A UTILIZAÇÃO DA IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA NO DIAGNÓSTICO DE ROTINA DA LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA E SUAS IMPLICAÇÕES NO CONTROLE DA DOENÇA

Neste trabalho foram analisados, por enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) e imunofluorescência indireta (IFI), 101 soros caninos provenientes da Região Metropolitana de Salvador, Bahia, sendo 30 soros de cães com resultado parasitológico positivo para Leishmania chagasi em cultura esplênica e 71 soros de cães clinicamente sadios. Dez soros de cães com cultivo positivo e com resultados sorológicos concordantes ou não entre os testes ELISA e IFI foram testados pela técnica de Western-Blotting (WB). Das 30 amostras de soro com resultado positivo em cultura, o ELISA detectou 27 amostras positivas e o IFI mostrou resultado positivo em 12. Das 71 amostras de soro de cães clinicamente sadios, todas apresentaram resultados negativos no ELISA e uma apresentou resultado positivo no IFI. A sensibilidade e a especificidade foram de 90% e 100% para o ELISA e 40% e 98,6% para IFI, respectivamente. O índice de concordância Kappa entre os testes foi considerado moderado (0,53), e os resultados do WB apresentaram maior concordância com o ELISA. Este estudo demonstra a possibilidade de falha no teste IFI na detecção de cães infectados e discute a sua implicação no controle da doença em áreas endêmicas. PALAVRAS-CHAVE: Cães, ELISA, IFI, Leishmania chagasi, Western-Blotting

Uso de método de biologia molecular quantitativo (PCR real-time) na avaliação de reservatórios para leishmaniose visceral

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2012-07-19T17:20:40Z No. of bitstreams: 1 Fred da Silva Juliao Uso de método de biologia molecular....pdf: 3387831 bytes, checksum: 0efc6396d21a6e8a634b8026665afe7c (MD5)Made available in DSpace on 2012-07-19T17:20:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fred da Silva Juliao Uso de método de biologia molecular....pdf: 3387831 bytes, checksum: 0efc6396d21a6e8a634b8026665afe7c (MD5) Previous issue date: 2011Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.A leishmaniose visceral (LV) é uma zooantroponose sistêmica de importância reconhecida em saúde pública, 90% dos casos no novo mundo são oriundos do Brasil. Os cães domésticos e as raposas são considerados como os principais reservatórios. A persistência da Leishmania em áreas endêmicas e o insucesso das medidas de prevenção, dirigidas exclusivamente ao reservatório canino, sugerem que outros animais podem ter importância na manutenção do ciclo de transmissão da LV. OBJETIVO: Avaliar potenciais reservatórios para LV numa área endêmica, utilizando método de biologia molecular quantitativo (PCR real-time). MÉTODOS: Foram estudados animais domésticos (bovinos, equídeos, caprinos e ovinos) e animais silvestres (marsupial), no município de Salinas da Margarida, Bahia, de 2007 a 2009. Todos os animais domésticos de produção mantidos e/ou pernoitando nas áreas urbanas do município foram incluídos. Os marsupiais foram capturados com armadilha animal modelo Tomahawk colocadas no peridomicílio das residências onde ocorreram casos de LV humana e/ou canina na localidade de Encarnação. Nos animais domésticos de produção foi coletado apenas amostra de sangue periférico e nos marsupiais, além de sangue, foi obtida uma amostra de pele através de biópsia da orelha. Em todas as amostras foi realizado PCR real-time para investigar a presença de DNA do parasito e estimar a carga parasitária. Os primers e sondas utilizados foram selecionados em gene SSU rRNA, que aparece 160 vezes no genoma de Leishmania spp. e é altamente conservado entre as espécies de Leishmania. RESULTADOS: No total, foram avaliados 80 animais domésticos (20 bovinos, 33 equídeos, 20 caprinos e 7 ovinos) e 103 marsupiais, todos da espécie Didelphis albiventris. Cinco bovinos foram positivos no teste de PCR real-time com carga parasitária variando de 12,7 a 183,5 parasitos/mL. Apenas um marsupial apresentou amostra de sangue positiva (6,0 parasitos/mL). Todos os demais animais testaram negativo. CONCLUSÃO: A técnica de PCR real-time pode ser uma ferramenta útil para avaliar o papel de potenciais reservatórios domésticos e silvestres para LV. A execução do PCR real-time é menos trabalhosa e mais prática do que a realização do teste de xenodiagnóstico, além disso, ela poder ser automatizada, permitindo a análise de grande número de amostras em estudos epidemiológicos. A detecção de carga parasitária de Leishmania em sangue de bovinos, em quantidade comparável à encontrada em cães, sugere que eles podem ser reservatórios para LV. A relativa abundância de bovinos nas áreas endêmicas para LV, assim como as evidências da preferência alimentar do vetor por estes animais, ressaltam a importância do papel que os bovinos podem ter na transmissão da LV. Mais trabalhos são necessários para elucidar estas questões.Visceral leishmaniasis (VL) is a systemic zooantroponose of public health relevance, 90% of cases in the new world are from Brazil. Domestic dogs and foxes are considered the main reservoirs. The persistence of Leishmania in endemic areas and the failure of preventive measures, directed exclusively to the canine reservoir, suggest that other animals may be important in maintaining the transmission cycle of Leishmania. OBJECTIVE: To investigate potential reservoirs for VL in an endemic area, using molecular biology quantitative method (real-time PCR). METHODS: We studied domestic animals (cattle, horses, goats and sheeps) and wildlife (marsupial), in the city of Salinas da Margarida, Bahia, from 2007 to 2009. All livestock animals maintained and/or staying overnight in the urban areas of the municipality were included. The marsupials were captured with Tomahawk model animal traps placed outside the home of homes where there were human and/or dog VL cases in the locality of the Encarnação. In livestock animals, we collected only a sample of peripheral blood and in marsupials, in addition to blood we also collected a sample of ear skin biopsy. In all samples we carried out real-time PCR to detect the presence of parasite DNA and to estimate the parasite load. The primers and probes used were selected on SSU rRNA gene, which appears 160 times in the genome of Leishmania spp. and is highly conserved among species of Leishmania. RESULTS: In total, 80 livestock animals were evaluated (20 cattle, 33 horses, 20 goats and 7 sheep), and 103 marsupials, all Didelphis albiventris. Five cattle were positive by real-time PCR with parasite load ranging from 12.7 to 183.5 parasites/mL. Only one marsupial had a positive blood sample (6.0 parasites/mL). All other animals tested negative. CONCLUSION: The real-time PCR technique can be a useful tool for assessing the potential role of domestic and wild reservoir for LV. The implementation of real-time PCR is less laborious and more practical than the test of xenodiagnosis, in addition, it can be automated, allowing for the analysis of large number of samples in epidemiological studies. Detection of Leishmania parasite load in the blood of cattle, in an amount comparable to that found in dogs, suggests that they may be reservoirs for VL. The relative abundance of cattle in endemic areas for VL, as well as evidence of vector feeding preference for these animals, highlight the important role that cattle may exert in the transmission of VL. More research is needed to clarify these issues

Resistência anti-helmíntica em rebanhos caprinos nos biomas Caatinga e Mata Atlântica

Resumo A utilização de anti-helmínticos por longos períodos como principal medida de controle das parasitoses gastrintestinais de ruminantes levou a ineficácia aos levamisol, benzimidazóis e avermectinas. Este estudo descreve a atividade anti-helmíntica in vivo em populações naturais de nematoides trichostrongilídeos de caprinos. Foram selecionados 18 rebanhos provenientes dos biomas Caatinga (n=12) e Mata Atlântica (n=6), do Estado da Bahia, Brasil, criados em pastagens comunais em região semiárida. Grupos de oito a 10 animais foram tratados com albendazol (ABZ), ivermectina (IVM), levamisol (LEV), moxidectina (MOX) e closantel (CLOS). Os resultados do Teste de Redução da Contagem de Ovos nas Fezes indicaram resistência simultânea dos gêneros Haemonchus sp. e Trichostrongylus spp. para o ABZ, IVM, LEV, MOX e CLOS. As percentagens de eficácia variaram de 0-92%, 0-75%, 0-91%, 69-97% e 0-85% para o ABZ, IVM, LEV, MXD e CLOS, respectivamente, no bioma Caatinga e 0-59% para o ABZ e 9-59% para o IVM no bioma Mata Atlântica. Verificou-se nos rebanhos eficácia inferior a 95% para estes anti-helmínticos, com exceção de um único rebanho no qual a eficácia para MOX foi de 97%, o que sugere a presença de NGIs resistentes aos principais classes de anti-helmínticos em rebanhos caprinos destes biomas

Ensaio comunitário para avaliação da efetividade de estratégias de prevenção e controle da leishmaniose visceral humana no Município de Feira de Santana, Estado da Bahia, Brasil / Communitary assay for assessment of effectiveness of strategies for prevention and control of human visceral leishmaniasis in the Municipality of Feira de Santana, State of Bahia, Brazil

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2013-01-14T17:11:44Z No. of bitstreams: 1 Souza, Verena Maria Mendes de Ensaio comunitario....pdf: 164060 bytes, checksum: c073e26a5620ad8b838ca9f1cb87d7ce (MD5)Made available in DSpace on 2013-01-14T17:11:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza, Verena Maria Mendes de Ensaio comunitario....pdf: 164060 bytes, checksum: c073e26a5620ad8b838ca9f1cb87d7ce (MD5) Previous issue date: 2008Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilEste trabalho teve como objetivo avaliar estratégias de prevenção e controle da leishmaniose visceral humana em coorte de crianças entre zero e 12 anos de idade em uma área endêmica do Município de Feira de Santana, Estado da Bahia, Brasil. A incidência de infecção foi avaliada mediante inquéritos soroepidemiológicos em três áreas identificadas como: a) áreacontrole; b) área submetida a borrifação com inseticida; e c) área submetida à combinação de borrifação com inseticida e triagem com eliminação de cães soropositivos. Ao todo, foram avaliadas 2.362 crianças: 688 na primeira área, 782 na segunda e 892 na terceira área. A densidade de incidência da infecção foi de 2,74, 2,51 e 1,94 casos/100 crianças-ano, nas áreascontrole, áreas submetidas à borrifação e áreas submetidas à borrifação e triagem com eliminação de cães, respectivamente. Considerando-se como referência as áreas-controle, o risco relativo para infecção nas áreas com uma intervenção foi de 0,99 (IC95% 0,46-2,10); e com a combinação de duas intervenções, de 0,74 (IC95%: 0,34-1,62). Embora os dados sugiram uma redução da incidência de infecção nas áreas de intervenção, essa diferença não foi significativa, estatisticamente. Palavras-chave: epidemiologia; estudo de coorte; leishmaniose visceral; incidência.The purpose of this study was to evaluate strategies of prevention and control of human visceral leishmaniasis in a cohort of infants between 0 and 12 years of age in an endemic area in The Municipality of Feira de Santana, State of Bahia, Brazil. The incidence of infection was evaluated through seroepidemiologic surveys in three areas identified as: a) control area; b) area submitted to insecticide spraying; and c) area submitted to the combination of insecticide spraying with screening and elimination of seropositive dogs. Overall, 2,362 infants were evaluated: 688 in the first area, 782 in the second one and 892 in the third area. The density incidence rate of the infection was of 2.74, 2.51 and 1.94 cases/100 child-year, in the controls areas, in the areas submitted to insecticide spraying, and in the areas where both insecticide spraying and screening and elimination of dogs were performed, respectively. Using the controls areas as reference, the relative risk for infection in the areas with one intervention was 0.99 (CI95%: 0.46-2.10); and with the combination of two interventions, of 0.74 (CI95%: 0.34-1.62). Although the data suggest a reduction of the incidence of infection in the intervention areas, this difference was not statistically significant

An epidemiologic study of for a Visceral Leishmaniasis outbreak in saltwater marsh area

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2015-03-24T19:16:43Z No. of bitstreams: 1 Souza VMM Estudo epidemiologico....pdf: 101990 bytes, checksum: cb22c495af31b8606ac8cf8dd2a44b7d (MD5)Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2015-03-24T19:28:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Souza VMM Estudo epidemiologico....pdf: 101990 bytes, checksum: cb22c495af31b8606ac8cf8dd2a44b7d (MD5)Made available in DSpace on 2015-03-24T19:28:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza VMM Estudo epidemiologico....pdf: 101990 bytes, checksum: cb22c495af31b8606ac8cf8dd2a44b7d (MD5) Previous issue date: 2006Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Universidade Federal da Bahia. Escola de Medicina Veterinária. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilUniversidade Federal da Bahia. Escola de Medicina Veterinária. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Núcleo de Apoio àPesquisa da Associação Obras Sociais Irmã Dulce. Salvador, BA, Brasilmanguezal previamente indene e determinar a prevalência da infecção canina sugerindo alguns fatores de risco associados a esta infecção. O estudo foi realizado no município de Salinas da Margarida, Bahia. Ao todo foram avaliados 558 cães, revelando uma prevalência de infecção em cães de 10%. Os dados foram colhidos através de questionários padronizados e previamente testados. A sorologia foi feita utilizando-se teste imunoenzimático (ELISA), e os cães soropositivos foram eliminados. As variáveis que apresentaram correlação com a infecção canina nas análises ajustadas para idade e multivariada foram: presença de raposas no peridomicílio, idade do cão, local onde o cão dormia e hábito de banhar o cão freqüentemente.The objective of this study was to evaluate an outbreak of visceral leishmaniasis in a saltwater marsh area without previous cases and to determine the prevalence of canine infection, suggesting potential risk factors associated with this infection. The study was carried out at the city of Salinas da Margarida, Bahia. We examined 558 dogs, yielding a prevalence of infection of 10%. The data were gathered using a standardized questionnaire, previously tested. The sorology was done using an enzyme immunoassay (ELISA), and all seropositive dogs for anti-Leishmania antibodies were promptly eliminated. The variables associated with6 canine infection in the age-adjusted or multivariate analyses were: presence of foxes in the neighborhood, dog’s age, place where the dog sleeps and habit of bathing the dog frequently

Clinical profile of naturally infected dogs from an endemic area for “Leishmania chagasi” (infantum) in Bahia State, Brazil

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2016-04-28T16:51:40Z No. of bitstreams: 1 Aguiar PHP Quadro clinico....pdf: 89325 bytes, checksum: 87130291a1e0546e5eb2a1f5ad0e6358 (MD5)Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2016-04-28T17:02:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Aguiar PHP Quadro clinico....pdf: 89325 bytes, checksum: 87130291a1e0546e5eb2a1f5ad0e6358 (MD5)Made available in DSpace on 2016-04-28T17:02:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aguiar PHP Quadro clinico....pdf: 89325 bytes, checksum: 87130291a1e0546e5eb2a1f5ad0e6358 (MD5) Previous issue date: 2007Universidade Federal da Bahia. Escola de Medicina Veterinária. Departamento de Patologia e Clínicas. Salvador, BA, BrasilUniversidade Federal da Bahia. Escola de Medicina Veterinária. Laboratório de Infectologia Veterinária. Salvador, BA, BrasilUniversidade Federal da Bahia. Escola de Medicina Veterinária. Laboratório de Infectologia Veterinária. Salvador, BA, BrasilUniversidade Federal da Bahia. Escola de Medicina Veterinária. Laboratório de Infectologia Veterinária. Salvador, BA, BrasilUniversidade Federal da Bahia. Escola de Medicina Veterinária. Laboratório de Infectologia Veterinária. Salvador, BA, BrasilUniversidade Federal da Bahia. Escola de Medicina Veterinária. Laboratório de Infectologia Veterinária. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Laboratório de Engenharia Tecidual e Imunofarmacologia. Salvador, BA, BrasilUniversidade Federal da Bahia. Escola de Medicina Veterinária. Departamento de Patologia e Clínicas. Salvador, BA, BrasilA leishmaniose visceral canina (LVC) é uma zoonose de importância em Saúde Pública, causada no Novo Mundo pela Leishmania chagasi e é associada a uma doença sistêmica crônica à qual se atribui uma gama variada de sinais clínicos. Foram examinados 61 cães, identificados como soropositivos pelo teste ELISA indireto para anticorpos anti-Leishmania, provenientes do município de Jequié, área endêmica para LVC na Bahia, tendo-se como o objetivo delinear o perfil clínico dos animais infectados. Os caninos foram submetidos ao exame físico e estudo parasitológico por cultivo do parasito em amostras de aspirado esplênico. Todos os cães foram classificados como sintomáticos, sendo 13 positivos ao exame parasitológico. Foi encontrada correlação entre os resultados positivos de cultura esplênica e a densidade óptica obtida no ELISA dos cães estudados (r=0,8555; p=0,00327) e entre os resultados de ELISA e a presença de alterações cutâneas (p=0,0402), conjuntivite (p=0,050), esplenomegalia (p=0,0272) e dificuldade de locomoção (p=0,0256), além de tendência à redução no número de hemácias nos animais. Observaram-se positividade na cultura e alterações das mucosas (p=0,0106), apatia (p=0,0469), aumento de bastonetes (p=0,0224) e leucocitose com desvio à esquerda. O conjunto de sinais clínicos encontrados mostrou-se equivalente aos sinais descritos na literatura em cães infectados por L. infantum e L. donovani nos países do velho mundo.The purpose of this study was to report a description of the clinical profile of naturally infected dogs from an endemic area for Leishmania chagasi (infantum)-caused visceral leishmaniosis in Brazil, where a wide range of clinical signs are attributed to the infection in dogs. Sixty one dogs, seropositives for anti-L. chagasi antibodies by ELISA, from the urban and peri urban areas of Jequie, in Bahia State were studied. Each clinical sign of disease was recorded. Parasitological diagnosis of Leishmania infection was positive by culture of spleen aspirated samples in 21.3 % (13/61) seropositive dogs, although all of them (100%) were defined as symptomatic by physical examination. A positive statistical correlation was found between seropositivity with high levels of optical density (above 1.0) in ELISA and presence of parasites in culture of spleen aspirates (r=0.8555; p=0.00327), cutaneous disease (p=0.0402), conjunctivitis (p=0.050), enlargement of spleen (p=0.0272) and lameness (p=0.0256). A tendency of lowered red blood cell counts was also found among animals with higher seropositivity. The group of animals with positive parasitological tests presented more mucosal lesions (p=0.0106), apathy (p=0.0469), and leucocytosis with left deviation (p=0.0224). The conjunct of clinical alterations associated to positive serological or parasitological diagnosis for Leishmania chagasi infection were similar to the reported signs of disease caused by L infantum and L. donovani in Old World countries