Creación de un portal de reproducción animal, destinado a la educación continua veterinaria

Trabajo Final (Especialización en Tecnologías Multimedia para Desarrollos Educativos)--UNC- Facultad de Ciencias Agropecuarias, 2015El objetivo de este trabajo fue desarrollar una Página WEB asociada a un entorno virtual sobre Reproducción Animal a fin de generar un espacio de educación permanente para estudiantes y profesionales de habla hispana vinculados a la medicina veterinaria. Ante un mundo globalizado y tecnificado, se requiere que la Educación Superior se ajuste a estas exigencias. La Era del Conocimiento demanda que la formación de profesionales se adapte alcanzando mejores estándares de calidad, impulsados por nuevos paradigmas. La carrera veterinaria por su vastedad deja poco margen para la práctica y la especialización, particularmente en lo que se refiere a la educación veterinaria en la Universidad. En muchos casos, el veterinario concluye su carrera sin la preparación óptima para el ejercicio de la profesión, con lo que difícilmente puede afrontar los desafíos que se presentan en la práctica profesional. La reproducción animal, constituye a su vez una especialidad de fundamental importancia en el ejercicio veterinario, siendo una disciplina que se encuentra en constante avance y de amplia aplicación a todo nivel. Las nuevas tecnologías de la información y la comunicación (NTIC) permiten superar algunos problemas de la educación y especialmente de la educación continua, en la que el tiempo disponible y la distancia dificultan este proceso. Las NTIC pueden ser empleadas asincrónicamente y a distancia. Existen en la red algunas páginas web y redes sociales destinadas al intercambio de información de profesionales veterinarios, pero son pocas las enfocadas en la temática de la reproducción animal. La presente propuesta pedagógica incorpora elementos didácticos que integran contenidos textuales, gráficos, auditivos y visuales. Al enfoque tecnológico, se agregan diferentes enfoques teóricos del aprendizaje como el conductista, propiciando a su vez algunos matices constructivistas, dando la oportunidad al usuario de investigar y de ahondar por sí mismos en el conocimiento por medio de propuestas que requieran autonomía y desafíen la capacidad de resolver problemas, procurando también así un aprendizaje significativo. Se buscó al mismo tiempo generar un espacio de interactividad a fin de conectar y nuclear a veterinarios interesados en la temática a través de foros de discusión y asociando el Portal a diversas redes sociales y a la plataforma educativa perteneciente a la Facultad de Veterinaria (Uruguay). Se consideró de especial interés la presentación de mapas conceptuales sobre algunos temas a fin de ordenar y facilitar la comprensión. En suma, este Proyecto se orientó a desarrollar un Portal WEB educativo basado en las NTIC, asociado a un entorno virtual, destinado a veterinarios y estudiantes avanzados que necesitan actualizarse en reproducción animal

Calidad y capacidad fertilizante in vitro de semen de toros criollo uruguayo crioperservado en dos diluyentes comerciales y análisis de variabilidad genética

La Facultad de Veterinaria (Universidad de la República, Uruguay) cuenta con un banco de semen de unas 800 pajuelas de bovinos Criollo Uruguayo (BCU) de la reserva de San Miguel (~600 animales) congelado en dos diluyentes comerciales, Andromed® (A) sin yema de huevo y Triladyl® (T) con yema de huevo. El objetivo de esta tesis fue conocer la calidad y capacidad fecundante in vitro (FIV) del semen contenido en el banco y estudiar marcadores moleculares tipo polimorfismo de un solo nucleótido (SNP). Se realizaron 3 experimentos: Experimento 1: Semen congelado de 8 toros, diluido en T y A (16 muestras) fueron evaluados por sistema computarizado (CASA) inmediatamente post-descongelado: concentración, motilidad, cinética, morfología y se realizó test hiposmótico, repitiéndose motilidad y cinética a las 2h post-descongelado. Se aplicó el test-T para tiempo y diluyentes y percentiles para categorizar las 16 muestras. Experimento 2: 404 complejos ovocito-células del cúmulo (COC) calidad A, obtenidos de ovarios bovinos de frigorífico, fueron madurados en TCM-199 adicionado con 5% de suero fetal bovino (SFB) y hormonas, en gotas cubiertas con aceite mineral a 38,5ºC, 5% CO2 y humedad saturada; tras 22h en incubadora los COC se inseminaron con semen de 4 toros diluido en A y T, seleccionado por centrifugación en gradientes de Percoll® (90/45%) en Talp-Sperm. Se formaron gotas con Talp-Fert con 2x106spz/ml y se colocaron los COC en cocultivo por 18h. Los presuntos cigotos se denudaron y cultivaron en medio CR1aa con SFB (5%). Se evaluó clivaje (48h) y desarrollo embrionario (DE) al día 7. Los resultados de la FIV se analizaron mediante Chi-cuadrado. Experimento 3: consistió en el análisis de frecuencias de SNP, localizados en genes (IGF1, IGFR1, SEPT12, CCT6A, 7SK, HS6ST2, SFMBT1, SOX5) relacionados con fertilidad en los 26 toros de la reserva. El genotipado se realizó mediante análisis automatizado (Axiom™ Bovine Genotyping v3 Array), de muestras de ADN obtenidas a partir de folículo piloso. Las muestras de semen estudiadas presentan una calidad espermática cuestionable, dados sus valores de motilidad progresiva (MP), solo 10 de las 16 muestras, contienen una dosis inseminante adecuada, con resultados similares de motilidad y HOST para ambos diluyentes (A y T). Uno de los toros presentó exceso en anomalías espermáticas. No hubo diferencias significativas en el clivaje ni en el DE entre diluyentes. Se encontraron diferencias significativas en clivaje solamente entre dos de los toros (p=0.008) pero no entre ellos respecto a los otros dos toros. No hubo diferencias significativas en DE. En la población estudiada (26 toros) se identificaron 26 polimorfismos tipo SNPs en 6 genes vinculados a fertilidad (IGF1R, SEPT12, CCT6A, HS6ST2, SFMBT1 y SOX5) de los cuales el 54% resultaron fijados, esto podría deberse a que nos encontramos con una población cerrada desde el punto de vista genético con características raciales propias. El semen estudiado podría ser utilizado para inseminación artificial u otras biotecnologías reproductivas (no comercialmente) en el marco de los esfuerzos conservacionales de la raza, salvo el semen de uno de los toros, que presentó problemas graves en la morfología espermática

Effect of presence of corpora lutea on cumulus expansion of in vitro matured bovine oocytes selected by trypan blue and brilliant cresyl blue tests

Trypan Blue (TB) and Brilliant Cresyl Blue (BCB) are used to select and determine viability and competence of oocytes, however, the effects of corpora lutea on cumulus expansion during in vitro maturation are still undetermined. Cumulus-oocytes complexes (COCs) from ovaries with ipsilateral (ICL), contralateral (CCL) and without corpora lutea in either ovary (OCL) were selected by visual examination, TB and BCB staining, and matured in vitro to evaluate cumulus expansion. The overall percentage of visually selected COCs was similar in ICL, CCL and OCL (P > 0.05). Proportions of live and mature COCs were similar in all groups (P > 0.05). The overall percentage of BCB+ COCs was 70.1%. BCB+ ICL COCs had less cumulus expansion (60.5%) than BCB+ CCL and OCL COCs (75.7 and 71.4%, respectively; P < 0.01). BCB− ICL COCs had less cumulus expansion (20.0%) than BCB− CCL and OCL (39.7 and 46.1%; P < 0.01). BCB+ CCL and OCL COCs showed the highest cumulus expansion index (P < 0.01). Presence of corpus luteum in the ovary affects negatively cumulus cells expansion. TB and BCB staining facilitate the selection of oocytes with higher degrees of cumulus expansion

Qualidade do fertilizante in vitro e capacidade do sêmen de touros Crioulos uruguaios criopreservado em dois diluentes comerciais

We evaluated the quality and in vitro fertility (IVF) of semen from the Uruguayan Criollo cattle bank of the Veterinary Faculty. We thawed semen from 8 bulls (0850, 0853, 1026, 1035, 3733, 5834, 9701, 9714), diluted in Triladyl® (T) and Andromed® (A) (with/without egg yolk) and evaluated by CASA: concentration, motility, kinetics, morphology and performed a hyposmotic test, after 2h we repeated motility and kinetics. T-test (5% significance) for time and diluents was applied and percentiles to categorize the 16 samples. The best samples were: T-9714, T-1026, A-9701, A-9714, T-0853, T-9701; except bull 0850 (A and T), the others were acceptable. For IVF we aspirated 404 A-quality oocyte-cumulus complexes (OCC) from bovine ovaries from a slaughterhouse, washed and matured them in TCM with 5% BCS and hormones, in 100μl drops, covered with mineral oil, in incubator (38.5ºC, 5% CO2 and 95% humidity), 22h. 8 groups of OCC were inseminated with selected semen: 1026, 3733, 5834 and 9701 (A and T), which was capacitated by centrifugation in Percoll® gradients (90/45%), in Talp-Sperm and adjusted with Talp-Fert to 2x106sperm/ml, drops were formed, covered with mineral oil and placed the OCC inside, 18h. The zygotes were denuded and cultured in CR1aa with BCS (5%). We evaluated cleavage (48h) and embryo development (ED) on day 7 (IETS standards). Results were analyzed with Chi square (5% significance). There were no significant differences in cleavage between diluents (A:143/207; T:128/197), nor ED (69 and 68 respectively) (p&gt;0.05). There were no significant differences in cleavage between the 1026 (73/109) bull's semen and 9701 (68/101) (p&gt;0.05), nor between them and 5834 (77/102) and 3733 (53/92); although, 5834 had higher cleavage rate than 3733 (p=0.008). There were no significant differences in ED between bulls (p&gt;0.05). This work was important to assess the quality and fertility of the semen bank.Evaluamos la calidad y capacidad fecundante in vitro (FIV) de semen de un banco de bovinos Criollo Uruguayo. Semen de 8 toros, diluido en Triladyl® (T) y Andromed® (A) (con/sin yema de huevo), se evaluó por CASA: concentración, motilidad, cinética, morfología y test hiposmótico. A las 2 horas se repitió motilidad y cinética. Se aplicó el test-T para tiempo y diluyentes y percentiles para categorizar los 16 grupos. Cuatrocientos cuatro complejos ovocito-células del cúmulo (COC) de calidad A, obtenidos de un frigorífico, fueron madurados en TCM con 5% de suero fetal bovino (SFB) y hormonas, en gotas, cubiertas con aceite mineral a 38,5ºC, 5% CO2 y humedad saturada; tras 22h se inseminaron con semen de 4 toros diluidos en A y T, seleccionado por centrifugación en gradientes de Percoll® (90/45%), en Talp-Sperm. Se formaron gotas con Talp-Fert con 2x106spz/ml y se coincubaron con los COC por 18h. Los presuntos cigotos se denudaron y cultivaron en CR1aa con SFB (5%). Se evaluó clivaje (48h) y desarrollo embrionario (DE) al día 7. Los resultados de la FIV se analizaron mediante Chi-cuadrado. No hubo diferencias significativas en el clivaje (A:143/207; T:128/197) ni en el DE (33.33 y 34.52% respectivamente) entre diluyentes. No hubo diferencias significativas en clivaje entre el semen del toro 1026 (73/109) y 9701 (68/101), ni entre ellos respecto a los toros 5834 (77/102) y 3733 (53/92), el 5834 tuvo mayor clivaje respecto al 3733 (p=0.008). No hubo diferencias significativas en DE entre toros. Salvo el toro 0850 (A y T), los demás resultaron aceptables y fueron fértiles en la prueba in vitro. Este trabajo estudió la calidad del semen del banco y su capacidad fertilizante in vitro, resultando adecuados ambos diluyentes. Salvo las muestras de semen de un toro, el resto podrían ser usadas para inseminación artificial u otras biotecnologías.Avaliamos a qualidade e a capacidade de fertilização in vitro (FIV) do sêmen de um banco uruguaio de bovinos crioulos. O sêmen de 8 touros, diluído em Triladyl® (T) e Andromed® (A) (com / sem gema de ovo), foi avaliado pela CASA: concentração, motilidade, cinética, morfologia e teste hiposmótico. Em 2 horas, a motilidade e a cinética foram repetidas. O teste T foi aplicado para tempo e diluentes e percentis para categorizar os 16 grupos. Quatrocentos e quatro complexos cúmulos-ovócitos (COC) de qualidade A, obtidos em geladeira, foram maturados em TCM com 5% de soro fetal bovino (SFB) e hormônios, em gotas, cobertos com óleo mineral a 38,5ºC, 5% CO2 e umidade saturada; após 22h foram inseminados com sêmen de 4 touros diluídos em A e T, selecionados por centrifugação em gradientes de Percoll® (90/45%), em Talp-Sperm. As gotas foram formadas com Talp-Fert a 2x106spz / ml e foram coincubadas com o COC por 18h. Os presumíveis zigotos foram desnudados e cultivados em CR1aa com SFB (5%). A clivagem (48h) e o desenvolvimento embrionário (SD) foram avaliados no dia 7. Os resultados da FIV foram analisados ​​usando Qui-quadrado. Não houve diferenças significativas na clivagem (A: 143/207; T: 128/197) ou no DE (33,33 e 34,52% respectivamente) entre os diluentes. Não houve diferenças significativas na clivagem entre o sêmen dos touros 1026 (73/109) e 9701 (68/101), nem entre eles em relação aos touros 5834 (77/102) e 3733 (53/92), 5834 tiveram maior clivagem em relação a 3733 (p = 0,008). Não houve diferenças significativas no DP entre os touros. Com exceção do touro 0850 (A e T), os demais foram aceitáveis ​​e férteis no teste in vitro. Este trabalho estudou a qualidade do sêmen do banco e sua capacidade de fertilização in vitro, sendo os dois diluentes adequados.&nbsp