Rapid screening of statin-producing filamentous fungi

Hypercholesterolemia, an important risk factor in coronary artery disease, is nowadays commonly treated with statins. They are a class of fungal secondary metabolites that can inhibit the de novo synthesis of endogenous cholesterol by means of the competitive inhibition of HMG-CoA reductase. From 14-day-old fungal cultures cultivated at 20°C on lactose-yeast extract agar medium, statins were extracted with ethyl acetate at 50°C for 20 min with agitation. Two different methods were applied: a) Glass beads disruption: mycelium-covered agar plugs were transferred to a test tube and subsequently treated with glass beads and ethyl acetate. b) Freeze-thawing: mycelium-covered agar plugs were freezed overnight and, after thawing, supernatant was recovered by centrifugation and mixed with an equal volume of ethyl acetate. Presence of statins in the organic phase was simultaneously evaluated by both thin layer chromatography (TLC) and a bioassay based on the yeast growth-inhibitory effect (either with Candida albicans or Saccharomyces cerevisiae. For bioassay, actively growing yeasts were included in molten YNB agar medium, poured into plates and get solidified. Statin extracts (25 ul were poured into 6mm-diam. wells and compared to standard statins. After incubation at 26°, inhibition haloes formation was assessed. Results according to both methodologies revealed that 23 isolates from 230 filamentous fungi collected from Las Yungas (Tucumán, Argentina) would be able to produce bioactive compounds compatible with statins. Applied protocols showed to be valid at the time of selecting statin-producers, allowing high sensitivity and readily available results in association with the ease of sample processing.Fil: Cabral, Maria Eugenia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Castellanos, Lucia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Siñeriz, Faustino. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Fariña, Julia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaSociety for Industrial Microbiology Annual Meeting and ExhibitionDenverEstados UnidosSociety for Industrial Microbiolog

Screening of decolourizing yeasts with dye assimilation ability from Las Yungas rainforest

Environmental pollution by textile-dye containing wastewaters is a matter of worldwide concern. Yeasts bioremediation, a poorly explored and less exploited methodology, stands out as an interesting approach supported on their metabolic diversity and high growth rates. In this work, a screening protocol based on dye tolerance and dye assimilation ability on solid media was performed with a 2000 mg/L dye mixture. Thirty-nine yeast isolates from “Laurel del Monte” underlying soils from “Las Yungas” (Tucumán, Argentina) were obtained. Based on decolourization haloes and colony dyeing, 15 isolates showed the highest decolourization ability on agar plates containing Vilmafix® Blue RR-BB, Vilmafix® Red 7B-HE, Vilmafix® Black B-V and Vilmafix® Yellow 4R-HE, either alone or as a mixture. Screening on agar plates with synthetic media supplemented with each dye as sole C or N source, led to the selection of 10 isolates. Microsatellite RAPD analysis enabled the discrimination of these isolates into six groups. Following tests consisted on the analysis of growth and decolourization kinetic profiles, along with the production of Manganese peroxidase, laccase and tyrosinase activities in dye-supplemented (200 mg/L) liquid media. Time-dependent supernatant spectra, growth curves and enzymatic activities led to the selection of the two most promising isolates for future experimentsFil: Martorell, María Martha. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Pajot, Hipolito Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Fariña, Julia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Castellanos, Lucia Ines. Universidad Nacional de Tucumán; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaXLVI Reunión Anual Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología MolecularPuerto MadrynArgentinaSociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecula

Cr(VI) reduction by cell-free extracts of Pichia jadinii and Pichia anomala isolated from textile-dye factory effluents

Chromium-resistant yeasts isolated from contaminated environments can be used to reduce toxic Cr(VI). This study assessed in vitro reduction of hexavalent chromium using crude chromate reductase (CChR) of Pichia jadinii M9 and Pichia anomala M10, two yeasts isolated from a textile-dye factory effluent. CChRs were characterized based on optimal temperature, pH, use of electron donors, metal ions and initial Cr(VI) concentration in the reaction mixture. Both CChRs showed an increase in Cr(VI) reductase activity with addition of NAD(P)H as electron donor and were highly inhibited by Hg 2+ and Mn 2+. The CChR from P. jadinii M9 showed the highest chromate reductase activity at 60 °C and pH 6.0 in the presence of Cu 2+ or Na +, while P. anomala M10 CChR had the maximum activity at 50 °C and pH 7.0 in presence of Cu 2+. Initial Cr(VI) concentrations of 1.3 and 1.7 mM for CChRs of P. jadinii M9 and P. anomala M10 respectively were inhibitory.Fil: Martorell, María Martha. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Fernandez, Pablo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Fariña, Julia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Castellanos, Lucia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; Argentin

Cost-effective optimized scleroglucan production by Sclerotium rolfsii ATCC 201126 at bioreactor scale. A quantity-quality assessment

Exopolysaccharide (EPS) secretion by Sclerotium rolfsii ATCC 201126 in submerged cultures, already identified as high-osmolarity responsive, was assessed by reducing C-source without compromising EPS yields. A designed medium with 80 g sucrose L−1 (MOPT80) was tested at 3 L-bioreactor scale at different temperature, agitation, aeration and pH (uncontrolled vs. controlled) values. Optimal operative conditions (200 rpm, 28 °C, 0.5 vvm and initial pH -pHi- 4.5) were validated, as well as the possibility to work at pHi 5.5 to reduce biomass production. Purified EPSs produced in MOPT80 at optimal and other valid operative conditions exhibited refined grade (<1 % proteins and ash, 3–4 % reducing sugars, 87–99 % total sugars). EPS purity, MW and rheological parameters led to discourage pH controlled at 4.5. Relatively constant MW (6–8 × 106 Da) and outstanding viscosifying ability were found. Polyphasic EPS analysis (titre, purity, macromolecular features and rheological fitness) would support to properly select production conditions.Fil: Valdez, Alejandra Leonor. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Delgado, Osvaldo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Fariña, Julia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; Argentin

Sclerotium rolfsii scleroglucan: effects of thermal, alkaline and ultrasonic degradation

Scleroglucan is a neutral water-soluble β-1,3-β-1,6-glucan produced by Sclerotium rolfsii ATCC 201126 whose triple helical conformation can be turned into single coiled chains at high pH or temperature and/or in DMSO. Effects of thermal (65, 95 and 150ºC), alkaline (0·01-0·2 N NaOH) and ultrasonic (1, 5 and 10 min with 20% amplitude) treatments onto the solution properties of S. rolfsii scleroglucans (EPS I, EPS II and EPSi at 0·2% w/v) were comparatively evaluated vs. commercial scleroglucan (LSCL). The more drastic assayed conditions (150ºC, 0·2 N NaOH and 10-min ultrasonication) significantly modified the rheological behavior of scleroglucan solutions, with an abrupt decline in apparent viscosity and the loss of pseudoplastic behavior. EPS I was identified as the less sensitive polymer to thermal degradation, whilst EPSi and LSCL were particularly susceptible to alkaline treatment but the more stable ones against ultrasonication. Scleroglucan samples were all denatured (triple helix -> single brand transition) at 150°C and 0·2 N NaOH. Additionally, size exclusion chromatographic (SEC) profiles of control and treated polymer samples revealed aggregates, single chains and triple helices distinctive zones in accordance with the applied treatment.Fil: Viñarta, Silvana Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Castellanos, Lucia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Fariña, Julia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaXLVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología MolecularPotrero de los FunesArgentinaSociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecula

Aspergillus terreusstrain improvement for enhanced lovastatin production

Cholesterol plays a vital role in body metabolism and membrane transport, and acts as precursor for the synthesis of several key biomolecules. Nevertheless, changes in cholesterol level lead to cardiovascular disorders, like atherosclerosis and hypercholesterolemia, which are currently the maincauses of death. This is why controlling cholesterol by inhibition of its biosynthesis is a promising approach. Cholesterol is synthetized from acetyl-CoA through a complex pathway, where the rate-limiting step is the conversion of HMG-CoA to mevalonate, catalyzed by HMG-CoA reductase.This key enzyme is selectively and competitively inhibited by lovastatin, a fungal secondary metaboliteused as a hypocholesterolemic which can therefore reduce the risk of cardiovascular diseases.Fil: Babot, Jaime Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Caro, Florencia Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Delgado, Osvaldo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones y Transferencia de Catamarca. Universidad Nacional de Catamarca. Centro de Investigaciones y Transferencia de Catamarca; Argentina. Universidad Nacional de Catamarca. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Fariña, Julia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaXI Congreso Argentino de Microbiología GeneralCórdobaArgentinaSociedad Argentina de Microbiología Genera

Aislamiento y selección de hongos filamentosos con actividad decolorante y antimicrobiana

Las Yungas, eco-región conocida también en la Argentina como Selva Tucumano-Oranense son selvas de montaña que se extienden desde Venezuela hasta el noroeste argentino. Constituyen junto a la selva misionera uno de los ecosistemas con mayor biodiversidad de Argentina y uno de los ecosistemas mas amenazados del mundo. Sin embargo, existen pocos reportes acerca del potencial biotecnológico de la microbiota de esta zona. Los hongos filamentosos ofrecen grandes ventajas como sistemas productores de enzimas y otros metabolitos por su elevada capacidad biosintética y secretoria, gran versatilidad y alto rendimiento, aún cuando se empleen sustratos de bajo costo y estrategias simples de fermentación. Considerando dichas ventajas, se estudió la capacidad de diferentes aislamientos fúngicos de la región de Las Yungas para biodecolorar colorantes textiles reactivos así como también por su actividad antimicrobiana frente a patógenos de interés. Las muestras fueron tomadas de la zona pedemontana de Las Yungas (Tucumán, Argentina) en Diciembre de 2004. A partir de diferentes tipos de muestras (suelos, aguas, materia orgánica en descomposición, cuerpos de fructificación, etc.) colectadas asépticamente, y empleando técnicas de dilución cuando fue necesario, se realizaron cultivos en medio agarizado para el aislamiento de colonias individuales. Alícuotas de las diluciones, fragmentos de micelio o cuerpos de fructificación fueron transferidos a medio sólido MYSA e incubados a 20ºC, seguido de reaislamiento, hasta lograr el crecimiento de colonias puras. Se aislaron 280 hongos autóctonos de los cuales, 3 fueron seleccionados por su capacidad para biodecolorar Vilmafix Blue RR-BB >200 ppm, tanto en placa como en medio líquido, y 5 por su capacidad para producir compuestos antimicrobianos de amplio espectro, activos contra: Shigella flexneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus ATCC 25923 y 29213, Staphylococcus epidermidis, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis A1, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Proteus vulgaris, Salmonella newport, Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium, Listeria monocytogenes, Escherichia coli ATCC 35218 y E. coli O157:H7. Para los hongos con capacidad decolorante, se detectó actividad lacasa, peroxidasa, manganeso peroxidasa y lignina peroxidasa en sobrenadantes de cultivos en geles nativos de poliacrilamida (ND-PAGE), así como también la producción de sideróforos que estarían involucrados en la biodecoloración. Los aislamientos fueron caracterizados e identificados mediante la secuenciación del dominio D1/D2 del ADNr 26S y genes de citocromo oxidasa. Los resultados obtenidos nos permiten aseverar que los hongos filamentosos aislados podrían emplearse para el tratamiento de efluentes textiles contaminados con colorantes, principalmente debido al perfil ligninolítico de los mismos. Por otro lado el aislamiento de hongos con capacidad para producir antimicrobianos activos contra diversos patógenos reviste particular importancia considerando la emergencia permanente de organismos resistentes a los antibióticos ya conocidos. Esto los convierte en potenciales productores a ser evaluados en la industria farmacéutica.Fil: Godoy, I.. Universidad Tecnológica Nacional; ArgentinaFil: Fariña, Julia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Delgado, Osvaldo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaIV Congreso Argentino De Microbiología GeneralCiudad Autónoma de Buenos AriesArgentinaSociedad Argentina de Microbiología Genera

Culture Medium Factorial Design Optimization for Fibrinolytic Enzymes Production by Bionectria sp.

Thrombotic diseases can be clinically treated with fibrinolytic enzymes and many attempts have been made at laboratory level to increase fibrinolytic enzymes production from microbial sources and to reduce the process cost, including culture medium design, optimization of environmental conditions, and over expression with genetically modified strains. In this contribution we present the optimization of culture medium composition and incubation temperature for fibrinolytic enzyme production by Bionectria sp., a selected fungal strain from Las Yungas (Tucumán). Optimization was carried out at Erlenmeyer scale (100-mL working volume) via factorial design methodology. All trials included a common mineral base (%, w/v: NaCl 0.2, KH2PO4 0.05, MgSO4·7H2O 0.05). According to four factorial designs it could be demonstrated the convenience of using soy peptone as N-source, glucose as C-source, and the possibility to eliminate starch, meat peptone and meat extract from original medium composition, whilst 25°C was selected as the optimal incubation temperature. Results showed that culture medium could be successfully optimized by factorial design, achieving a reduction in the production process costs by means of a decrease in culture medium components, the improvement in culture broth rheology, mycelial morphology and mass/energy transfer, and the subsequent two-fold enhancement in productivity.Fil: Arnau, Victor Gonzalo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Rovati, Jose Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Figueroa, L. I. C.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Fariña, Julia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaXLVI Reunión Anual Sociedad Argentina de Investigaciones Bioquímicas y MolecularesPuerto Madryn, Chubut, ArgentinaArgentinaSociedad Argentina de Investigaciones Bioquímicas y Moleculare

Actividad reductora de Cr(VI) en extractos libres de células de levaduras aisladas de efluentes industriales

Hasta el presente no hay reportes sobre caracterización de actividad cromato reductasa en levaduras. La misma fue ensayada en extractos libres de células (ELC), de cultivos de Pichia jadinii y Pichia anomala crecidos en presencia de Cr(VI) 1 mM. La actividad máxima en ELC de P. jadinii fue en buffer Fosfato-Citrato pH 6 y a 53ºC. La actividad enzimática se incrementó en presencia de Mn2+ y fue inhibida por Hg2+. En el caso de P. anomala la actividad fue máxima a una temperatura óptima de 35ºC, en buffer Fosfato-Citrato pH 7. En este caso, el ión Cu2+ estimuló dicha actividad mientras que Mn2+ y Hg2+ resultaron inhibitorios. Para ambas cepas de levaduras el NADH actuaría como cofactor de la actividad cromato reductasa. Estudios de este tipo representan un importante avance para el desarrollo de futuros procesos de biorremediación con levaduras.Fil: Martorell, María Martha. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Fernandez, Pablo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaFil: Castellanos, Lucia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia; ArgentinaFil: Fariña, Julia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos; ArgentinaTercera Jornada de Jovenes Investigadores de la Universidad Nacional de TucumánSan Miguel de TucumánArgentinaUniversidad Nacional de TucumánAsociación de Universidades Grupo de Montevide