Air drying technique for cytogenetic studies in freshwater planarians (Platyhelminthes)

Fil: Margaría, Cecilia Beatriz. Facultad de Ciencias Naturales y Museo; Universidad Nacional de La PlataFil: Dulout, F.N.. Ctro. Invest. Genet. Basica y Apl.; Facultad de Ciencias Veterinarias; Universidad Nacional de La Plat

Contribution to the validation of the anaphase-telophase test: aneugenic and clastogenic effects of cadmium sulfate, potassium dichromate and nickel chloride in Chinese hamster ovary cells

There is increasing evidence that aneuploidy during mitosis may be a factor in the etiology of somatic malignancy. The analysis of alterations in anaphase-telophase of mitosis is a useful test for evaluating the aneuploidogenic and clastogenic ability of chemicals. Several metals have been found to be carcinogenic to humans and animals. However, the underlying mechanisms remain unclear. In the present study the aneugenic and clastogenic abilities of cadmium sulfate, potassium dichromate and nickel chloride were analyzed using the anaphase-telophase test. Chinese hamster ovary (CHO) cells cultured for two cycles were treated with the desired compound for 8 h before cell harvesting. The frequency of cells with chromatin bridges, lagging chromosomes and lagging chromosomal fragments was scored. The mitotic index was determined by counting the number of mitotic cells per 1,000 cells on each coverslip and was expressed as a percentage of the number of mitotic plates. Statistical comparisons were done using the "G" method. Correlation and regression analyses were performed to evaluate variations of the mitotic index. Chromium and cadmium were clastogenic and aneugenic and increased the frequencies of the three types of aberrations scored; nickel had only aneugenic activity because it increased the frequency of lagging chromosomes. These results indicate that the anaphase-telophase test is sufficiently sensitive to detect dose-response relationships that can distinguish clastogenic and/or aneugenic activities and that the results obtained using the anaphase-telophase test were similar to those obtained by chromosome counting.As evidências de que a aneuploidia durante a mitose pode ser um fator na etiologia de malignidades somáticas estão cada vez mais fortes. A análise de alterações em anáfase-telófase da mitose é um teste útil para a avaliação da capacidade aneuploidogênica e clastogênica de substâncias químicas. Vários metais têm sido identificados como carcinogênicos para o homem e para animais. Contudo, os mecanismos de ação permanecem obscuros. No presente estudo, a capacidade aneugênica e clastogênica do sulfato de cádmio, do dicromato de potássio e do cloreto de níquel foi analisada usando o teste anáfase-telófase. Células do ovário do hamster chinês cultivadas por dois ciclos foram tratadas com o composto desejado por 8 horas antes da colheita das células. Foram quantificadas as freqüências de células com pontes de cromatina, lagging cromossomos e lagging fragmentos cromossômicos. O índice mitótico foi determinado pela contagem do número de células em mitose por 1000 células em cada lamínula e foi expresso como uma porcentagem do número de placas mitóticas. A análise estatística foi feita usando o método "G". Análises de correlação e de regressão foram realizadas para avaliar as variações do índice mitótico. O crômio e o cádmio foram clastogênicos e aneugênicos e aumentaram as freqüências dos três tipos de aberrações avaliadas; o níquel teve apenas atividade aneugênica porque ele aumentou a freqüência de lagging cromossomos. Estes resultados indicam que o teste anáfase-telófase é sensível o suficiente para detectar as relações dependentes da dose que podem distinguir as atividades clastogênicas e/ou aneugênicas e que os resultados obtidos usando o teste anáfase-telófase foram semelhantes aos obtidos pela contagem cromossômica