Regulación de la expresion de genes para poliamino oxidasa y su efecto sobre el contenido de poliaminas en bayas de Vitis vinifera var. Carmenere

73 p.Durante el desarrollo frutal de bayas Vitis vinifera var. Carménère, y producto de un evento de partenocarpia, se generan bayas semilladas y no semilladas dentro de un mismo racimo. Estas últimas, perjudican seriamente la calidad organoléptica del vino puesto que contienen bajos niveles de hexosas, altos niveles de pirazinas, taninos de baja condensación y, muy particularmente, elevadas concentraciones de espermidina, una amina biogénica. La acumulación de este compuesto y la inhibición de la síntesis de la hormona vegetal etileno, son consecuencia de un desbalance en el metabolismo de poliaminas lo que otorga un rol central a estos metabolitos en la manifestación del fenómeno partenocárpico. Las aminas biogénicas son compuestos catalogados como de riesgo para la salud humana, razón por la que su presencia en vinos es crecientemente monitoreada. Una alternativa para minimizar la presencia de este compuesto en vinos es aumentar su catabolización en los frutos, previo a su procesamiento. La degradación de ésta poliamina es realizada por la enzima PAO en una reacción que produce diaminopropano y peróxido de hidrogeno. Es por esto que como objetivo general se plantea: Establecer los mecanismos involucrados en la regulación de la expresión de los genes de la enzima poliamino oxidasa (PAO) en vides con el fin de diseñar estrategias para la modulación de poliaminas en bayas de Vitis vinifera var. Carménère. Para ello es preciso aislar y caracterizar los promotores de los genes para PAO, mediante amplificación por PCR y posterior secuenciación nucleotídica , a fin de identificar elementos regulatorios asociados a vías específicas de transducción de señales. Su posterior clonamiento y evaluación en sistemas modelo, permitirán establecer si tal alternativa es eficiente para modular los niveles de espermidina y por consecuencia provocar un equilibrio con la síntesis de etilen

Análisis de la expresión de genes que codifican para proteínas de super familia LHC y su relación con la tolerancia estrés foto-oxidativos en la especie nativa Solarum chivence

91 p.La exposición simultanea a las bajas temperaturas y alta intensidad lumínica causa la fotoinhibicióndel aparato fotosintético, fen6meno que afecta la productividad y la distribuci6n geográfica de los cultivos. En varias especies de solanaceas, la tolerancia a este tipo de estrés se ha asociado con un cierto estimulo en el NPQ, lo que implica una reorganizaci6n en las proteínas pertenecientes a los complejos colectores de luz (LHC). Para evaluar el rendimiento fotosintetico de Solanum lycopersicum y Solanum chilense y evaluar la regulaci6n transcripcional de genes que codifican para proteins del LHC y su participaci6n en el NPQ, plantas de ambas especies fueron expuestas a 4° C y 1300 gmol m-2 s-1 y se realizaron evaluaciones sobre la peroxidaci6n lipidica, la eficiencia fotosintetica y los cambios en los pigmentos del ciclo de las xant6filas. Los resultados presentados indican que S. chilense, al utilizar el exceso de energía de excitacien en el proceso fotoquimico, segue lo indicado por los parámetros qP y ETR, posee una mayor tolerancia a la foto-inhibicien que S. lycopersicum. La contribución de las proteinas LHC no estaría relacionada con disipar el exceso de energia en forma de calor (NPQ), sino más Bien con la función antioxidante atribuida a lazeaxantina, como se indica por la cantidad de lípidos peroxidados observados en S. chilense. Sesugiere que la expresión diferencial del gen Lhcal, con la consiguiente acumulación de proteinas Lhcal, proveeria de un mayor numero de sitios de union para zeaxantina lo que podria contribuir a la mayor tolerancia al estres foto-oxidativo por parte de S. chilense. La sobreexpresion del gen Lhcal en plantas de S. lycopersicum y Nicotiana tabacum contribuyo a mejorar la tolerancia al estres fotooxidativo de ambas especies cuando fueron expuestas a condiciones de bajas temperaturas y alta intensidad luminica, observandose un aumento significativamente mayor de zeaxantina en las plantas transformadas. El rol protector de la zeaxantina estaria involucrado en la protección antioxidativa de la membrana tilacoidal, previniendo el desarrollo del estres fotooxidativo y la consecuente peroxidación de lipidos. Bajo estas condiciones las plantas transformadas fueron capaces de mantener el proceso fotoquímico como el principal atenuador del exceso de energía de excitación absorbida./ ABSTRACT:Simultaneous exposition to low temperature and high light radiation cause photoinhibition of photosynthetic apparatus, affecting the productivity and geographical distribution of agricultural crops. In several Solanaceous species, tolerance to low temperature stress in combination with high light has been associated with some stimulation in NPQ, which involved reorganization in light-harvesting complex (LHC)proteins. To study photosynthetic performance in S. lycopersicum and S. chilense, and toinvestigate transcriptional regulation of genes encoding LHC proteins and their involvementin the NPQ, plants of both species were exposed to low temperature (4°C) and high lightradiation (1300 gmol m-2 s-'). Lipid peroxidation, photochemical efficiency and changes in xanthophyll cycle pigments were measured. The results presented here indicate that S. chilense showed higher tolerance to photoinhibition than S. lycopersicum under lowtemperature and high light conditions, increasing light-energy consumption in photochemical processes by increasing photosynthetic capacity as indicated by qP and ETR parameters. The contribution of light-harvesting chlorophyll a/b binding (LHC) protein was not related to dissipate excess excitation energy as heat (NPQ), but rather with the antioxidant function attributable to zeaxanthin as indicated by the amount of peroxidized lipids in S. chilense. We suggest that the differential expression of Lhcal transcripts, with zeaxanthin binding sites could contribute to the greater tolerance of S. chilense to photoxidative stress. The over-expression of Lhcal gen in S. lycopersicum and N. tabacum improved the photo-oxidative stress tolerance of both species under high light intensities and chilling temperature, with a significant increase of zeaxanthin in transformed plants. It is important to know that the over-expression of Lhcal its not involved in the zeaxanthin synthesis but rather provide binding sites for the newly formed zeaxanthin under stress conditions. The protective role of zeaxanthin could be involved in antioxidant protection of the thylakoid membrane, preventing the development of photooxidative damage and subsequent lipid peroxidation. The transformed plants were able to keep the photochemical process as quencher of excess excitation energy absorbed

Caracterizacion de un gen de Melandriun album expresado en etapas tardias del desarrollo de los organos reproductores masculinos

62 p.El desarrollo floral es el resultado de un complejo patrón de expresión génica diferencial. La generación de órganos específicos en cada verticilo floral esta bajo el control de los denominados genes de identidad de Órganos. Tales genes homeoticos ejercen su actividad, codificando para factores de trascripción específicos. En especies hermafroditas, los estambres se desarrollan a nivel del tercer verticilo floral, en tanto que la diferenciación de carpelos tiene Lugar en el cuarto verticilo. El análisis de la genética molecular de cada uno de los mencionados procesos, se ha visto dificultada por la sobreposición de los programas organogenicos masculino y femenino. En este contexto, la especie dioica Melandrium album (Silene latifolia), es el modelo de elección para tales estudios. Debido a la presencia de los cromosomas sexuales X e Y, existen individuos macho (22A,XY) y hembra (22A,XX), los que producen flores estaminadas o pistiladas, respectivamente. Hemos utilizado plantas macho de Melandrium album tipo silvestre, para estudiar el proceso de organogenesis de estambres y anteras. El objetivo de este análisis ha sido la identificación, aislamiento de genes diferencialmente expresados durante estadios definidos del programa de desarrollo masculino. La caracterización de sus regiones promotoras es un requisito esencial para la cabal comprensión de los mecanismos involucrados en el control homeótico del proceso de diferenciación de los órganos reproductores. El perfil transcripcional de flores masculinas, en estados premeioticos y postmeióticos, ha sido analizado mediante "differential display" de mRNAs. Elio ha posibilitado la identificación de varios transcritos específicos para cada estadio y el aislamiento de los cDNAs correspondientes. El cDNA K17, proveniente de un gen expresado en estadios postmeióticos del desarrollo de estambres y anteras, ha sido el sustrato de este estudio. La secuencia nucleotidica de tal cDNA ha sido establecida. Mediante su comparación con las bases de datos Genbank y EMBL, se detectó un alto grado de homologia (98%) con los cDNAs CCLS37.2 y MEN-5. Coincidentemente, el cDNA CCLS37.2 proviene de un gen expresado en etapas postmeioticas del desarrollo masculino de Melandrium album, en tanto el cDNA Men-5 corresponde a un gen cuya expresión es inducida en la masculinización de flores hembra de Melandrium album, por infección con el bongo Ustylago violacea. Todo ello indica que un mismo gen ha sido identificado y aislado mediante tres enfoques experimentales diferentes. Este gen ha sido denominado MROS37.2 El análisis de la secuencia nucleotidica del gen MROS37.2 ha revelado la presencia de un marco de lectura abierto, el que codifica para una proteína de 267 aminoácidos. La estructura primaria de esta proteína ha sido comparada con la base de datos PIR Data Bank, sin encontrarse homologia significativa con otras proteínas previamente identificadas. El perfil de hidrofobicidad realizado con la secuencia de esta proteína, indica que ella posee una naturaleza hidrofóbica. Análisis computacionales predicen la existencia de un dominio transmembrana localizado hacia el extremo N-terminal del polipeptido, sugiriendo que se trata de una proteína integral de membrana. La aplicación de la técnica SSP-PCR, usando un partidor complementario al extremo 5' de la región codificadora, ha permitido aislar un fragmento de aproximadamente 700 pb, el que contiene la región promotora putativa del gen MROS37.2. Este fragmento ha sido clonado en el vector pGEM-T y parcialmente secuenciado. El análisis de la secuencia obtenida ha revelado de varios elementos regulatorios putativos. De especial interés es la detección de una secuencia muy similar al denominado G-Box, elemento regulatorio detectado en otros genes expresados a nivel del tejido floral. Experimentos de deleciones y mutagenesis de estas secuencias, deben ser realizados para dilucidar si estos elementos poseen un rol efectivo en la expresión diferencial de genes durante el desarrollo de estambres y anteras

Identificacion y caracterizacion de la region promotora de un gen expresado en etapas tempranas del desarrollo de los organos reproductores masculinos en flores de Melandrium album

67 p.La planta Melandrium album (Silene latifolia), es una especie dioica en la que los individuos producen flores estaminadas o pistiladas. Este dimortismo sexual esta asociado a la presencia o ausencia del cromosoma sexual Y, en forma análoga a lo observado en mamíferos. Puesto que en esta especie, los programas de organogesis masculino y femenino están claramente disectados, ella es el modelo adecuado para analizar a nivel molecular el programa de desarrollo de las estructuras masculinas de la flor, en ausencia de los eventos implicados en la diferenciación femenina. En especies hemafroditas, el desarrollo de los órganos reproductores sexuales masculinos ocurre a nivel del tercer verticilo floral. La correcta diferenciación de estambres y anteras en este tejido esta bajo la modulación de los denominados genes de identidad de órganos. Tales genes han sido identificados y caracterizados, determinándose que codifican para factores de transcripción específicos, las proteínas MADS. Tales factores reconocen secuencias blanco especificas en los genes bajo su control y actúan en el desarrollo de las estructuras florales, de acuerdo a lo que se ha denominado el modelo ABC. Genes de identidad de órganos, ortólogos a los identificados en plantas hermafroditas, han sido también identificados en M album, sugiriendo un mecanismo regulatorio similar al modelo ABC. Sin embargo, ello no ha sido confirmado aún, por cuanto no se han aislado genes blanco para las proteínas MADS en esta especie. El objetivo de esta tesis ha sido el aislamiento y caracterizaci6n de la region promotora de un gen expresado en etapas muy tempranas del desarrollo de estambres y anteras en M album. Se seleccionó como sustrato de este análisis al gen identificado como K4. El cDNA correspondiente a este gen fue obtenido desde flores en estadios premeioticos mediante la técnica de "differential display" de mRNAs. El análisis de la expresión de este gen mediante RT-PCR, ha establecido que este gen es transcrito en las etapas preesporogenicas del desarrollo floral. El análisis de la secuencia del cDNA K4, ha revelado una homologia de un 95% con el CCLS65, un cDNA obtenido desde flores macho en estadios preemeioticos del desarrollo. De aquí en adelante el gen K4 se denominara MROS65. A partir de la secuencia determinada para el cDNA K4, se sintetizó un oligonucleotido de 30 bases, complementario al extremo 5' de la región codificadora de este gen. Tal oligonucleotido fue empleado para amplificar, desde el DNA cromosomal, el fragmento "río arriba" a la región codificadora del gen MROS65. La técnica de "Single Specific Primer" o SSP-PCR, fue adaptada y utilizada para tal efecto. Tres bandas de amplificación, una de 600 pb y dos de 400 pb aproximadamente, fueron visualizadas. Tales fragmentos de DNA fueron clonados en el T-vector pBlueScript II SK(-) y su secuencia nucleotidica fue establecida. El análisis de las secuencias indicó que el clon pSKT65-1, que contiene una Banda de 351 pb posee elementos típicos de promotores eucarióticos, tales como "TATA box" y "CCAT box". Sin embargo, la característica mas interesante es la presencia en este fragmento de la secuencia CATTTTGG, muy similar a aquella definida como consenso para el sitio de unión de la proteína MADS AGAMOUS (CC(A/T)4NNGG o CC(A/T)6GG). Puesto que, de acuerdo al modelo ABC, AGAMOUS es uno de los genes de identidad de órganos involucrados en la modulación del desarrollo de estambres y anteras en el tercer verticilo floral de Arabidopsis thaliana, y que el correspondiente gen ortólogo SI,MI ha sido identificado en M album, este hallazgo sugiere que MROS65 podría ser un gen Blanco de la regulación por factores de transcripción MADS. La confirmación de lo anterior a través de experimentos de unión del factor SLM1 a este fragmento de DNA, conjuntamente con un análisis mediante delecciones y/o mutagenesis, es la continuación de esta línea de estudios

Identificación y análisis de la expresión de genes de deshidrina en la especie Lycopersicon chilense

43 p.El frío y el déficit de agua son dos de los factores ambientales que mas severamente afectan la distribución geográfica de las plantas terrestres, causando restricciones para las especies vegetales de valor agronómico al limitar las áreas geográficas adecuadas para su cultivo. Por consiguiente, obtener cultivares de mejor adaptación o resistentes a los factores de estrés medio ambiental mencionados es fundamental para la expresión tanto de las áreas como el periodo de cultivo al aire libre. El mejoramiento genético molecular o ingeniería genético de plantas, son metodologías adecuadas para agregar nuevas características fenotípicas a cultivares de importancia agronómica. La especie Lycopersicon chilense, tomate silvestre que se desarrolla entre la 1 y 3 región, presenta interesantes características de resistencia a factores de estrés ambiental tales como frío y deshidratación y en consecuencia es un donante potencial de genes que permitan la generación de plantas de cultivo transgénicas resistentes a tales factores de estrés. Este estudio se ha dirigido a detectar la presencia en el genoma de esta planta, de genes codificadores para proteínas denominadas deshidrinas, las que han sido previamente involucradas en los mecanismo adaptativos de especies vegetales frente a las condiciones de estrés referidos. Los resultados obtenidos indican la presencia de tres secuencias relacionadas a genes de deshidrinas en esta especie, determinándose que una de ellas, LchDHN1, posee una alta similitud con genes de deshidrinas descritos en otras especies de solanáceas. Se ha analizado la expresión de LchDHN1 en respuesta a los factores de estrés medioambiental referidos, determinándose que el gen en cuestión es transcrito en forma constitutiva

Esport d’oci a Espanya: epidemiologia de les lesions i les seves conseqüències

Introducció i objectius. Es va dur a terme un estudi epidemiològic de casos, descriptiu i analític. L’objectiu va ser la valoració de les lesions esportives produïdes durant la pràctica d’esport d’oci en l’àmbit geogràfic de totes les comunitats autònomes d’Espanya. Mètode. Es van fer enquestes a un total de 1.616 subjectes que haguessin patit una lesió en els últims 12 mesos practicant esport a manera d’oci. La compilació de la informació es va fer mitjançant una base de dades digitals hostatjades en un servidor web vinculat a una enquesta digital a través de la qual es van registrar les respostes dels subjectes. Resultats. Dins la mostra, un 72,5 % van ser homes i un 27,5 % dones; així com el 74,4 % van ser subjectes de fins a 35 anys d’edat i el 25,6 % restant, majors de 35 anys. L’esport que va generar un nombre més gran de lesions va ser el futbol (27,6 % del total d’accidents); seguit per la cursa (8,6 %), el futbol sala (7,9 %) i el basquetbol (7,7 %). Atenent a les conseqüències de les lesions, els esports que van manifestar un major percentatge de seqüeles després de l’accident van ser: basquetbol (el 70,2 % dels lesionats), futbol (69,5 %) i ciclisme (66,7 %). Així mateix, els que més percentatge de rehabilitació després de la lesió van requerir van ser: atletisme (78,9 %), pàdel (72,2 %) i tennis (71,7 %). Per últim, els que més baixes laborals van suposar van ser: tennis (26,1 %), futbol sala (26 %) i arts marcials (22,8 %). Conclusions. Els resultats mostren una descriptiva general de la influència que les conseqüències de les lesions esportives tenen en la societat espanyola. Serien recomanables més estudis comparatius de casos de lesionats i no lesionats en l’esport amateur per tal d’establir campanyes de prevenció

Deporte de ocio en España: epidemiología de las lesiones y sus consecuencias

Introducción y objetivos. Se realizó un estudio epidemiológico de casos, descriptivo y analítico. El objetivo fue la valoración de las lesiones deportivas producidas durante la práctica de deporte de ocio en el ámbito geográfico de todas las comunidades autónomas de España. Método. Se realizaron encuestas a un total de 1616 sujetos que hubieran sufrido una lesión en los últimos 12 meses practicando deporte a modo de ocio. La compilación de la información se realizó mediante una base de datos digital hospedada en un servidor web vinculado a una encuesta digital a través de la cual se registraron las respuestas de los sujetos. Resultados. Dentro de la muestra, un 72,5 % fueron hombres y un 27,5 % mujeres; así como el 74,4 % fueron sujetos de hasta 35 años de edad y el 25,6 % restante, mayores de 35 años. El deporte que generó mayor número de lesiones fue el fútbol (27,6 % del total de accidentes); seguido por la carrera (8,6 %), el fútbol sala (7,9 %) y el baloncesto (7,7 %). Atendiendo a las consecuencias de las lesiones, los deportes que manifestaron un mayor porcentaje de secuelas tras el accidente fueron: baloncesto (el 70,2 % de los lesionados), fútbol (69,5 %) y ciclismo (66,7 %). Asimismo, los que más porcentaje de rehabilitación tras lesión requirieron fueron: atletismo (78,9 %), pádel (72,2 %) y tenis (71,7 %). Por último, los que más bajas laborales supusieron fueron: tenis (26,1 %), fútbol sala (26 %) y artes marciales (22,8 %). Conclusiones. Los resultados muestran una descriptiva general de la influencia que las consecuencias de las lesiones deportivas tienen en la sociedad española. Más estudios comparativos de casos de lesionados y no lesionados en deporte amateur serían recomendables para establecer campañas de prevención

Determinacion de variacion clonal en Vitis vinifera cv. carmenere mediante el uso de marcadores moleculares basados en retrotransposones

45 p.La cepa Vitis vinífera cv. Carménère es originaria de Francia y a Chile fue ingresada en la época prefiloxera pero no se reconoció como tal sino hasta 1993. El cultivar presenta un alto grado de variabilidad fenotípica, desconociéndose si ella es a su vez causada por un grado similar de variabilidad genética. El Centro Tecnológico de la Vid y el Vino (CTVV) de la Universidad de Talca ha generado una colección de 42 accesiones de esta cepa las que han sido analizadas a través de varias temporadas de cultivo en relación a parámetros de producción y calidad de fruta. A partir de la variada gama de datos obtenidos surge la necesidad de corroborar si existe correlación genotipo-fenotipo en tales accesiones. Para dilucidar tal interrogante es necesario aplicar técnicas moleculares basadas en marcadores moleculares genéticos. En un primer intento se ha tratado de realizar una clasificación de estos clones aplicando la técnica AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) pero sus resultados no han sido del todo satisfactorios. El reciente desarrollo de técnicas de análisis basadas en retrotransposones, elementos génicos móviles distribuidos ampliamente en el reino vegetal y generalmente asociados a la generación de variación clonal, ofrecen nuevas alternativas metodológicas para este. Por lo anteriormente señalado en este proyecto de tesis se propone estudiar el polimorfismo genético entre las diferentes accesiones del CTVV, aplicando la técnica REMAP (Retrotransposon Microsatellite Amplified Polymorphism)

Caracterización estructural y funcional de genes que codifican para proteínas asociadas a la red regulatoria del desarrollo floral y frutal en Vitis vinifera Cv. Carménère

135 p.Vitis vinifera cv. Carménère ha sido caracterizada como una variedad con alta tendencia al desarrollo de frutos partenocárpicos, lo que redunda en la producción de bayas semilladas y bayas no semilladas dentro de un mismo racimo. Las causas de este fenómeno no están bien esclarecidas, aun cuando ha sido asociado a problemas en la capacidad germinativa del polen otorgando al proceso de desarrollo floral una relevancia particular en la manifestación de este problema. Como primera aproximación a la caracterización de los eventos genético-moleculares involucrados en tal fenómeno, los perfiles de expresión de aproximadamente 4.800 genes fueron analizados tanto en bayas semilladas como no semilladas. El análisis comparativo de los perfiles de expresión entre ambos tipos de bayas, mostró que un número importante de genes diferencialmente expresados codifican para proteínas que no han sido caracterizadas previamente en vid. Entre estos genes, en el desarrollo de este trabajo se ha escogido a aquellos representados por los ESTs VVCCGC3015D09.b y VVCCGS2117F10.b tanto por su alta tasa de represión en bayas no semilladas como por el hecho que ellos codificarían proteínas involucradas en la regulación de la expresión génica. Los genes respectivos fueron aislados y caracterizados estructural y funcionalmente. Tal análisis ha permitido identificar a los genes denominados VvPSZ3 (representado por el EST VVCCGC3015D09.b), VvFSK y VvFTK, (representados por el EST VVCCGS2117F10.b), los que codifican para proteínas con características estructurales propias de un factor de transcripción del tipo zinc finger (VvPSZ3) y dos putativos receptores con función quinasa (VvFSK y VvFTK). Por tanto, el objetivo de esta tesis fue caracterizar estructural y funcionalmente estos genes y evaluar su patrón de expresión durante el desarrollo floral/frutal de V. vinifera. VvPSZ3 es homólogo al gen ZAT4 de A. thaliana, el cual codifica para una proteína esencial para el desarrollo en esta especie. Concordante con su putativa función como factor de transcripción, el producto de ambos genes se localiza en el núcleo celular. VvPSZ3 se expresa principalmente en el polen en flores cerradas y en la semilla de bayas al estadio de envero. El gen tiene una expresión mayor en el cultivar Cabernet Sauvignon que en Carménère, siendo el primero un cultivar que no tiene tendencia al millerandaje. Además, un análisis detallado de la expresión del gen en Caménère sugiere su participación en el desarrollo reproductivo de Vitis vinifera, estando esta expresión relacionada a la presencia en la región promotora del gen tanto de elementos regulatorios en cis para factores de transcripción que regulan el desarrollo floral como elementos asociados a la expresión en polen y semillas. Adicionalmente, la expresión de este gen parece ser inducida por ABA y ácido salicílico. Si VvPSZ3 y ZAT4 corresponden a genes ortólogos debe aún ser determinado. Ello permitiría especular sobre el rol de VvPSZ3 en el desarrollo de la vid, toda vez que líneas de Arabidopsis, homocigotas para una mutación por inserción en el gen ZAT4 no son viables. Por otra parte, los genes VvFSK y VvFTK poseen homología con ScORK17, gen que codifica para un receptor quinasa asociado al desarrollo de óvulos en Solanum chacoense, y al gen At3g03770 de función desconocida en A thaliana. Ambos genes se expresan en flores de vides, pero mientras VvFSK es expresado fuertemente en semillas de bayas al estadio de pre-envero, VvFTK se expresa en zarcillos. En ambos casos su actividad transcripcional es inducida por sacarosa y por ABA. El análisis in silico de la región promotora de ambos genes reveló la presencia de secuencias regulatorias asociadas tanto a la expresión en floema así como elementos de respuesta a azúcares. La función de estos genes en el desarrollo de la vid aún no está establecida. Como primera aproximación para determinar su papel, una línea de A. thaliana homocigota para una inserción de T-DNA en el gen homólogo At3g03770 no genera un fenotipo evidentemente distinto al de plantas tipo silvestre./ABSTRACT: Vitis vinífera cv. Carménère has been characterized as a variety with high tendency to develop parthenocarpic fruits yielding seeded and seedless berries in the same cluster. Even though this phenomenon has been associated to deficiencies in pollen germination capability, thus giving to flower development special relevance to the manifestation of this problem, the real origin of this condition has not been elucidated. As a first approach to the study of the molecular/genetic events involved in this problem, expression profiles of approximately 4,800 genes were analyzed in both, seeded and seedless berries. Comparative transcriptomic analysis shows that several differentially expressed genes codes for non characterized protein in grapevine. Among these genes, ESTs VVCCGC3015D09.b and VVCCGS2117F10.b were selected for further analysis due to their high repression ratio in seedless berries and the fact that they codify for proteins putatively involved in gene expression regulation. These genes were isolated and characterized at the structural level. Such analysis allowed the identification of the VvPSZ3 (represented by the EST VVCCGC3015D09.b), VvFSK and VvFTK (represented by the EST VVCCGS211 7F10.b) genes, codifying for a protein structurally similar to a “zinc finger” transcription factor (VvPSZ3) and two putative receptor like-kinase proteins (VvFTK and VvFSK). The aim of this thesis was to characterize structurally and functionally these three genes and evaluate their expression pattern through the floral/fruit development of V. vinifera. VvPSZ3 gene is homologous to ZAT4 from A. thaliana, which encodes for an essential protein for development in this specie. Agreeing with their expected role as transcription factor, the respective encoded proteins localizes to the cell nucleus. VvPSZ3 is mainly expressed in pollen at anthesis and seeds of berries at the preveraison stage. The expression of this gene is higher in Cabernet Sauvignon than in Carmenere, being the first a cultivar with low tendency to millerandaje. In addition, a more detailed analysis of gene expression in Caménère suggest a role for this gene in grapevine reproductive development and correlates with the presence in its promoter region of cis regulatory elements recognized by transcription factors involved in regulation of flower development, as well as elements associated to expression in pollen and seeds. Additionally, VvPSZ3 seems to be induced by ABA and salicylic acid. If VvPSZ3 and ZAT4 are orthologous genes remain to be demonstrated. Since Arabidopsis lines homozygous for a T-DNA insertion in the ZAT4 gene are not viable, a similar function for VvPSZ3 gene in grapevine development could be expected. On the other hand, VvFSK and VvFTK are homologous to ScORK17, a gene coding for a receptor kinase involved in the regulation of ovule development in Solanum chacoense, and to At3g03770 a gene of unknown function in A. thaliana. Although both grapevine genes are expressed in flowers, VvFSK is strongly expressed in seeds of berries at pre-veraison stage, while VvFTK is actively transcribed in tendrils; nevertheless both genes are induced by sucrose and ABA. The in silico analysis of their promoter regions revealed the presence of cis regulatory sequences associated to response to sucrose induction as well as to phloemspecific expression. the function of these genes in grapevine development needs to be established. As a first approach to asses such role, the phenotype of the Arabidopsis thaliana line homozygous for T-DNA insertion in the homologous gene At3g03770 was analyzed. However, no evident differences were found between both lines when compared with Arabidopsis wild typ

Análisis de la estructura y diversidad arbórea en sistemas agroforestales de cacao en Jolom-ijix II, Alta Verapaz, Guatemala

l estudio se llevó a cabo en la comunidad Jolom-ijix II, en el municipio de Panzós, Alta Verapaz. El método de investigación se basó en la aplicación de un muestreo no probabilístico, entrevistas semiestructuradas y grupos focales de discusión con enfoque de género y grupos etarios. Se establecieron 20 parcelas temporales de muestreo con dimensiones de 50 m x 50 m, lo que suma un total de cinco hectáreas, identificando taxonómicamente las especies forestales y recopilando variables dasométricas (DAP y Ht) utilizando herramientas básicas para la medición. El objetivo principal fue analizar la estructura y la diversidad de usos de las especies arbóreas asociadas en los sistemas agroforestales (SAF) de cacao. Se determinó que los SAF de cacao en el área de estudio poseen una estructura y composición florística compleja, además de distanciamientos definidos para el cultivo de cacao (625 a 1 111 plantas ha-1). Mientras que las especies forestales y frutales poseen un diseño aleatorio dentro del sistema productivo (36 a 272 árboles ha-1). Se registró la cantidad de 36 especies forestales agrupadas en 18 familias. En el perfil vertical, predomina el estrato medio compuesto por especies frutales y forestales. En el aprovechamiento de especies forestales el uso prioritario es la obtención de materiales de construcción y leña. Las especies con mayor dominancia e índice de valor de importancia son: Madre Cacao (Gliricidia sepium (Jacq.) Kunth) con 111.29 %, Laurel (Cordia alliodora (Ruiz & Pav.) Oken) con 27.02 % y Cedro (Cedrela odorata L.) con 24.02 %. La estructura y composición arbórea del SAF de cacao evaluado está relacionado a la satisfacción de necesidades básicas y fundamentales en la ruralidad de Alta Verapaz, Guatemala