24 drugs as potential SKP2 Inhibitors

Major depression is a debilitating and highly prevalent disease that up to now has been treated predominantly with antidepressants that increase the availability of serotonin and/or noradrenaline in the synaptic cleft. High rates of non-responders to first line therapy and high levels of chronicity within patients, however, demonstrate the limits of the monoamine hypothesis of depression. Thus the search for novel, more-rapidly acting and more effective antidepressants has become the focus of much research during the past years. Autophagy, a process whereby cells salvage and recycle cellular macromole-cules or organelles involving dynamic reorganization and fusion of membranous structures in response to stress, has been implicated as playing a role in several diseases, namedly different cancers and neurodegenerative diseases such as Parkinson’s, Huntington’s and Alzheimer’s. It has recently been observed that autophagic markers such as Beclin1 were increased following treatment with serotonin reuptake inhibitors and conversely, a stabilisation of Beclin1 (and therefore autophagic pathways) might lead to an antidepressant-like effect. 24 substances that were found to be inhibitors of the SKP2 E3 ligase via a high throughput screen were tested as potential autophagy inducers and thus novel antidepressants and primary rat astrocytes were treated with them in non-toxic concentrations. Effects on autophagic markers or molecules involved in autophagy such as Beclin1, LC3, and Vps34, as well as the cyclin dependent kinase p27, were investigated via Western Blot. In addition, effects on autophagic flux were determined with Bafilomycin A1 and p62 degradation assays. As a result, I could show that drugs such as Salinomycin, Celecoxibe, Etoposide, Xanthohumol and Perphenazine increased autophagic markers, making them promising candidates for the treatment of major depression. The effects of Salinomycin were further tested on mice subjected to a forced swim test. Here, Salinomycin was found to increase struggling and to decrease the time spent floating, thus exhibiting an antidepressant-like effect. An increase in autophagy seems to harbor a large psychopharmacological potential. Yet it still needs to be seen whether autophagy, the recycling of proteins per se, or the membrane processes kicked off by the initiator complexes underly the antidepressant action. Hence, before proceeding to test the respective substances in clinical trials, further research is needed to expand the range of autophagic markers examined, check the drugs’ blood-brain-barrier crossing potentials, and test the substances in further animal experiments.Major Depression ist eine belastende, weit verbreitete Krankheit. Derzeit wird sie meist mit Antidepressiva behandelt, welche die Verfügbarkeit von Serotonin und/oder Noradrenalin im synaptischen Spalt erhöhen. Eine hohe Anzahl von depressiven Patienten reagiert jedoch entweder gar nicht oder in insuffizientem Maße auf diese Erstlinientherapie: Niedrige Remissions- und hohe Chronifizierungsraten sowie der verzögerte Wirkeintritt von bis zu 6 Wochen deuten darauf hin, dass die Monoaminmangelhypothese unzulänglich ist. Daher bedarf es der Entwicklung neuer – mehr spezifischer, potenterer und schneller wirkender - Antidepressiva . In der Pathogenese von verschiedenen Krankheiten wie zum Beispiel diverser Krebsarten und neurodegenerativen Erkrankungen wie Parkinson, Alzheimer und Huntington scheint die Autophagie, ein intrazellulärer Prozess eine große Rolle zu spielen, bei dem Zellen Makromoleküle und Zellbestandteile abbauen und wiederverwerten. Neue Studien konnten zeigen, dass Marker der Autophagie sowie in den Prozess eingebundene Moleküle wie z.B. Beclin1 auch nach einer antidepressiven Therapie mit Serotonin Wiederaufnahmehemmern erhöhte Werte aufweisen. Darüber hinaus scheint eine Stabilisierung von Beclin1 (und somit eine Autophagieinduktion) einen antidepressiven Effekt auszulösen. In der hier vorliegenden Arbeit wurden 24 Medikamente, die in einem Hochdurchsatz-Screen als SKP2 E3 ligase Hemmer identifiziert worden sind, als potentielle neue Antidepressiva in primären Rattenastrozyten in nichttoxischer Dosis gestestet. Marker/Moleküle wie Be-clin1, LC3 und Vps34 sowie der Zellzyklus Inhibitor p27 dienten der Western Blot Analyse. Die Applikation von Bafilomycin A1 und die Quantifizierung des p62 Abbaus ermöglichten die Beobachtung des autophagischen Flusses. Im Ergebnis hat sich gezeigt, dass Medikamente wie Salinomycin, Celecoxibe, Etoposide, Xanthohumol und Perphenazine einen positiven Effekt auf die Autophagie hatten und somit für eine antidepressive Therapie erfolgsversprechend sein könnten. Salinomycin wurde ferner im Forced Swim Test in Mäusen untersucht. Mäuse, die damit injiziert worden waren, strampelten signifikant mehr und ließen sich weniger treiben als die Kontrollgruppe der Tiere, die mit Sodiumchlorid behandelt worden waren. Dies deutet auf einen antidepressiven Effekt von Salinomycin hin. Die Erhöhung der Autophagie scheint ein großes Potential für die Behandlung von Depressionen zu besitzen. In weiteren Studien muss jedoch exploriert werden, ob wirklich die Autophagie, der Umsatz von Proteinen an sich, oder die durch die Initatorkomplexe angestoßenen Membranprozesse der antidepressiven Wirkung zugrunde liegen. Bevor entsprechende Medikamente in klinischen Studien getestet werden können, bedarf es außerdem weiterer Experimente mit einer größeren Palette von autophagischen Markern und einer Erforschung ihrer Bluthirnschrankengängigkeit

24 drugs as potential SKP2 Inhibitors

Major depression is a debilitating and highly prevalent disease that up to now has been treated predominantly with antidepressants that increase the availability of serotonin and/or noradrenaline in the synaptic cleft. High rates of non-responders to first line therapy and high levels of chronicity within patients, however, demonstrate the limits of the monoamine hypothesis of depression. Thus the search for novel, more-rapidly acting and more effective antidepressants has become the focus of much research during the past years. Autophagy, a process whereby cells salvage and recycle cellular macromole-cules or organelles involving dynamic reorganization and fusion of membranous structures in response to stress, has been implicated as playing a role in several diseases, namedly different cancers and neurodegenerative diseases such as Parkinson’s, Huntington’s and Alzheimer’s. It has recently been observed that autophagic markers such as Beclin1 were increased following treatment with serotonin reuptake inhibitors and conversely, a stabilisation of Beclin1 (and therefore autophagic pathways) might lead to an antidepressant-like effect. 24 substances that were found to be inhibitors of the SKP2 E3 ligase via a high throughput screen were tested as potential autophagy inducers and thus novel antidepressants and primary rat astrocytes were treated with them in non-toxic concentrations. Effects on autophagic markers or molecules involved in autophagy such as Beclin1, LC3, and Vps34, as well as the cyclin dependent kinase p27, were investigated via Western Blot. In addition, effects on autophagic flux were determined with Bafilomycin A1 and p62 degradation assays. As a result, I could show that drugs such as Salinomycin, Celecoxibe, Etoposide, Xanthohumol and Perphenazine increased autophagic markers, making them promising candidates for the treatment of major depression. The effects of Salinomycin were further tested on mice subjected to a forced swim test. Here, Salinomycin was found to increase struggling and to decrease the time spent floating, thus exhibiting an antidepressant-like effect. An increase in autophagy seems to harbor a large psychopharmacological potential. Yet it still needs to be seen whether autophagy, the recycling of proteins per se, or the membrane processes kicked off by the initiator complexes underly the antidepressant action. Hence, before proceeding to test the respective substances in clinical trials, further research is needed to expand the range of autophagic markers examined, check the drugs’ blood-brain-barrier crossing potentials, and test the substances in further animal experiments.Major Depression ist eine belastende, weit verbreitete Krankheit. Derzeit wird sie meist mit Antidepressiva behandelt, welche die Verfügbarkeit von Serotonin und/oder Noradrenalin im synaptischen Spalt erhöhen. Eine hohe Anzahl von depressiven Patienten reagiert jedoch entweder gar nicht oder in insuffizientem Maße auf diese Erstlinientherapie: Niedrige Remissions- und hohe Chronifizierungsraten sowie der verzögerte Wirkeintritt von bis zu 6 Wochen deuten darauf hin, dass die Monoaminmangelhypothese unzulänglich ist. Daher bedarf es der Entwicklung neuer – mehr spezifischer, potenterer und schneller wirkender - Antidepressiva . In der Pathogenese von verschiedenen Krankheiten wie zum Beispiel diverser Krebsarten und neurodegenerativen Erkrankungen wie Parkinson, Alzheimer und Huntington scheint die Autophagie, ein intrazellulärer Prozess eine große Rolle zu spielen, bei dem Zellen Makromoleküle und Zellbestandteile abbauen und wiederverwerten. Neue Studien konnten zeigen, dass Marker der Autophagie sowie in den Prozess eingebundene Moleküle wie z.B. Beclin1 auch nach einer antidepressiven Therapie mit Serotonin Wiederaufnahmehemmern erhöhte Werte aufweisen. Darüber hinaus scheint eine Stabilisierung von Beclin1 (und somit eine Autophagieinduktion) einen antidepressiven Effekt auszulösen. In der hier vorliegenden Arbeit wurden 24 Medikamente, die in einem Hochdurchsatz-Screen als SKP2 E3 ligase Hemmer identifiziert worden sind, als potentielle neue Antidepressiva in primären Rattenastrozyten in nichttoxischer Dosis gestestet. Marker/Moleküle wie Be-clin1, LC3 und Vps34 sowie der Zellzyklus Inhibitor p27 dienten der Western Blot Analyse. Die Applikation von Bafilomycin A1 und die Quantifizierung des p62 Abbaus ermöglichten die Beobachtung des autophagischen Flusses. Im Ergebnis hat sich gezeigt, dass Medikamente wie Salinomycin, Celecoxibe, Etoposide, Xanthohumol und Perphenazine einen positiven Effekt auf die Autophagie hatten und somit für eine antidepressive Therapie erfolgsversprechend sein könnten. Salinomycin wurde ferner im Forced Swim Test in Mäusen untersucht. Mäuse, die damit injiziert worden waren, strampelten signifikant mehr und ließen sich weniger treiben als die Kontrollgruppe der Tiere, die mit Sodiumchlorid behandelt worden waren. Dies deutet auf einen antidepressiven Effekt von Salinomycin hin. Die Erhöhung der Autophagie scheint ein großes Potential für die Behandlung von Depressionen zu besitzen. In weiteren Studien muss jedoch exploriert werden, ob wirklich die Autophagie, der Umsatz von Proteinen an sich, oder die durch die Initatorkomplexe angestoßenen Membranprozesse der antidepressiven Wirkung zugrunde liegen. Bevor entsprechende Medikamente in klinischen Studien getestet werden können, bedarf es außerdem weiterer Experimente mit einer größeren Palette von autophagischen Markern und einer Erforschung ihrer Bluthirnschrankengängigkeit

The Impact of Prepartum Platelet Count on Postpartum Blood Loss and Its Association with Coagulation Factor XIII Activity

BACKGROUND Postpartum hemorrhage is a leading cause of maternal morbidity and mortality worldwide. Contradictory information exists regarding the relevance of prepartum platelet count on postpartum hemorrhage. We have shown prepartum coagulation factor XIII to be associated with postpartum blood loss; however, little is known about the association of platelet count with factor XIII activity. Our objectives were, first, to evaluate the impact of prepartum platelet count on measured postpartum blood loss in the context of prepartum measurements of coagulation factors I, II, and XIII and, second, to evaluate the association of platelet count with coagulation factor XIII, both pre- and postpartum. MATERIAL AND METHODS This is a secondary analysis of a prospective cohort study (PPH 1,300 study) which analyzed the impact of prepartum blood coagulation factors on postpartum blood loss in 1,300 women. Blood loss was quantified using a validated technique. The impact of prepartum platelet count on measured blood loss was assessed by continuous outcome logistic regression; the association of platelet count with factor XIII activity by Spearman rank correlation. RESULTS Prepartum platelet count was significantly associated with measured postpartum blood loss: every one unit (G/L) increase in prepartum thrombocytes was associated with an odds ratio of 1.002 (95% confidence interval, 1.001-1.004, p = 0.005) to keep blood loss below any given cut-off level. This means that the probability of postpartum hemorrhage decreases with increasing prepartum platelet levels. Moreover, a significant association of platelet count with factor XIII activity was shown (Spearman rank correlation coefficient for prepartum values 0.228, p < 0.001, and for postpartum values 0.293, p < 0.001). DISCUSSION/CONCLUSION The significant association of prepartum platelet count and postpartum blood loss as well as the association of platelet count with blood coagulation factor XIII activity support the likely role of platelets in preventing postpartum hemorrhage and support the new guidelines for the treatment of postpartum hemorrhage in Germany, Austria, and Switzerland, which calls for optimizing platelet counts peripartally in case of postpartum hemorrhage. A possible effect of platelets on the level of circulating factor XIII cannot be ruled out and should prompt further investigation

Characteristics, Treatment Patterns and Survival of International Federation of Gynecology and Obstetrics Stage IV Epithelial Ovarian Cancer—A Population-Based Study

Background: The aim of the present study was to describe an unselected population of patients with diagnosis of FIGO stage IV OC. Methods: Data from 1183 patients were available for analysis. Results: The majority of patients (962/1183, 81.3%) received cancer-directed treatment. The median follow-up time was 3.8 years, and the median overall survival duration was 1.9 years. Notably, patients >80 years had a low overall survival rate (HR of age >80 years vs. ≤50 years was 3.81, 95%-CI [2.76, 5.27], p p p = 0.007 vs. systemic treatment only. After adjustment for age and histology, survival differences between treatment schemes were smaller (HR 0.81, 95%-CI [0.66, 1.00], p = 0.12). Conclusions: In this cohort of patients with FIGO stage IV OC, more than 80% of the patients received cancer-directed treatment. Age and high-grade serous histology were determinants for survival. The highest overall survival rate was observed in patients who underwent surgery followed by systemic treatment