ULTRASSONOGRAFIA TRANSRETAL PARA IDENTIFICAR O SEXO FETAL DE CAPRINOS

Procurou-se estabelecer o período para sexar fetos caprinos pela ultrassonografia transretal visibilizando-se as estruturas da genitália externa, sendo que para tal foi monitorado o dia do posicionamento final do tubérculo genital (TG), bem como o dia em que o pênis, a bolsa escrotal, o clitóris e as tetas foram visibilizados. Foram monitorados fetos das raças Boer (n = 36), Parda Alpina (n = 31) e Anglo-nubiana (n = 27), do 40o ao 60o dia de gestação, usando-se transdutor linear de 6,0 e 8,0 MHz. O posicionamento final do TG ocorreu no período de 47,11 ± 1,45 dias, nos machos, e 45,62 ± 1,36 dias, nas fêmeas, e a visibilização das estruturas da genitália externa no período de 49,42 ± 2,20 dias para a bolsa escrotal; 49,37 ± 2,19 dias para o pênis; 49,23 ± 1,75 dias para as tetas e 49,98 ± 2,52 dias para o clitóris. A migração do TG no feto fêmea foi mais precoce (P 0,05) entre as estruturas referentes ao mesmo sexo. Conclui-se que apesar da sexagem de fetos caprinos poder ser efetuada antes do 55o dia de gestação, recomenda-se realizá-la somente após a visibilização das estruturas da genitália externa para uma maior segurança na identificação do sexo. PALAVRAS-CHAVES: Bolsa escrotal, clitóris, pênis, sexagem, tetas

Effect of heat stress during maturation of oocytes and in vitro production of embryos in goats and sheep

Esse estudo teve como objetivo determinar o efeito do estresse térmico durante a maturação de oócitos e seu reflexo na produção in vitro de embriões nas espécies caprina e ovina. Os ovários foram coletados em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram coletados pela técnica de “slicing” dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro, selecionados com base na morfologia e colocados em meio básico de maturação. Nas 10 repetições, os CCOs foram submetidos aos tratamentos de estresse térmico calórico a 41°C por 0 (termoneutralidade a 39°C), 3, 6, 12, 18 e 24 horas de maturação in vitro. Os dados foram avaliados na maturação, fecundação, clivagem (D-3), estádio de 8-16 células (D-4), mórula (D-5), blastocisto (D-8) após fecundação e blastocistos positivos para apoptose através do ensaio de TUNEL. Foi observada diferença significativa (P 0,05) entre os tempos de 3 vs 6 e 18 vs 24 h e nos blastocistos TUNEL positivos nos tempos de 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 e 18 vs 24 h de estresse térmico. Em ovinos, não foi observada diferença significativa (P > 0,05) na fecundação, D-3, D-4, D-5 e D-8 entre os tempos de 18 vs 24h e nos blastocistos TUNEL positivos nos tempos de 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 e 18 vs 24h de estresse térmico. Nas condições observadas neste estudo, os resultados permitem concluir que o tempo em que o oócito é exposto ao estresse térmico durante a maturação in vitro é fundamental para definir o desenvolvimento embrionário e o nível apoptótico de suas células.This study aimed to determine the Effect of heat stress during maturation of oocytes and in vitro production of embryos in goats and sheep. Ovaries were collected in a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of "slicing" of the follicles from 2 to 6 mm in diameter and selected based on morphological classification and placed on the basic stages. In 10 replicates the COCs were submitted to the caloric heat stress at 41 ° C for 0 (the thermoneutral 39° C), 3, 6, 12, 18 and 24 hours of maturation in vitro. The percentage of oocytes was determined in the maturation, fertilization, cleaved (D-3), stage of 8-16 cells (D-4), morale (D-5), blastocyst(D-8) after fertilization and blastocyst positive for apoptosis by TUNEL assay. Significant difference (P 0.05) between the times of 18 vs 24 hours in blastocyst TUNEL positive at 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 and 18 vs 24 h of heat stress. The results in goats showed on maturation, fertilization, D-3, D-4, D-5. The D-8 was not significantly different (P > 0.05) between the periods of 3 vs 6 to 18 vs 24 h and the blastocyst TUNEL positive at 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 and 18 vs 24 h of heat stress. Under the conditions observed in this study, the results indicate that the time in which the oocyte is exposed to heat stress during maturation in vitro is essential to define the embryonic development and their level of apoptotic cells

Identificação de sexo em caprinos e ovinos através da técnica de PCR

A utilização de ferramentas moleculares na identificação do sexo genético permite ao produtor um melhor planejamento reprodutivo, elevando o valor dos animais avaliados e facilitando a coordenação de ações que visem racionalizar produção e lucratividade. Objetivou-se com o presente estudo determinar métodos que permitam a identificação do sexo genético das espécies caprina e ovina, utilizando diferentes concentrações de DNA (150, 100, 50, 1, 0,5, 0,2 e 0,1ng) extraído de sangue de ambos os sexos, como uma possibilidade de aplicação em exames embrionários pré-implantacionais, sexagem espermática e identificação do sexo em animais pseudo-hermafrotidas. Foram realizadas reações em cadeia da polimerase (PCR) multiplex para o gene SRY (116pb) encontrado no cromossomo Y, para o gene Aml-X (300pb) encontrado no cromossomo X, além das seqüências correspondentes aos genes ZFX/ZFY que contêm 445 e 447pb respectivamente. A utilização destes métodos apresentou acurácia de 100% nas amostras de sangue caprino e ovino, com eficiência em quantidades de DNA de até 0,2ng (SRY e Aml-X) e 1,0ng (SRY e ZFX/ZFY), o que sugere a viabilidade da técnica para determinação sexual embrionária destas espécies.The use of molecular biology in animal reproduction to identifying the sex genetic allows the producer has better reproductive planning, facilitating the coordination of actions aimed at rationalizing production and profitability. The objective of this study was to determine methods for the identification of the sex of the goats and sheep, using different concentrations of DNA (150, 100, 50, 1, 0.5, 0.2 and 0.1 ng) extracted from blood of both sexes, as a possibility for application in sexing embryos pre-implantating, sperm and animals pseudo-hermaphrodites. It was performed polymerase chain reaction (PCR) multiplex for the SRY gene (116bp) found in the Y chromosome, the gene for Aml-X (300pb) found on the X chromosome, in addition the sequences corresponding to genes ZFX / ZFY containing 445 and 447bp respectively. The use of these methods presented showed accuracy of 100% in samples of blood goat and sheep, in low concentrations, at least 0.2ng (SRY/Aml-X) and 1.0ng (SRY/ZFXZFY), which suggests the feasibility of the technique for determining sexual in these species.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPE

TRANSRECTAL ULTRASOUND TO IDENTIFY THE SEX OF CAPRINE FETUSES ULTRASSONOGRAFIA TRANSRETAL PARA IDENTIFICAR O SEXO FETAL DE CAPRINOS

The aim of this study was to establish the period for sexing caprine fetuses by transrectal ultrasonography through viewing the structures of the external genitalia, monitoring of the final positioning of the genital tubercle, and the day that the penis, scrotum, clitoris and nipples were seen. Fetuses of Boer (n = 36), Brownscale Alpine (n = 31) and Anglo-nubian (n = 27), breeds in the 40th-60th day of gestation, were tracked using linear transducer of 6.0 and 8.0 MHz. The final positioning of the genital tubercle occurred in the period from 47.11 ± 1.45 days in males and 45.62 ± 1.36 days in females. The visualization of structures of the external genitalia was in the period from 49.42 ± 2.20 days for scrotum; 49.37 ± 2.19 days for penis; 49.23 ± 1.75 days for nipples and 49.98 ± 2.52 days for clitoris. The migration of female genital tubercle in the fetus occurred earlier (P < 0.05) than in males, and the visualization of penis and scrotum was earlier (P < 0.05) than the nipples and clitoris, there was no difference (P > 0.05) among the structures of the same sex. In conclusion, although the sexing of caprine fetuses can be done before the 55th day of pregnancy, it is recommended to perform it only after the visualization of the structures of the external genitalia for a greater security in the sex identification.<br /><br />KEY WORDS: Clitoris. nipples, penis, scrotum, sexing.<br /><br /> Procurou-se estabelecer o período para sexar fetos caprinos pela ultrassonografia transretal visibilizando-se as estruturas da genitália externa, sendo que para tal foi monitorado o dia do posicionamento final do tubérculo genital (TG), bem como o dia em que o pênis, a bolsa escrotal, o clitóris e as tetas foram visibilizados. Foram monitorados fetos das raças Boer (n = 36), Parda Alpina (n = 31) e Anglo-nubiana (n = 27), do 40o ao 60o dia de gestação, usando-se transdutor linear de 6,0 e 8,0 MHz. O posicionamento final do TG ocorreu no período de 47,11 ± 1,45 dias, nos machos, e 45,62 ± 1,36 dias, nas fêmeas, e a visibilização das estruturas da genitália externa no período de 49,42 ± 2,20 dias para a bolsa escrotal; 49,37 ± 2,19 dias para o pênis; 49,23 ± 1,75 dias para as tetas e 49,98 ± 2,52 dias para o clitóris. A migração do TG no feto fêmea foi mais precoce (P < 0,05) do que no macho, enquanto a visibilização da bolsa escrotal e pênis foi mais precoce (P < 0,05) do que das tetas e clitóris, não havendo diferença (P > 0,05) entre as estruturas referentes ao mesmo sexo. Conclui-se que apesar da sexagem de fetos caprinos poder ser efetuada antes do 55o dia de gestação, recomenda-se realizá-la somente após a visibilização das estruturas da genitália externa para uma maior segurança na identificação do sexo. <br /><br />PALAVRAS-CHAVES: Bolsa escrotal, clitóris, pênis, sexagem, tetas.<br /><br /&gt

INFLUÊNCIA DAS ESTAÇÕES SECA E CHUVOSA NA CAPACIDADE DE DESENVOLVIMENTO DE OÓCITOS E PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES DA ESPÉCIE CAPRINA

This study aimed to determine the influence of dry and rainy seasons on oocyte maturation and in vitro production (IVP) of embryos in goats. The ovaries of does in dry (October to March) and rainy season (April-September) were collected at a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of slicing of the follicles from 2 to 6 mm in diameter, and selected based on morphologic classification. We used 12 replicates, in which the COCs were submitted to maturation, fertilization and in vitro culture. The cleavage rate was determined on day 3 (D-3) and embryos that developed to 8-16 cells (D-4), morulae (D-5) and blastocyst (D-8) stages after fertilization. The number of blastomeres was assessed with DAPI staining, and the determination of apoptotic blastomeres was performed by TUNEL assay. In the dry season, D-3 embryos and morulae development was lower than that obtained in the rainy season (P0.05) were observed on oocyte maturation, fertilization, D-4 embryo yield and blastocyst development. Embryos produced during the dry season had a higher incidence of apoptosis on D- 3 and at the morulae stage (P<0.05). Under the conditions described in this study, the results suggest that the early stages of embryonic development suffer greater negative impact during the dry season in IVP protocols in goats