EXTRACELLULAR DNA AND PLASMA NUCLEASE ACTIVITY EFFECT ON THE COURSE OF THE MICROBIAL INFLAMMATORY PROCESS IN THE RESPIRATORY TRACT IN CYSTIC FIBROSIS

Background. Cystic fibrosis is a hereditary multi-organ disease. The involvement of the respiratory system due to chronic inflammation and a chronic infectious process is the main cause of death in 90% of cases. Currently, chronic inflammation in the respiratory tract in cystic fibrosis is being actively studied and new approaches to therapy are being developed. Circulating extracellular DNA/cell-free DNA (eDNA/cf DNA) is present in the bloodstream and other biological fluids of both healthy and sick individuals. The eDNA concentration is increased during exacerbation of several illnesses and in cases of exposure to damaging factors. The eDNA concentration is regulated by the endonucleases activity. Objectives. Study of the eDNA concentration and endonuclease activity in the plasma of children with cystic fibrosis. Methods. The concentration of eDNA was determined in 115 children, and nuclease activity was determined in 117 children. The control group included 49 healthy children of the same age and sex. The eDNA was extracted by phenolic extraction. The concentration of extracellular DNA was measured by fluorescence with an intercalating dye PicoGreen (Invitrogen). The DNAse 1 activity in plasma samples was measured by means of radial diffusion. The data are presented as a median (Me) and quartiles (Q1 - Q3). Statistical analysis was performed using a nonparametric Mann-Whitney U test to compare the eDNA concentration and nuclease activity in groups of children with cystic fibrosis and control, and also to analyze the relationship between the eDNA concentration and the nuclease activity with the clinical characteristics of patients. Results. The eDNA concentration was lower than that of healthy children (p 80% does not differ from the control group. The eDNA concentration decreased along with a decrease of lung function (FEV1 <80%). Patients with deteriorated lung function and increased requirement for bronchodilators had low nuclease activity. Conclusion. Children with cystic fibrosis had lower eDNA concentration in comparison with the control. In patients with normal spirometry parameters, eDNA probably plays a metabolic role and its composition differs from that of the eDNA of patients with impaired lung function. The nuclease activity of blood plasma in patients with cystic fibrosis decreased with age, and at the same time the progression of the disease was observed. Changes of the eDNA concentration and composition, as well as the nuclease activity in CF patients, can be important for predicting the course and severity of the disease. The interpretation of the qualitative composition of the eDNA requires further study to determine its role in the development of the chronic inflammatory process in CF. The study of eDNA and nuclease activity in CF can be used for development of new pathogenetic treatment modalities

ВЛИЯНИЕ ВНЕКЛЕТОЧНОЙ ДНК И НУКЛЕАЗНОЙ АКТИВНОСТИ ПЛАЗМЫ НА ТЕЧЕНИЕ МИКРОБНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА В ДЫХАТЕЛЬНОМ ТРАКТЕ ПРИ МУКОВИСЦИДОЗЕ

Background. Cystic fibrosis is a hereditary multi-organ disease. The involvement of the respiratory system due to chronic inflammation and a chronic infectious process is the main cause of death in 90% of cases. Currently, chronic inflammation in the respiratory tract in cystic fibrosis is being actively studied and new approaches to therapy are being developed. Circulating extracellular DNA/cell-free DNA (eDNA/cf DNA) is present in the bloodstream and other biological fluids of both healthy and sick individuals. The eDNA concentration is increased during exacerbation of several illnesses and in cases of exposure to damaging factors. The eDNA concentration is regulated by the endonucleases activity. Objectives. Study of the eDNA concentration and endonuclease activity in the plasma of children with cystic fibrosis. Methods. The concentration of eDNA was determined in 115 children, and nuclease activity was determined in 117 children. The control group included 49 healthy children of the same age and sex. The eDNA was extracted by phenolic extraction. The concentration of extracellular DNA was measured by fluorescence with an intercalating dye PicoGreen (Invitrogen). The DNAse 1 activity in plasma samples was measured by means of radial diffusion. The data are presented as a median (Me) and quartiles (Q1 - Q3). Statistical analysis was performed using a nonparametric Mann-Whitney U test to compare the eDNA concentration and nuclease activity in groups of children with cystic fibrosis and control, and also to analyze the relationship between the eDNA concentration and the nuclease activity with the clinical characteristics of patients. Results. The eDNA concentration was lower than that of healthy children (p 80% does not differ from the control group. The eDNA concentration decreased along with a decrease of lung function (FEV1 80%,  содержание вкДНК не отличалось от показателей контрольной группы. При снижении функции легких (ОФВ1<80%) концентрация вкДНК понижалась. Больные со сниженной функцией легких и повышенной потребностью в бронходилятаторах имели низкую  нуклеазную активность. Заключение. Дети с муковисцидозом имели низкую концентрацию вкДНК в сравнени с контролем. У пациентов с нормальными показателями спирометрии вкДНК вероятно играет метаболическую роль и отличается по составу вкДНК пациентов со сниженной функцией легких. Снижение уровня нуклеазной активности с возрастом происходит одновременно с прогресссированием заболевания. Изменение концентрации и состава вкДНК, а также уровень нуклеазной активности у больных МВ может иметь значение для прогнозирования тяжести течения заболевания. Расшифровка качественного состава вкДНК при муковисцидозе требует дальнейшего изучения для определения его роли в развитии хронического воспалительного процесса. Изучение вкДНК и нуклеазной активности при МВ может быть использовано в разработке нового патогенетического  лечения

Эпидемиология гепатита C в Московской области: данные регионального регистра и скрининга на антитела к HCV

Background: Epidemiological characteristics of chronic hepatitis C virus (HCV) infection presented in the literature are not representative for the real situation with its incidence and prevalence in the Russian Federation. In the Moscow Region, which is the second largest population in the Russian Federation (7.2 million people), the Moscow Regional Registry of patients with hepatic disorders has been continuously maintained since 2010, as well as screening programs for anti-HCV positive individuals. Analysis of this data allows for generalization of the results obtain to the general population and for description of the prevalence of the infection among adult population of the Russian Federation. Aim: To analyze the epidemiological situation with chronic hepatitis C in the Moscow Region. Materials and methods: We analyzed data from the Moscow Regional Registry of patients with hepatic disorders as per April 2016, as well as the results of large scale screening of the population of the Moscow Region with oral express test for anti-HCV antibodies (OraQuick HСV Rapid Antibody Test). Based on the registry, we assessed the following parameters of the patient cohort with chronic HCV infection (n = 17 182): age, gender, HCV genotype, grade of liver fibrosis, allele variants of interleukin 28В. Within the large scale screening program among the population of the Moscow Region, 1447 individuals from 6 districts of the region were screened for anti-HCV antibodies. Results: As per April 2016, the proportion of patients with chronic viral hepatitis in the Registry was 75.3% (n = 12 938 of 17 182). The vast majority of them (80.3%, or n = 10 393) had chronic hepatitis C, with 84% (n = 8726) of referrals were patients of productive age (from 20 to 50 years). 8.4% (n = 873) of all HCV infected patients had liver cirrhosis. Although the proportion of patients with cirrhosis was negligibly low ( 1.5%) in patients below 30 years of age, it was progressively increasing with age, with a maximum of 23.8% in those above their 50-es. As far as the HCV genotype distribution is concerned, it was as follows: genotype 1, 54.1% (n = 5622) of patients, genotype 2, 7.2% (n = 747), genotype 3, 38.4% (n = 3990). According to the results of assessment of IL28B genetic polymorphisms (n = 3212), СС rs12979860, which is associated with the most favorable sensitivity to interferon α, was found in 27.5% (n = 883), СТ allele, in 58.4% (n = 1876), and ТТ in 14,1% (n = 453). Prevalence of HCV infection in the Moscow Region, assessed by the screening program, is 1.38% of adults, or 77 200 anti-HCV positive persons, whereas estimated number of patients with chronic hepatitis C may amount to 54 000 to 61 700. Conclusion: HCV infection is the most prevalent among other viral hepatites in the Moscow Region (80.3%), and the largest numbers of infected individuals are of productive age. Almost three quarters of these patients are referred for medical care at the stage of minimal liver injury, and antiviral therapy can be used on an elective basis. Knowing the proportion of patients with liver cirrhosis (8.4%) allows for planning of the need in emergency treatments. The true prevalence of HCV infection estimated from the results of the screening program is at least 5-fold higher than that in the Registry. This indicates the necessity to upgrade the system of primary assessments. In particular, it seems reasonable to include detection of anti-HCV antibodies into the list of obligatory screening laboratory tests.Актуальность. Эпидемиологические характеристики хронической инфекции вируса гепатита C (HCV), представленные в литературе, не отображают реальной ситуации с заболеваемостью и распространенностью этой патологии в Российской Федерации. В Московской области, втором по численности регионе Российской Федерации (население 7,2 млн), с 2010 г. непрерывно функционирует Московский областной регистр больных заболеваниями печени, а также проводятся скрининговые программы по выявлению людей с положительными антителами к HCV. Анализ этих данных позволяет экстраполировать полученные показатели на общую популяцию, характеризуя масштаб инфекции среди взрослого населения Российской Федерации. Цель – анализ эпидемиологической ситуации с хроническим гепатитом С в Московской области. Материал и методы. Проведен анализ данных Московского областного регистра больных заболеваниями печени по состоянию на апрель 2016 г. и результатов программы массового скрининга жителей Московской области с помощью орального экспресс-теста на антитела к HCV OraQuick HСV Rapid Antibody Test. На основании данных Регистра оценивались следующие параметры когорты больных с хронической HCV-инфекцией (17 182 чел.): возраст, пол, генотип HCV, стадия фиброза печени, аллельные варианты интерлейкина 28В. В рамках программы массового скрининга жителей Московской области на наличие антител к HCV обследованы 1447 человек из 6 районов Подмосковья. Результаты. Доля больных хроническими вирусными гепатитами (по данным Регистра на апрель 2016 г.) составила 75,3% (12 938 из 17 182 чел.). Подавляющее большинство из них – 80,3% (10 393 чел.) – больны хроническим гепатитом С, при этом 84% (8726 чел.) обращений приходится на активный трудоспособный возраст (от 20 до 50 лет). Среди всех обследованных пациентов с HCV-инфекцией цирроз печени диагностирован в 8,4% (873 чел.) случаев. Будучи ничтожно малой (менее 1,5%) у пациентов до 30 лет, доля цирроза печени прогрессивно нарастает с возрастом, достигая максимума (23,8%) у пациентов старше 50 лет. По генотипической структуре HCV пациенты распределились следующим образом: генотип 1 – 54,1% (5622 чел.), генотип 2 – 7,2% (747 чел.), генотип 3 – 38,4% (3990 чел.). Согласно результатам исследования генетических полиморфизмов IL28b (3212 пациентов), наиболее благоприятный в отношении чувствительности к интерферону-α генотип СС rs12979860 обнаружен у 27,5% (883 чел.), СТ – у 58,4% (1876 чел.), ТТ – у 14,1% (453 чел.). Распространенность HCV-инфекции в Московской области, оцененная по данным скрининговой программы, составляет 1,38% взрослого населения, или 77,2 тыс. человек с наличием положительных антител к HCV, а предполагаемое число больных хроническим гепатитом С может достигать 54–61,7 тыс. Заключение. HCV-инфекция преобладает среди прочих вирусных гепатитов в Московской области (80,3%), при этом большинство инфицированных находятся в трудоспособном возрасте. Почти ¾ пациентов обращаются за медицинской помощью на стадии минимально выраженных изменений печени, таким пациентам этиотропное лечение может быть назначено в плановом порядке. Известная доля пациентов на стадии цирроза печени (8,4%) позволит планировать объемы экстренной лекарственной помощи. Истинная распространенность HCV-инфекции, рассчитанная на основании данных скринингового исследования, выше фактической (данные Регистра) как минимум в 5 раз, что указывает на необходимость модернизации системы первичного обследования граждан. В частности, представляется целесообразным включить определение антител к HCV в обязательный скрининговый перечень лабораторных показателей

ВЛИЯНИЕ ВНЕКЛЕТОЧНОЙ ДНК И НУКЛЕАЗНОЙ АКТИВНОСТИ ПЛАЗМЫ НА ТЕЧЕНИЕ МИКРОБНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА В ДЫХАТЕЛЬНОМ ТРАКТЕ ПРИ МУКОВИСЦИДОЗЕ

Background. Cystic fibrosis is a hereditary multi-organ disease. The involvement of the respiratory system due to chronic inflammation and a chronic infectious process is the main cause of death in 90% of cases. Currently, chronic inflammation in the respiratory tract in cystic fibrosis is being actively studied and new approaches to therapy are being developed. Circulating extracellular DNA/cell-free DNA (eDNA/cf DNA) is present in the bloodstream and other biological fluids of both healthy and sick individuals. The eDNA concentration is increased during exacerbation of several illnesses and in cases of exposure to damaging factors. The eDNA concentration is regulated by the endonucleases activity. Objectives. Study of the eDNA concentration and endonuclease activity in the plasma of children with cystic fibrosis. Methods. The concentration of eDNA was determined in 115 children, and nuclease activity was determined in 117 children. The control group included 49 healthy children of the same age and sex. The eDNA was extracted by phenolic extraction. The concentration of extracellular DNA was measured by fluorescence with an intercalating dye PicoGreen (Invitrogen). The DNAse 1 activity in plasma samples was measured by means of radial diffusion. The data are presented as a median (Me) and quartiles (Q1 - Q3). Statistical analysis was performed using a nonparametric Mann-Whitney U test to compare the eDNA concentration and nuclease activity in groups of children with cystic fibrosis and control, and also to analyze the relationship between the eDNA concentration and the nuclease activity with the clinical characteristics of patients. Results. The eDNA concentration was lower than that of healthy children (p 80% does not differ from the control group. The eDNA concentration decreased along with a decrease of lung function (FEV1 80%,  содержание вкДНК не отличалось от показателей контрольной группы. При снижении функции легких (ОФВ1<80%) концентрация вкДНК понижалась. Больные со сниженной функцией легких и повышенной потребностью в бронходилятаторах имели низкую  нуклеазную активность. Заключение. Дети с муковисцидозом имели низкую концентрацию вкДНК в сравнени с контролем. У пациентов с нормальными показателями спирометрии вкДНК вероятно играет метаболическую роль и отличается по составу вкДНК пациентов со сниженной функцией легких. Снижение уровня нуклеазной активности с возрастом происходит одновременно с прогресссированием заболевания. Изменение концентрации и состава вкДНК, а также уровень нуклеазной активности у больных МВ может иметь значение для прогнозирования тяжести течения заболевания. Расшифровка качественного состава вкДНК при муковисцидозе требует дальнейшего изучения для определения его роли в развитии хронического воспалительного процесса. Изучение вкДНК и нуклеазной активности при МВ может быть использовано в разработке нового патогенетического  лечения

СОКРАЩЕННЫЙ КУРС «ТРОЙНОЙ» ПРОТИВОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ С ТЕЛАПРЕВИРОМ: ПРИНЦИПЫ ОТБОРА ПАЦИЕНТОВ

Background: The beginning of a new era of direct acting antivirals sets up its own rules, that is, to achieve the highest efficacy with the shortest duration of treatment. It is assumed that the use of the first generation of direct acting antivirals, similarly to interferon-free regimens, would allow for personalization of approaches to their prescriptions.Aim: To identify the most important parameters that can predict the greatest efficacy of triple antiviral therapy of 12 week duration in patients with chronic hepatitis C genotype 1.Materials and methods: The study included 204 patients with chronic hepatitis C virus (HCV) genotype 1 at an early stage of liver disease (METAVIR score F0-F2), who were either treatment-naive or had a history of relapse after standard of care antiviral therapy. In addition to routine work-up, all patients were screened for IL28B polymorphism; in the course of the treatment viral kinetics was assessed by an ultrasensitive polymerase chain reaction (PCR) (with lower limit of quantification of 12 IU/ml). Duration of the triple therapy (pegylated interferon-α2a, ribavirin and telaprevir) was reduced to 12 weeks if a rapid virological response was achieved; otherwise the patients continued their treatment in according with guidelines. Results: A complete rapid virological response was achieved in 174 patients (81.6%), in whom the duration of triple therapy was 12 weeks. According to the protocol, 25 patients with a partial rapid virological response continued their standard antiviral therapy for 12 weeks more. In those who achieved a rapid virological response, there was an association between IL28B-CC genotype at rs12979860 and maintenance of zero viremia at 12 weeks after termination of antiviral therapy (r = 0.38, p 0.001). In all such patients there was a stable virological response at 12 weeks of the follow-up. Monitoring of viral load after 14 days of antiviral treatment was not predictive of its success. The preliminary results of a shortened (12 week) course of triple telaprevir-based viral therapy allowed to identify the most significant parameters of 100% efficacy, i.e., absence of the virus in blood at 12 weeks after termination of antiviral therapy. Conclusion: A 12 week course of triple telaprevir-based combination therapy is an optimal regimen for achievement of a stable virological response after 12 weeks of the follow-up in treatment-naïve patients with HCV genotype 1 or with a relapse after previous conventional antiviral treatment, who have IL28B – CC polymorphism, are at an early stage of liver disease and who achieve a rapid complete virological response confirmed by a highly sensitive PCR.Актуальность. Наступление новой эры препаратов прямого противовирусного действия диктует свои правила – достижение максимальной эффективности при наименьшей продолжительности курса лечения. Предположительно, выровнять шансы на излечение при применении первых представителей этой группы препаратов – аналогично безинтерфероновым схемам противовирусной терапии – позволит персонифицированный подход к их назначению.Цель – определить наиболее значимые параметры, позволяющие прогнозировать наибольшую эффективность противовирусной терапии в «тройном» режиме с длительностью курса 12 недель у пациентов с хроническим гепатитом С 1-го генотипа. Материал и методы. В исследование включены 204 пациента с хроническим гепатитом С 1-го генотипа на начальных стадиях заболевания печени (F0–F2 по шкале METAVIR), ранее не получавших лечение или с рецидивом после предшествующего курса стандартной противовирусной терапии. На скрининге каждому пациенту помимо спектра необходимых лабораторно-инструментальных исследований проводилось определение полиморфизма IL28B, в процессе лечения изучали вирусную кинетику ультрачувствительным методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) (аналитическая чувствительность – 12 МЕ/мл). Условием сокращения курса «тройной» противовирусной терапии (пегилированный интерферон α2а, рибавирин, телапревир) до 12 недель было достижение быстрого вирусологического ответа. Остальные пациенты продолжали лечение в соответствии с рекомендованными сроками.Результаты. Полный быстрый вирусологический ответ был достигнут у 174 пациентов, для которых курс противовирусной терапии в «тройном» режиме составил 12 недель. По итогам лечения 81,6% больных достигли устойчивого вирусологического ответа через 12 недель периода наблюдения. По требованиям протокола 25 пациентов с наличием неполного быстрого вирусологического ответа продолжили стандартную противовирусную терапию на протяжении еще 12 недель. У лиц, достигших быстрого вирусологического ответа, выявлено наличие зависимости между генотипом СС IL28B в позиции rs12979860 и сохранением авиремии через 12 недель после окончания противовирусной терапии (r = 0,38, p 0,001). У всех пациентов с подобными характеристиками был зафиксирован устойчивый вирусологический ответ через 12 недель периода наблюдения.Мониторируемая вирусная кинетика через 14 суток противовирусной терапии не сыграла роли в оценке шансов на успех лечения. Предварительные результаты укороченного до 12 недель курса «тройной» противовирусной терапии с использованием телапревира позволили определить наиболее значимые параметры, позволяющие достигнуть 100% эффективности – авиремии через 12 недель после окончания противовирусной терапии. Заключение. Двенадцатинедельный курс «тройной» комбинированной терапии с телапревиром является оптимальным для достижения устойчивого вирусологического ответа через 12 недель после окончания противовирусной терапии у ранее не леченных пациентов с хроническим гепатитом С 1-го генотипа или рецидивом после предшествующего стандартного курса противовирусной терапии, генотипом СС IL28B на начальных стадиях заболевания печени при условии достижения полного быстрого вирусологического ответа, зарегистрированного высокочувствительным методом ПЦР