Ultrastructural study of in vivo produced ovine embryos: characterization of secretory vesicles

The ultrastructure of in vivo produced ovine embryos, at the morula, early blastocyst and late blastocyst stages, was evaluated using transmission electron microscopy. In vivo produced embryos (n=14) were obtained from Portuguese Black Merino ewes, superovulated during Spring. Embryos were recovered by abdominal laparotomy, under general anesthesia, on day 6 or 7 after sponge removal. Embryos were processed for electronic microscopy observation and ultrathin sections (700A) were observed in a transmission electron microscope JEOL 100CXII. Embryonic cells presented intact intercellular junctions, numerous mitochondria, smooth endoplasmic reticulum cisternae and light vesicles. Polyribosomes, rough endoplasmic reticulum cisternae, secondary lysosomes, Golgi complexes and lipid droplets were also observed in the cytoplasm. The nucleus was well defined with one or more reticular nucleolus. The most noticeable aspect of the cytoplasm of ovine embryos was the presence of abundant cytoplasmic small light vesicles with heterogeneous contents. These light vesicles seem associated to small cisternae of Golgian and endoplasmic reticulum origin and their labile membrane enabled them to rapidly coalesce into medium size vesicles that began to engulf mitochondria and lipid droplets, forming giant vacuoles mostly filled with fat. Incomplete matured secretory vesicles were observed to exocytate into the perivitelline space of morulae, whereas fully matured secretory vesicles appeared only in trophectoderm cells, being exocytated into the blastocoelic cavity

THE ROLE OF ECONOMIC AND SOCIOCULTURAL FUNCTIONS OF ANIMAL PRODUCTION IN WELLBEING AND DEVELOPMENT OF RURAL COMMUNITIES OF TIMOR-LESTE

Livestock production in Timor-Leste is predominantly familiar being chickens, pigs, goats, cattle, horses, buffaloes and sheep the main species. The livestock species play very important economic and sociocultural roles for the well-being of rural households, such as food supply, source of income, asset saving, source of employment, soil fertility, livelihoods, transport, agricultural traction, agricultural diversification and sustainable agricultural production. The aim of this work was to identify and characterize the different roles that livestock and livestock species play in rural communities of Timor-Leste, highlighting the importance of animal production for the wellbeing and rural development, and relate the functions performed by livestock production with economic, social and cultural attributes of the communities. The data used in this study were collected in 2011 through a questionnaire survey in three rural communities in the district of Bobonaro -mountain area, irrigation plain and coastal zone, and were complemented with secondary dat

VARIAÇÃO NA PERCENTAGEM DE ESPERMATOZÓIDES COM FORMAS ANORMAIS EM RAÇAS DE TOUROS USADAS EM PORTUGAL E SUA VALORIZAÇÃO NA SELEÇÃO DE REPRODUTORES

A avaliação da percentagem de formas anormais de espermatozóides (spz) constitui um dos critérios possíveis de reprovação aquando da realização de exame andrológico a touros (Higdon III et al., 2000). Para a aprovação de um touro reprodutor, recomenda-se que as formas anormais sejam inferiores a 30%, pela influência que este parâmetro tem na fertilidade (Chenoweth et al.,1993, Amann et al., 2000, Thundathil et al., 1999). Estão descritas diferenças inter-raciais e entre grupos genéticos em vários parâmetros reprodutivos (Moraes et al. 1998) e, no caso específico das alterações morfológicas dos spz, sabe-se que, além do efeito ambiental, podem também estar associadas a efeitos genéticos (Chenoweth, 2005). Vários autores (citados por Silva et al., 2012) referem heritabilidades entre 0,23 e 0,33 para a presença de defeitos espermáticos. É pois importante ter em conta este parâmetro quer para a selecção de animais (pelo progresso genético que pode proporcionar) quer para a validação dos critérios de classificação de animais de raças distintas durante o exame andrológico. Neste trabalho avaliaram-se parâmetros microscópicos do sémen de 6 raças de touros utilizadas em Portugal, decorrentes da avaliação andrológica a 184 animais, em resposta à solicitação dos produtores. Os resultados revelam diferenças altamente significativas (p<0,01) entre raças no que se refere à percentagem de formas anormais de spz e este valor é influenciado também pela pontuação de condição corporal dos animais. Em relação aos outros parâmetros avaliados há também influência da raça nos valores de motilidade individual do sémen (p<0,05). Estes resultados demonstram que, nas raças de touros utilizadas em Portugal, existem variações altamente significativas na percentagem de spz com formas anormais e isto deverá ser acautelado na seleção dos reprodutores de cada raça. Seria importante dispor de informação mais alargada sobre estes valores, quer a nível nacional quer internacional, como forma de padronizar cada uma das raças em causa

RESULTADOS DE EXAMES ANDROLÓGICOS EM TOUROS DE APTIDÃO CREATOPOIÉTICA NO SUL DE PORTUGAL

Em Portugal o exame andrológico não constitui uma rotina em muitas das explorações de bovinos de produção de carne explorados em regime extensivo. Nos últimos anos tem-se atribuído mais importância a esta prova sobretudo pela preocupação crescente em melhorar os índices de produtividade e eficiência reprodutiva e porque está claramente demonstrada a relação custobenefício deste exame (Chenoweth, 2011). Além da avaliação dos touros adultos, os produtores demonstram também maior exigência na escolha de novilhos de substituição, sendo que o resultado preditivo deste exame se assume como extremamente importante, aquando da compra/venda de animais jovens, pela influência direta que tal representa na fertilidade da exploração (Engelken,2008, Hopkins, 2005, Chenoweth et al., 1993). Apresentam-se os resultados preliminares de 184 exames andrológicos realizados no sul de Portugal por uma equipa médico-veterinária durante quatro anos (2008 a 2012). Estes exames foram realizados em condições de campo e solicitados em sequência de exame em acto de compra ou programa de assistência reprodutiva na exploração. Dos 184 touros avaliados foram aprovados 72%, aumentando a probabilidade de reprovação tendencialmente com a idade. Em parâmetros reprodutivos importantes como o perímetro testicular existe influência de: idade (p<0,001), raça (p<0,05) e condição corporal (CC) (p<0,05). Encontraram-se correlações significativas entre parâmetros tais como entre perímetro testicular e idade (p<0,001;r=0,52), a PCC e os parâmetros seminais microscópicos (p<0,05) e dos vários parâmetros entre si. O exame andrológico é essencial para estimar o potencial reprodutivo dos touros e importa fomentar a sua realização em Portugal para melhorar os níveis de fertilidade e rentabilidade das explorações

The Livestock Roles in the Wellbeing of Rural Communities of Timor-Leste

The livestock species play very important economic and socio-cultural roles for the wellbeing of rural households, such as food supply, source of income, asset saving, source of employment, soil fertility, livelihoods, transport, agricultural traction, agricultural diversification and sustainable agricultural production. The aim of this work was to identify and characterize the different roles that livestock and livestock species play in rural communities of Timor-Leste, highlighting the importance of animal production for the wellbeing and rural development, and relate the functions performed by livestock production with economic, social and cultural attributes of the communities. The data used in this study were collected in 2011 through a questionnaire survey in three rural communities in the district of Bobonaro, namely in a mountain area, an irrigation plain and a coastal zone, and were complemented with secondary data. Livestock production in Timor-Leste is predominantly familiar being chickens, pigs, goats, cattle, horses, buffaloes and sheep the main species. Beyond the economic function, each livestock species also performs social and cultural functions

THE ECONOMIC AND SOCIOCULTURAL ROLE OF LIVESTOCK IN THE WELLBEING OF RURAL COMMUNITIES OF TIMOR-LESTE

The livestock species play very important economic and socio-cultural roles for the wellbeing of rural households, such as food supply, source of income, asset saving, source of employment, soil fertility, livelihoods, transport, agricultural traction, agricultural diversification and sustainable agricultural production. The aim of this work was to identify and characterize the different roles that livestock and livestock species play in rural communities of Timor-Leste, highlighting the importance of animal production for the wellbeing and rural development, and relate the functions performed by livestock production with economic, social and cultural attributes of the communities. The data used in this study were collected in 2011 through a questionnaire survey in three rural communities in the district of Bobonaro -mountain area, irrigation plain and coastal zone, and were complemented with secondary data. Livestock production in Timor-Leste is predominantly familiar being chickens, pigs, goats, cattle, horses, buffaloes and sheep the main species. Beyond the economic function, each livestock species also performs social and cultural functions

THE LIVESTOCK ROLES IN THE WELLBEING OF RURAL COMMUNITIES OF TIMOR-LESTE

The livestock species play very important economic and socio-cultural roles for the wellbeing of rural households, such as food supply, source of income, asset saving, source of employment, soil fertility, livelihoods, transport, agricultural traction, agricultural diversification and sustainable agricultural production. The aim of this work was to identify and characterize the different roles that livestock and livestock species play in rural communities of Timor-Leste, highlighting the importance of animal production for the wellbeing and rural development, and relate the functions performed by livestock production with economic, social and cultural attributes of the communities. The data used in this study were collected in 2011 through a questionnaire survey in three rural communities in the district of Bobonaro -mountain area, irrigation plain and coastal zone, and were complemented with secondary data. Livestock production in Timor-Leste is predominantly familiar being chickens, pigs, goats, cattle, horses, buffaloes and sheep the main species. Beyond the economic function, each livestock species also performs social and cultural function

The Livestock Roles in the Wellbeing of Rural Communities of Timor-Leste

Abstract: The livestock species play very important economic and socio-cultural roles for the wellbeing of rural households, such as food supply, source of income, asset saving, source of employment, soil fertility, livelihoods, transport, agricultural traction, agricultural diversification and sustainable agricultural production. The aim of this work was to identify and characterize the different roles that livestock and livestock species play in rural communities of TimorLeste, highlighting the importance of animal production for the wellbeing and rural development, and relate the functions performed by livestock production with economic, social and cultural attributes of the communities. The data used in this study were collected in 2011 through a questionnaire survey in three rural communities in the district of Bobonaro, namely in a mountain area, an irrigation plain and a coastal zone, and were complemented with secondary data. Livestock production in Timor-Leste is predominantly familiar being chickens, pigs, goats, cattle, horses, buffaloes and sheep the main species. Beyond the economic function, each livestock species also performs social and cultural functions

Caracterização de parâmetros reprodutivos nas raças ovinas Merina Branca, Merina Preta e Campaniça

Os objectivos gerais deste trabalho foram avaliar a eficácia reprodutiva da aplicação de diferentes sistemas de maneio na época de Primavera. Avaliou-se também a variação sazonal em alguns parâmetros reprodutivos em carneiros nas épocas de Primavera e Outono. Num primeiro estudo, avaliou-se a eficácia da aplicação de inseminação artificial (IA) em ovelhas Merino Branco (MB), Merino Preto (MP) e Campaniço (C) considerando os factores: idade e condição corporal da ovelha, tipo de IA (vaginal ou cervical), diluidor de sémen (Laiciphos ou Triladil), tipo de sémen (fresco ou refrigerado) e a concentração por dose de sémen aplicada. Em todas as raças, a fertilidade foi afectada significativamente por a concentração por dose de sémen aplicada (P<0.05), obtendo-se valores de fertilidade de 32.6% e 54.9% na raça MB; 35.0% e 54.4% na MP e 18.5% e 33.5% na C. Na raça C a fertilidade foi também significativamente influenciada pelo tipo de sémen utilizado. Num segundo estudo procurou avaliar-se a eficácia de quatro sistemas de maneio reprodutivo em ovelhas MB e MP pré-tratamento com progestagénios (AP), pré-exposição a carneiros vasectomizados (EM), IA duas semanas antes da cobrição natural (IN) e um grupo controlo de cobrição natural, sem qualquer tratamento prévio (CN). A fertilidade global foi de 86% e não foi afectada significativamente por o sistema de maneio aplicado (P<0.05). A fertilidade foi influenciada significativamente por a raça (82.8%) vs 89% para a raça MB e MP, respectivamente, P<0.05). A Produtividade (Kg de borrego desmamado por ovelha parida) foi influenciada significativamente pelo sistema de maneio, raça e tipo de parto (P<0.05). Ovelhas submetidas ao tratamento prévio com progestagénios apresentaram Produtividade superior (36.5 Kg) comparativamente a ovelhas dos grupos IN (35.46 Kg),EM (33.3 Kg) e CN (32.6 Kg). A Produtividade na raça MB (36.08 Kg) foi significativamente superior à daraça MP (32.83 Kg). Num terceiro estudo observaram-se variações significativas no perímetro testicular (32.96 cm e 35.19 cm no Outono e Primavera, respectivamente, P<0.05), obtendo-se uma correlação positiva com o peso vivo do carneiro. A concentração de sémen, mobilidade massal e mobilidade individual foram significativamente superiores na época de Outono. Os resultados globais indicam que o sucesso da IA é condicionado pela concentração por dose de sémen e pelo tipo de sémen aplicado. Adicionalmente, o recurso à aplicação de tratamentos hormonais ou a técnicas de maneio como o “efeito macho” induzem a sincronização de cios e permitem a obtenção de taxas de fertilidade elevadas na época de Primavera. Finalmente, apesar dos carneiros das três raças apresentaram alguma sazonalidade reprodutiva, mantêm a capacidade de produzirem sémen a longo do an

Transferência embrionária e técnicas de criopreservação em pequenos ruminantes.r.

O presente trabalho engloba vários estudos em transferência embrionária e criopreservação de embriões da espécie ovina. Todos os trabalhos foram realizados na raça ovina portuguesa Merina Preta. O primeiro estudo teve como objectivo a avaliação do efeito da estação do ano - Primavera versus Outono - e da preparação de origem da FSH - FSH ovina (Ovagen®) versus FSH porcina (Pluset®) - na resposta superovulatória e nas taxas de ovulação, de recolha embrionária, fertilização e congelabilidade, bem como no número de embriões viáveis obtidos e número de embriões susceptíveis de serem criopreservados. Concluiu-se ser possível realizar de forma eficaz a estimulação superovulatória nas duas estações do ano, sendo vantajosa a utilização de FSH ovina (Ovagen®) relativamente à FSH porcina (Pluset ®). O segundo estudo teve como objectivo a avaliação da eficácia de três técnicas de criopreservação de embriões: congelação lenta, vitrificação clássica e vitrificação ultra-rápida por OPS, tendo as três técnicas sido avaliadas pelos resultados das transferências dos embriões para fêmeas receptoras da mesma raça. Não se obtiveram diferenças significativas entre as técnicas de criopreservação aplicadas, pelo que os resultados deste segundo estudo indicam que qualquer uma das técnicas utilizadas para criopreservação poderá ser aplicada com sucesso nesta raça. No estudo 3 procedeu-se à avaliação da estrutura celular de embriões de ovino produzidos in vivo, em estadio de mórula compacta, jovem blastocisto e blastocisto. O aspecto mais marcante observado no citoplasma das células embrionárias foi a presença de numerosas vesículas de conteúdo claro. Estas vesículas originam-se a partir de cisternas do complexo de Golgi e retículo endoplasmático, as quais se curvam e fundem entre si originando vesículas de conteúdo claro, que vão incluir diferentes estruturas citoplasmáticas, cisternas e outras vesículas. A estrutura lábil da sua membrana permite a sua coalescência em vesículas de maior dimensão as quais vão absorver mitocôndrias e gotículas lipídicas, dando origem à formação de vacúolos gigantes, na sua maioria preenchidos por um conteúdo lipídico de aspecto denso. No estadio de mórula foi possível observar a exocitose de vesículas imaturas e de aspecto claro para o espaço perivitelino, enquanto no estadio de blastocisto a exocitose, de vesículas maturas e de grandes dimensões, ocorreu para a cavidade blastocélica. As observações deste estudo sugerem que estas vesículas se comportam como organelos autofágicos, apresentando um processo evidente de maturação do estadio de mórula para blastocisto. O objectivo do estudo 4 foi o de avaliar as alterações ultraestruturais induzidas pelo processo de vitrificação por OPS em embriões de ovino produzidos in vivo, no estadio de mórula e blastocisto, em comparação com um grupo controlo (embriões frescos) e com embriões criopreservados por congelação lenta. Procedeu-se à classificação morfológica dos embriões dos cortes semi-finos tendo este tipo de avaliação permitido a identificação adicional de lesões não visíveis por observação à lupa, fornecendo assim informação adicional útil para a compreensão dos resultados obtidos com os diferentes métodos de criopreservação. Não se verificaram diferenças significativas na classificação dos cortes semi-finos de embriões criopreservados por ambos os métodos, o que está de acordo com os resultados de fertilidade e sobrevivência embrionária semelhantes, obtidos no estudo 2. No entanto, nesta classificação, obteve-se um número significativamente maior de blastocistos de grau 3 após criopreservação por OPS. Independentemente do estadio de desenvolvimento considerado e do método de criopreservação utilizado, observou-se que embriões cujo corte semi-fino foi classificado como de grau 1 ou 2 apresentam blastómeros bem preservados com uma estrutura celular intacta, enquanto embriões cuja classificação foi de 3 apresentam células degeneradas, descontinuidade das membranas celulares, severa lesão mitocondrial e desorganização do citoesqueleto. A gravidade e extensão das lesões celulares observada a nível ultraestrutural foi proporcional à observada nos cortes semi-finos dos embriões criopreservados. Assim, a classificação de cortes semi-finos poderá ser utilizada na predição da existência de lesões ultraestruturais em embriões criopreservados. Podemos assim concluir que apesar de todos os métodos de criopreservação estudados poderem ser aplicados com sucesso na criopreservação de embriões in vivo de ovino, a sua aplicação é susceptível de produzir lesão celular nas células embrionárias, pelo que a introdução de melhorias nos vários processos permanece ainda como um objectivo desejável