a penetrating cryoprotectant can preserve motility, viability and membrane functional integrity of llama spermatozoa (Carretero et al., 2014). In this same work, we found 87- 100% of sperm with fragmented DNA using glycerol 7% as cryoprotectant. To the present, most studies on cryopreservation of camelids semen have focused on determining the effects of different cryoprotectants and concentrations, temperature equilibration and freezing curves on the viability and motility sperm.Fil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Comparison of washing methods and smear conservation periods for llama sperm acrosome assessment using the Coomassie blue stain

El objetivo de este trabajo fue comparar métodos de lavado y conservación de frotis para evaluar el acrosoma en espermatozoides de llama mediante la tinción con Coomassie Blue (CB), con el propósito de facilitar la técnica e independizar los momentos de la extracción de semen de la evaluación de los acrosomas espermáticos. Se procesaron 12 eyaculados, se probaron dos tipos de lavado de los frotis fijados (con PBS o solución fisiológica, SF) y se evaluaron diferentes temperaturas (5º C y temperatura ambiente) y tiempos (0, 1 y 7 días) de conservación. Se evaluaron los siguientes frotis (cada uno lavado con PBS o con SF): 1) fijados, teñidos y evaluados el mismo día de la extracción; 2) fijados, teñidos y conservados 24 hs a temperatura ambiente y luego evaluados; 3) fijados, conservados a 4º C durante 1 día y luego teñidos y evaluados; 4) fijados, conservados a 4º C durante 7 días y luego teñidos y evaluados. Se evaluaron un total de 8 frotis por eyaculado. No se observaron diferencias significativas en el porcentaje de acrosomas presentes evaluado por CB entre las dos metodologías de lavado de los frotis fijados, ni entre las diferentes temperaturas y los diferentes tiempos de conservación de los frotis. Conclusión: es posible utilizar solución fisiológica para lavar los frotis fijados facilitando la técnica de CB para evaluar la presencia de los acrosomas en espermatozoides de llama. Además, se logró independizar los momentos de la extracción de semen de la evaluación de los acrosomas espermáticos.The objective of this study was to compare washing methods and smear conservation periods for llama sperm acrosome assessment using the Coomassie Blue stain, with the aim of facilitating the technique and to allow the moment of sperm acrosome evaluation become independent of the moment of semen collection. Twelve ejaculates were processed; two types of washing of the smears (with PBS or with physiologic solution, PS) and different temperatures (5 ºC and room temperature) and periods of conservation (0, 1 and 7 days) were assessed. The following smears were evaluated: 1) fixed, stained and evaluated the same day of collection; 2) fixed, stained and conserved for 24 hours at room temperature and then evaluated; 3) fixed, conserved at 4º C for 1 day and then stained and evaluated and 4) fixed, conserved at 4º C for 7 days and then stained and evaluated. A total of 8 smears per ejaculate were evaluated. No significant differences were observed in the percentages of acrosomes present, evaluated by CB, between both types of washing of the fixed smears, nor between the different temperatures and conservation periods of the fixed smears. Conclusions: it is possible to use physiologic solution to wash the fixed smears, thus facilitating the Coomassie Blue technique used to evaluate the presence of llama sperm acrosomes. In addition, it was possible to separate the moment of sperm acrosome evaluation from the semen collection.Fil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gimenez, M. L.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Chaves, M. G.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Comparación de dos diluyentes comerciales para refrigerar semen de llama

El uso de diluyentes comerciales para la criopreservación de semen presenta ciertas ventajas respecto a los artesanales, ya que son de fácil preparación y poseen menor variabilidad en su composición permitiendo obtener resultados más repetibles. No existen diluyentes comerciales diseñados específicamente para los camélidos sudamericanos. Aunque formulado para el bovino, el Andromed® (AM) ha sido utilizado para refrigerar espermatozoides de alpaca con resultados variables. Existe un único reporte que evalúa el uso de los diluyentes AM y Triladyl® para refrigerar espermatozoides de llama obtenidos por aspiración pos-coital. El objetivo de este estudio fue comparar el efecto delos diluyentes AM y Androstar Plus® (AS) en la refrigeración de semen de llama obtenido por electroeyaculación. El estudio fue llevado a cabo en la FCV-UBA. Se colectaron 14eyaculados de 4 machos de llama. Cada eyaculado fue evaluado y dividido en 2 alícuotas que se diluyeron con AM y AS (0 hs), alcanzando en ambas una concentración final de50x106 espermatozoides/ml. Las muestras fueron refrigeradas a 5°C en Equitainer® y se evaluaron las siguientes características seminales luego de 24 y 48 hs de conservación: movilidad, funcionalidad de membrana, viabilidad, integridad acrosomal, morfología y condensación de la cromatina. Los resultados fueron analizados utilizando un diseño factorial (semen fresco, AM0, AS0, AM24, AS24, AM48 y AS48). Se observó un descenso significativo en la movilidad total en AS 24 y 48 hs comparado con las 0 hs(AS0: 52,6±13,8%; AS24: 23,4±12,9% y AS48: 16,4±15,3%). Las muestras refrigeradas con AM mostraron una disminución significativa de la movilidad total a las 48 hs de conservación respecto al tiempo 0, sin haber diferencias significativas entre las 0 y las 24hs ni entre las 24 y las 48 hs (AM0: 51,1±17,4%; AM24: 29,5±25,4% y AM48:21,0±21,4%). El porcentaje de espermatozoides vivos con acrosoma intacto disminuyó en las muestras refrigeradas con AM durante 48 hs comparado con las 0 hs (p˂0,05).Mientras que, el porcentaje de espermatozoides vivos con acrosoma reaccionado fue mayor en AM 48 hs comparado con AS 24 y 48 hs (p˂0,05); sin observar diferencias significativas en el porcentaje de vivos totales entre los diluyentes en los diferentes tiempos. En cuanto a la funcionalidad de membrana, se observó un descenso significativo en AS 48 hs con respecto al semen fresco (50,9±18,4% vs 28,7±12,6%). Aunque no se observaron diferencias significativas en el porcentaje de espermatozoides con morfología normal y cromatina condensada, un mayor porcentaje (p˂0,05) de colas anormales fue observado en las muestras refrigeradas con AS comparadas con el semen fresco y con las muestras refrigeradas con AM (fresco: 11,8±7,9%; AM24: 10,9±5,2%; AM48: 9,5±4,7%;AS24: 19,2±6,0% y AS48: 21,3±12,6%). Aunque ambos diluyentes comerciales lograron conservar las características espermáticas de las muestras refrigeradas en valores aceptables, el diluyente Andromed® mostró mejores resultados y podría ser considerado como una opción para la refrigeración de semen de llama.Fil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Velásquez González, Nicolás. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaX Jornadas de Jóvenes InvestigadoresArgentinaUnivesidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinaria

Air-drying llama sperm affects DNA integrity

The objective of this study was to evaluate the effects of air-drying preservation on llama sperm DNA. Semen collections were carried out using electroejaculation under general anesthesia. A total of 16 ejaculates were processed from 4 males (n = 4, r = 4). Each sample was diluted 4:1 in a collagenase solution in TALP media, then incubated and centrifuged at 800 g for 8 min. The pellet was re-suspended to a concentration of 20 million sperm/ml in TALP. Then the samples were placed onto sterile slides forming lines and were left to dry under laminar flow for 15 min. After this, the slides were placed into Falcon centrifuge tubes and kept at 5°C. Sperm characteristics (motility, membrane function, viability and morphology) were evaluated in raw semen and in the air-dried samples kept at 5°C for 30 min. DNA evaluation (integrity and degree of chromatin condensation) was carried out in raw semen and in the air-dried samples after 30 min, 7, 14, 21, 30, and 60 days after preservation. To compare raw semen to the air-dried samples, a Wilcoxon test was used for all sperm characteristics except for DNA, where a paired Student t-test was applied. A split plot design was used to compare chromatin condensation between the different periods of preservation and a Kruskal Wallis test was used to compare DNA integrity. Motility, membrane function, viability and sperm with intact DNA decreased in the air-dried samples (p 0.05). No significant differences were observed in the percentage of sperm with condensed chromatin between the different periods of preservation (p > 0.05). On the other hand, a significant decrease in the percentage of sperm with intact DNA was observed as from day 7 of preservation (p < 0.05). In conclusion the air-drying process has a negative effect on llama sperm DNA, hence the media used will need to be improved to protect DNA and be able to implement this technique in this species.Fil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Chaves, María Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gambarotta, Mariana Carla. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Neild, Deborah Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Development of a GnRH-PGF2α based synchronization and superstimulation protocol for fixed-time mating in llama embryo donors

The aim of the present study was to evaluate the application of a GnRH-PGF2α based synchronization and superstimulation protocol for fixed-time natural mating in llama embryo donors. All females (n = 8) received 8 μg IM of GnRH analog (GnRHa; buserelin) on day 0, regardless of follicular status. After eight days, another GnRHa dose was administered followed by 250 μg IM PGF2α (cloprostenol). A dose of 1000 IU IM of equine chorionic gonadotrophin (eCG) was applied on day 12 and a new dose of PGF2α was administered on day 13. All embryo donors were mated with a male of proven fertility followed by a GnRHa dose on day 18. 24 h later, mating was repeated with a different male. Transcervical uterine flushing for embryo recovery was carried out on all females on day 26. Recipient females received one dose of GnRHa (day 0) two days after the first mating of embryo donor females. A 75% (6/8) of embryo donors responded to the superstimulation treatment with a range of 2 to 5 corpus luteums (CLs) on embryo recovery day. A total of 24 CLs were registered, with a mean of 4 ± 0.9 CLs per female. Embryo recovery rate was 66.7% (16/24), with a range of 0 to 4 embryos and a mean of 2.7 ± 1.5 embryos per female. Regarding quality of the recovered embryos, 56.2% were grade I, 6.2% were grade II and 37.5% were grade V (untransferable; arrested morulae). Grade I and II embryos (n = 10) were transcervically transferred into recipient females (n = 10) six days after inducing their ovulation. At 24 days after embryo transfer (ET), a 50% pregnancy rate was registered. In conclusion, a group of llama embryo donors can be synchronized and superstimulated using a fixed-time mating protocol based on GnRHa, PGF2α, and eCG without the necessity of using ultrasonography in the field.Fil: Zampini, Enzo German. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Veiga, Maria Fernanda. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cabido, Luciana. Gobierno de la Provincia de Jujuy. Dirección Provincial de Desarrollo Ganadero; ArgentinaFil: Neild, Deborah Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Chaves, María Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo Horacio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Trasorras, Virginia Luz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Neurological disorder in a male llama originated by an abscedative myositis

Background: Early diagnosis of neurological conditions in South American Camelids is crucial for treatments, prognosis and clinical patient development. Infectious agents, parasite, nutritional conditions or trauma, can cause neurological symptoms in camelids. Behavioral particularities can produce late infections and should be considered in differential diagnosis in clinical neurological cases. Case description: A 4-year-old male llama was attended for consultation for a limp in his left hind leg. On clinical examination no general nor hind leg problems were found. After a week of the first consultation he presented an acute disorder to move. A complete neurological exam detected paraplegia with decreased deep sensation and hyporeflexia in the hind limbs were found. Complete blood work analysis and radiographs were performed, a moderate anemia and leucocytosis was detected and, radiographs suggested osteomyelitis on the spinal process in the third lumbar vertebra. Anti-inflammatory and antibiotic treatment with florfenicol was chosen and used at a dose of 20 mg/kg intramuscularly. The male llama died two weeks after the first sign appeared. At postmortem examination the most relevant lesion was a severe inflammatory infiltration delimited with connective tissue in the lumbar muscles, compatible with an abscedative myositis, Enterococcus spp. was isolated in the culture from the lesion. Conclusion: To the authors knowledge this is the first report of a secondary and late infection produced as a consequence of aggressive behavior between males and should be consider as a differential diagnose in neurological disorders in these species.Fil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Chaves, M. G.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Veiga, M. F.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Schapira, Andrea. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Suranitti, A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentin

Expression of β‐NGF and high‐affinity NGF receptor (TrKA) in llama (Lama glama) male reproductive tract and spermatozoa

β‐Nerve growth factor (β‐NGF) is a seminal plasma element, responsible for inducing ovulation in camelids. The main organ of β‐NGF production remains nondescript. The aims of this study were to (a) characterize gene expression and protein localization of β‐NGF and its main receptor tyrosine kinase receptor A (TrKA) in the llama male reproductive tract, and (b) determine whether the seminal β‐NGF interacts with ejaculated sperm by localizing β‐NGF and TrKA in epididymal, ejaculated, and acrosome‐reacted (AR) sperms and, additionally, by identifying β‐NGF presence in sperm‐adsorbed proteins (SAP). Both β‐NGF and TrkA transcripts are widely expressed along the male reproductive tract, with a higher expression level of β‐NGF at prostate (p < 0.05). β‐NGF immunolabeling was only positive for prostate, whereas TrKA label was present in epithelial and muscular cells of testis, prostate, bulbourethral glands, and epididymis. Using an immunofluorescent technique, β‐NGF was colocalized with TrKA in the middle piece of ejaculated and AR sperm. However, only TrKA was observed in epididymal sperm indicating that β‐NGF could have a seminal origin. This was also confirmed by the identification of four β‐NGF isoforms in SAP. This study extends the knowledge about the participation of β‐NGF/TrkA in llama reproduction, providing evidence that may have roles in the regulation of sperm physiology.Fil: Sari, Luciana María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Zampini, Renato. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia; ArgentinaFil: Argañaraz, Martin Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Barraza, Daniela Estefanía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Ratto, Marcelo Hector. Universidad Austral de Chile; ChileFil: Apichela, Silvana Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Tucuman. Facultad de Agronomia y Zootecnia. Cátedra de Zootecnia General I; Argentin

Sperm selection in cooled llama semen with egg yolk extender

The objective of the study was to separate motile and with functional membrane integrity sperm from diluents in cooled llama semen. A total of 21 ejaculates from 7 llama males were obtained and cooled with the follow methodology. Each sample was incubated with collagenase 0.1% and then divided in two aliquots: R- diluted 1:2 with a lactose-egg yolk diluent (L-E) and Rc- centrifugated at 800 g and the pellet resuspended in L-E diluent. Both samples where them cooled at 5 °C during 24 h. Three different methodologies were used to separate sperm from diluents; Androcoll-E-Large, Percoll® (45%, 45%-70%, 45%-80%, 45%-90% y 60%-90%) and swim up. Motile llama sperm with lower amount of egg yolk was obtain only when using Percoll® 45%, 45%-70%, 45%-80%. After this the remaining samples (14 ejaculates) where processed with the following methods. Raw semen was cooled with seminal plasma (R) and without it (Rc), with the following final treatments; Percoll® 45/70 (R70), 45/80 (R80) and Percoll® 45/70 (Rc70) y 45/80 (Rc80). When sperm variables showed statistical normality results were analyzed with a factorial design, if not a Friedman test was used. The Percoll® Rc80 was the one that separated higher motile and alive sperm free from the diluent compared with the other treatments evaluated. To conclude, this protocol can be used to process cooled llama sperm to apply in assisted reproduction biotechnologies.El objetivo de este trabajo fue obtener espermatozoides móviles, libres de diluyente y con integridad funcional de la membrana plasmática a partir de eyaculados refrigerados de llama. Se refrigeraron un total de 21 eyaculados de 7 machos mediante la siguiente metodología: cada muestra se incubó en una solución de colagenasa al 0,1 % y se dividió dos alícuotas: R: se la diluyó 1:2 con un diluyente en base a lactosa-yema de huevo (L-Y) y Rc: se centrifugó a 800g y el pellet obtenido se resuspendió en 2 ml de L-Y. Ambas muestras se refrigeraron durante 24 hs a 5° C. En 7 eyaculados se probaron las siguientes metodologías: Androcoll-E-Large, Percoll® (45%, 45%-70%, 45%-80%, 45%-90% y 60%-90%) y swim up. Solamente los gradientes de Percoll® 45%-70% y 45%-80% permitieron obtener una fracción de espermatozoides móviles con una menor cantidad de yema, consecuentemente en los restantes 14 eyaculados se realizó el siguiente experimento: refrigerado con plasma seminal (R): Percoll® 45/70 (R70) y 45/80 (R80) y refrigerado sin PS (Rc): Percoll® 45/70 (Rc70) y 45/80 (Rc80). En las variables espermáticas en las que se logró normalidad se utilizó un diseño factorial y en el resto se utilizó el test de Friedman. El gradiente de Percoll® 45/80 realizado en muestras de espermatozoides refrigerados sin plasma seminal (Rc80) fue el que permitió obtener una muestra con un número suficiente de espermatozoides refrigerados móviles, libre de diluyente y con mayor porcentaje de espermatozoides vivos respecto al resto de los gradientes. Por lo tanto, es posible utilizar esta metodología en la preparación de espermatozoides refrigerados de llama para utilizar en protocolos de fertilización asistida.Fil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Santa Cruz, R.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin