Маркеры развития рестеноза зоны реконструкции после эндоваскулярных вмешательств на артериях нижних конечностей

Restenosis of the reconstruction zone is one of the main postoperative complications of vascular reconstructions, which develops in 18–40% of cases and leads to an increase in the risk of limb loss to 20–25%. The search for new markers for predicting the development of this complication is an urgent problem today.Aim of study. To assess the dynamics of markers of apoptosis and cell proliferation at different times after endovascular intervention and their role in the development of restenosis of the reconstruction zone in patients with peripheral arterial disease (PAD).Material and methods. The clinical study included 30 patients with PAD stage III disease. After further examination, the patients underwent endovascular intervention on the arteries of the femoral-popliteal segment. If restenosis developed, the patients were re-operated. In patients before surgery, within the first hour, and then on days 1, 7, 14, 21, 30 after the operation, venous blood was taken to determine the markers Bax, sFas, PDGF BB using enzyme immunoassay.Results. After endovascular intervention, the first wave of apoptosis was triggered with an increase in the amount of proapoptotic protein Bax (p=0,00003) from 1 to 24 hours, followed by a decrease by day 7 (p=0.0008) compared to the amount on day 1. The PDGF BB level increased from day 1 after surgery (p=0.03) with maximum values on day 7 (p=0.0002) compared to the level on day 1. Then the second wave was triggered with a peak decrease in the level of the apoptosis inhibitor sFas on day 21 (p=0.002). After 9-12 months, restenosis of the intervention zone with a return of limb ischemia developed in 10 patients. During the first hour (p=0.004) in patients with restenosis, the level of Bax protein was significantly increased, with an increase in the level of PDGF BB by day 7 (p=0.011), and sFas by day 21 (p=0.0001), PDGF BB by the end of 1 month (p=0.004) compared to values in patients without this complication.Conclusion. 1. Endovascular intervention causes two waves of apoptosis in the postoperative period. The first wave is associated with an increase in Bax protein in the first hours, followed by an increase in PDGF BB on day 7. The second wave of apoptosis is due to a decrease in the inhibitor of apoptosis — sFas for 21 days against the background of the shift of the PDGF BB to the initial level. 2. An increase in Bax protein within the first hours after surgery in the course of PDGF BB growth on day 7 with an increased amount of sFas on day 21 leads and PDGF BB by the end of 1 month leads to the development of restenosis of the intervention area. Рестеноз зоны реконструкции является одним из основных послеоперационных осложнений оперативных вмешательств на артериях нижних конечностей, который развивается в 18–40% случаев и ведет к развитию тромбоза зоны реконструкции и увеличению риска потери конечности до 20–25%. Поиск новых маркеров прогнозирования развития данного осложнения у пациентов с облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей (ОААНК) является актуальной проблемой на сегодняшний день.Цель исследования. Оценка динамики маркеров апоптоза и пролиферации клеток в различные сроки после эндоваскулярного вмешательства и их роль в развитии рестеноза зоны реконструкции у пациентов с ОААНК.Материал и методы. В исследование были включены 30 пациентов с ОААНК с III стадией заболевания. После дообследования пациентам было выполнено эндоваскулярное вмешательство на артериях бедренно-подколенного сегмента. В случае развития рестеноза зоны вмешательства пациенты были повторно оперированы. У пациентов до операции в первый час, а затем на 1-е, 7-е, 14-е, 21-е, 30-е сутки после операции была взята венозная кровь для определения маркеров Вах, sFas, PDGF BB с помощь иммуноферментного анализа.Результаты. После эндоваскулярного вмешательства происходил запуск первой волны апоптоза с повышением в крови количества белка Вах (р=0,00003) с 1 по 24 часа с его последующим снижением к 7-м суткам (р=0,0008) по сравнению с количеством на 1-е сутки. Уровень PDGF BB возрастал с 1-х суток после операции (р=0,03) с максимальными значениями на 7-е сутки (р=0,0002) по сравнению с уровнем на 1-е сутки. Затем происходил запуск второй волны с пиковым снижением уровня ингибитора апоптоза sFas на 21-е сутки (р=0,002). У 10 пациентов через 9–12 месяцев развился рестеноз зоны вмешательства с возвратом ишемии конечности. В первый час (р=0,004) у пациентов с рестенозом был статистически значимо повышен уровень белка Вах, при повышении PDGF ВВ на 7-е сутки (р=0,011), а sFas на 21-е сутки (р=0,0001), PDGF ВВ к концу 1-го месяца (р=0,004) по сравнению со значениями у пациентов без данного осложнения.Выводы. 1. Эндоваскулярное вмешательство вызывает две волны апоптоза в послеоперационном периоде. Первая волна связана с повышением содержания белка Вах в первые часы с последующим увеличением PDGF ВВ на 7-е сутки. Вторая волна апоптоза обусловлена снижением уровня ингибитора апоптоза — sFas на 21-е сутки на фоне сдвига PDGF ВВ к исходному уровню. 2. Повышение содержания белка Вах в первые часы после операции на фоне роста PDGF BB на 7-е сутки при увеличенном количестве sFas на 21-е сутки и PDGF ВВ к концу 1-го месяца ведет к развитию рестеноза зоны вмешательства.

Intrinsic coagulation cascade factors and hemostatic markers of endothelial dysfunction in patients with peripheral artery disease

АРТЕРИОСКЛЕРОЗ ОБЛИТЕРИРУЮЩИЙВНУТРЕННИЙ КАСКАД КОАГУЛЯЦИИГЕМОСТАТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫДИСФУНКЦИЯ ЭНДОТЕЛИЯАЗОТА ОКСИДЫАЗОТА ОКИСЬАЗОТА (II) ОКСИДВИЛЛЕБРАНДА ФАКТОРСОСУДИСТЫЕ ХИРУРГИЧЕСКИЕ ОПЕРАЦИИЦель. Оценка активности факторов внутреннего каскада коагуляции и гемостатических маркеров дисфункции эндотелия у пациентов с облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей (ОААНК) до и после эндоваскулярных вмешательств. Материал и методы. В исследование было включено 80 пациентов с ОААНК IIБ-III стадии по А. В. Покровскому-Фонтейну. 40 пациентов с ОААНК подверглись эндоваскулярным вмешательствам на аорто-бедренно-подколенном сегменте (группа А), и 40 пациентов прошли консервативное лечение (группа В). Пациентам было проведено физикальное обследование, ультразвуковая допплерография (УЗДГ), дуплексное сканирование (УЗДС)/рентгеноконтрастная ангиография артерий нижних конечностей. Через 3 и 6 месяцев после проведенного лечения пациенты повторно прошли физикальное обследование, УЗДГ и УЗДС артерий нижних конечностей. При включении пациентов в исследование и через 3 месяца после операции были взяты образцы венозной крови для оценки активности факторов VIII, IХ, ХI, фактора фон Виллебранда (ФВ), оксида азота II (NO) и протеина С (ПрС). Результаты. У пациентов группы А до оперативного вмешательства средние значения активности VIII, IX, XI факторов и ФВ были повышены по сравнению с нормой. Через 3 месяца после операции наблюдался еще больший рост активности VIII, IX, XI факторов, сохранялся повышенный уровень ФВ при снижении показателей метаболитов NO. У пациентов группы В были повышены средние значения активности IX, XI факторов, ФВ при нормальном уровне метаболитов NO и ПрС. Заключение. Анализ исходного состояния системы гемостаза у пациентов с ОААНК позволяет сделать вывод о развитии гиперкоагуляционного состояния на фоне нормального антикоагуляционного потенциала. Оперативное вмешательство способствует еще большему сдвигу в сторону гиперкоагуляции и нарушению функционального состояния эндотелия.Objective. To assess the activity of intrinsic coagulation cascade factors of coagulation and hemostatic markers of endothelial dysfunction in patients with atherosclerotic peripheral artery disease (PAD) before and after endovascular treatment. Methods. The study included 80 patients with PAD in the stage IIB-III of the disease according to Pokrovsky-Fontaine classification. 40 patients with PAD underwent endovascular interventions on the femoropopliteal segment (group A) and 40 patients underwent the conservative treatment (group B). Patients underwent physical examination, ankle-brachial index measurement (ABI), duplex ultrasound (DUS) and digital substraction angiography. 3 and 6 months after treatment patients underwent the same procedures. At inclusion of patients in the study and 3 months after the surgery, peripheral venous blood samples were collected to assess the activity of VIII, IX, XI, von Willebrand factor (VWF), protein С (PrC) and metabolites of nitric oxide II (NO). Results. In patients of the group А mean values of activity VIII, IX, XI factors and VWF were increased in comparison with the norm before the surgery. After 3 months the results shown a greater increase in activity VIII, IX, XI factors, the elevated levels of VWF remained in the reduction of NO metabolites. In patients of the group B the mean activity values of IX, XI factors and VWF were increased with normal levels of NO metabolites and PrC. Conclusions. The analysis of the initial state of the hemostasis system in patients with atherosclerotic peripheral artery disease allows us to conclude that the hypercoagulable state develops against the background of a normal anticoagulation potential. Operative procedures provide a further shift towards a hypercoagulable state and impaired functional activity of endothelium

Identification of alterations in the nucleotide sequence of the chromatin remodeling gene PBRM1 in clear cell renal cell carcinoma patients

Kidney cancer is a heterogeneous group of malignant tumors, the vast majority of which are renal cell carcinomas (RCC) of various morphological types, of which the most common is the clear cell renal cell carcinoma (ccRCC). Particular attention in the carcinogenesis of the ccRCC is given to a number of tumor suppressor genes located on the short arm of the third chromosome. One of these genes, which are inactivated in the case of ccRCC is the PBRM1 gene encoding the PBAF SWI/SNF subunit of the chromatin remodeling complex, BAF180. The PBRM1 gene is located on the short arm of the third chromosome in the 3p21 region near the von Hippel-Lindau gene (VHL), the mutation in which is the main event in the occurrence of ccRCC. The aim of our investigation is identification of changes in the nucleotide sequence of the PBRM1 tumor suppressor gene in patients with ccRCC. 210 pairs of DNA samples isolated from ccRCC tissue were studied. Analysis of changes in the nucleotide sequence of DNA was carried out by HRM analysis and direct sequencing. In the PBRM1 gene, two somatic mutations were found (c.233G>A (p.D45N) in exon 2, c.1675-1676delTC in exon 15) which were not described previously, and one known polymorphic variant rs17264436 (in exon 23). The frequency of detected mutations was 0.95 % of cases. Analysis of the allelic association for the polymorphic locus rs17264436 showed a statistically significant increase in the risk of developing advanced kidney cancer in carriers of allele rs17264436*A, which can be used in the development of prognostic marker panels. Perhaps the low frequency of mutations in the samples we studied is due to the fact that the inactivation of the PBRM1 gene takes place in other ways, and may also be due to the ethno-specificity of the studied group of patients

Алгоритм исследования глубоких бедренных сосудов с помощью ультразвукового дуплексного ангиосканирования

The deep femoral vessels are the main branches/donor vessels of the femoral vessels. Their branches penetrate the entire array of muscles of the posteromedial group and descend almost to the popliteal region, so they are able to both largely compensate for blood flow disorders in obliterating atherosclerosis of the arteries of the lower extremities, and in the presence of an anastomosis with the popliteal vein, influence the course of acute and chronic vein diseases. The modern standard for studying the vascular system of the lower extremities is duplex scan, but it allows deep femoral vessels to be examined only in the ostium segment up to 5–6 cm.AIM OF STUDY To determine the patency and state of blood flow in the deep femoral vessels throughout the entire length using ultrasound duplex angioscanning.MATERIAL AND METHODS The analysis of the results of 30 computed tomograms and 100 ultrasound scans of patients (aged 20 to 85 years) who underwent routine examination of the vascular system of the lower extremities in a polyclinic setting was carried out. The study was performed according to the original method (Patent for invention No. 2751819).RESULTS In the upper third of the thigh, the deep femoral vessels are located most superficially, 2.3±0.15 cm from the skin surface and 0.5±0.08 cm from the posterior wall of the femoral artery. In the middle third of the thigh, the depth of the deep femoral vessels is 3.5±0.9 cm from the skin surface and 4.3±0.24 cm from the posterior wall of the femoral artery. The deep femoral vessels are located between the vastus medialis and adductor longus muscles closer to the femur. In the lower third of the thigh, deep femoral vessels are located at a distance of 4.3±0.4 cm from the skin surface and 1.8±0.5 cm from the posterior wall of the femoral artery. Therefore, for ultrasound examination, a linear probe is first used, which is placed along the projection line of the femoral vessels in the upper third of the thigh, and then the orifice of the deep femoral vessels is visualized. Next, a convex probe is used, and in the middle and lower third of the thigh, it is drawn along a line located 2 cm medially to the projection line of the femoral vessels, while the probe itself deviates posteriorly by ~ 15°.CONCLUSION The research algorithm helps increase the length of the areas of the deep femoral artery and vein available for research and help the physician choose the optimal method of treating the patient. АКТУАЛЬНОСТЬ Глубокие бедренные сосуды являются основными ветвями/притоками бедренных сосудов. Их ветви пронизывают весь массив мышц заднемедиальной группы и опускаются почти до подколенной области, поэтому они способны как в значительной мере компенсировать нарушения кровотока при облитерирующем атеросклерозе артерий нижних конечностей, так и при наличии соустья с подколенной веной влиять на течение острых и хронических заболеваний вен. Современным стандартом исследования сосудистой системы нижних конечностей является дуплексное сканирование, но с его помощью глубокие бедренные сосуды могут быть обследованы только в приустьевом сегменте до 5–6 см.ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Определить проходимость и состояние кровотока в глубоких бедренных сосудах на всем протяжении с помощью ультразвукового дуплексного ангиосканирования (УЗДАС).МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ Проведен анализ результатов 30 компьютерных томограмм и 100 результатов УЗДАС пациентов (возраст от 20 до 85 лет), проходивших рутинное обследование сосудистой системы нижних конечностей в условиях поликлинического звена. Исследование было выполнено по оригинальной методике (Патент на изобретение № 2751819).РЕЗУЛЬТАТЫ В верхней трети бедра глубокие бедренные сосуды располагаются наиболее поверхностно — 2,3±0,15 см от поверхности кожи и 0,5±0,08 см от задней стенки бедренной артерии. В средней трети бедра глубина залегания глубоких бедренных сосудов — 3,5±0,9 см от поверхности кожи и 4,3±0,24 см от задней стенки бедренной артерии. Глубокие бедренные сосуды располагаются между медиальной широкой мышцей и длинной приводящей мышцей бедра ближе к бедренной кости. В нижней трети бедра глубокие бедренные сосуды находятся на расстоянии 4,3±0,4 см от поверхности кожи и 1,8±0,5 см от задней стенки бедренной артерии. Поэтому для ультразвукового исследования сначала используется линейный датчик, который ставится по проекционной линии бедренных сосудов в верхней трети бедра, а затем визуализируется устье глубоких бедренных сосудов. Далее используется конвексный датчик, и в средней и нижней трети бедра он проводится по линии, располагающейся на 2 см медиальнее проекционной линии бедренных сосудов, при этом сам датчик отклоняется кзади на ~ 15°.ВЫВОД Предложенный алгоритм исследования помогает увеличить протяженность доступных для исследования участков глубоких артерии и вены бедра и помочь врачу выбрать оптимальный метод лечения пациента

Coagulation Factor Activity and Hemostatic Markers of Endothelial Dysfunction in Patients with Peripheral Arterial Disease

Purpose: We aimed to evaluate the impact of intrinsic coagulation factors and hemostatic markers of endothelial dysfunction on complications in patients with atherosclerotic peripheral arterial disease (PAD). Materials and Methods : This prospective study enrolled 120 PAD patients at Fontaine stages 2b to 3 who underwent open surgical, endovascular, or conservative treatment. Coagulation factors (FVIII, FIX, and FXI) and endothelial hemostatic markers, including von Willebrand factor (vWF) activity and level, soluble endothelial protein C receptor, and plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) levels, were assessed. Results : At 3 months after open bypass grafting, activity of FVIII significantly increased from a median of 175% to 233% (P<0.001). At 3 months after endovascular treatment, the activities of FVIII, FIX, and FXI significantly increased from medians of 157%, 180%, and 156% to 184%, 218%, and 181%, respectively (P<0.05). Six patients with increased FVIII activity developed bypass graft thrombosis. Four patients in the endovascular group and three patients in the conservative treatment group with increased activity of vWF developed myocardial infarction (P=0.049). The subjects who developed restenosis had increased vWF activity (P=0.023) and decreased nitric oxide metabolite levels (P=0.003). Three subjects who received conservative treatment and developed PAD progression at 12 months had increased PAI-1 activity (P=0.028). Conclusion : Patients with advanced PAD had a hypercoagulable status, and performance of open or endovascular revascularization was associated with further hypercoagulability. Increased activity of coagulation factors and altered levels of hemostatic markers of endothelial dysfunction were associated with PAD complications such as graft thrombosis, myocardial infarction, disease progression, and restenosis

The role of miRNA genes participating in VHL-HIF1α in clear cell renal cell carcinoma

Introduction. Much attention in ccRCC development is paid to VHL-HIF1α pathway genes. Numerous genes involved in the pathogenesis of ccRCC are targets for miRNA. Alteration in the nature of interaction with miRNA binding site as a result of a single nucleotide substitution may promote change the expression of target genes involved in the genesis and development of tumors.Purpose of research. Analysis of the role of polymorphic variants in the miRNA binding sites of the VHL-HIF1α gene pathways in ccRCC development.Materials and methods. We used 225 DNA samples isolated from the venous blood of ccRCC patients who are hospitalized to the Clinic of the Bashkir State Medical University, and 298 healthy individuals. The genotyping of miRNA binding site polymorphisms in VHL-HIFα-dependent pathway genes (rs10982724 of the DEC1 gene, rs406271 of the TFRC gene, rs10491534 of the TSC1 gene, rs1642742 of the VHL gene, rs3025033 of the VEGFA gene) was performed using Taq-man assays.Results. The frequency distribution of alleles and genotypes of rs1642742 of the VHL gene showed that rs1642742 *GG is a marker of the increased risk for ccRCC. In addition, rs10491534 * C allele was found to be the marker for severe ccRCC (p = 0.044; OR = 1.72 (CI = 1.012-2.911)), and rs10491534 * TT genotype (p = 0.044; OR = 0.55; (95% CI = 0.31–0.98)) of the TSC1 gene was shown to be a protective marker for ccRCC of severe duration.Conclusions. The study indicated the association of miRNA binding sites polymorphisms with the risk of ccRCC development and severity of disease. However, further studies of the genes are needed to establish their functional significance and role in the pathogenesis of ccRCC