A possible explanation for the discrepancy between ELISA and neutralising antibodies to tetanus toxin

The structure and protective activity of tetanus antibodies elicited in rabbits after whole-cell pertussis diphtheria-tetanus vaccine (DTPw) vaccination was studied. ELISA antibody levels and toxin neutralisation activity (TNT) were measured in individual serum samples. The ratio of symmetric and asymmetric (functionally monovalent) IgG molecules was determined by concanavalin A (Con A) chromatography. This test is based on the fact that the carbohydrate group responsible for the molecular asymmetry has high affinity for the lectin Con A. Asymmetric molecule ratio was observed to increase with immunisation time, as well as differences between TNT and ELISA levels. All serum samples were overestimated by ELISA as compared to TNT assay, in line with the markedly higher proportion of asymmetric molecules which have lower toxin neutralising activity. Protective levels could not be predicted reasonably from ELISA results below 0.222 IU/ml, because this methodology fails to discriminate between both types of antibodies and only an in vivo serum neutralisation procedure (TNT) reflects the true neutralising serum activity. Copyright (C) 2000 Elsevier Science Ltd.Fil: Dokmetjian, Jose Christian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Della Valle, C.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Lavigne, V.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: De Luján, Calcagno M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Físico Matemática; ArgentinaFil: Manghi, Marcela Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentin

Antivenenos ofídicos: comparación del desempeño de dos métodos de obtención

El envenenamiento por serpientes venenosas es frecuente en algunas zonas de Argentina, particularmente en las provincias del noreste y noroeste. Según datos del Programa Nacional de Ofidismo, el número de mordeduras es de alrededor de 1.200 anuales; son producidas casi totalmente por víboras del género Bothrops (yarará), en mucho menor número por Crotalus (cascabel) y en una cantidad todavía mucho más escasa por serpientes Micrurus (coral).Fil: Ávila, Lucía. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: de Marco, María Belén. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Fingermann, Matias. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Temprano, Guillermo Carlos. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Iácono, Rubén. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Dokmetjian, José Christian. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Cascone, Osvaldo. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentin

Variability of the protein composition of argentinian bothrops alternatus venom and its possible relationship with the biological activity

En esta revisión se pone de manifiesto la variabilidad en la composición proteica de los venenos de Bothrops alternatus entre distintas poblaciones de América, inclusive Argentina y entre ejemplares de la misma población, la cual refleja posibles diferencias funcionales. Los perfiles de proteínas de SDS-PAGE uni o bidimensionales del veneno de B.alternatus muestran una variabilidad significativa no sólo entre las diferentes poblaciones sino también entre venenos de individuos de una misma región. Las proteínas contenidas en las principales bandas de geles 1D SDS-PAGE o 2D SDS-PAGE fueron identificadas por espectrometría de masas. La variabilidad en la composición de los venenos se refleja también en diferencias en las actividades biológicas: dosis letal, actividad hemolítica indirecta, actividad coagulante, actividad hemorrágica y actividad proteolítica. Las proteínas identificadas involucran principalmente a fosfolipasas, Factor GPIb-BP, botrocetina, FactorIX/X de coagulación y metalo- y serin-proteinasas. Estos estudios pueden ser importantes para ser considerados en la producción de antivenenos más específicos.Studies on variability in the protein composition of Bothrops alternatus venoms from american regions – including Argentina – were reviewed. The main objective is to explore if such variability is responsible for functional differences. 1 or 2D SDS-PAGE indicate that variability exists not only between different regions but also between specimens of the same region. Proteins contained in the main gel bands of 1D SDS-PAGE or in some spots of 2D SDS-PAGE were identified by mass spectrometry. They involve mainly phospholipases, glycoprotein 1b binding factor, bothrocetin, coagulation factors IX/X, and metallo and serin proteinases. As expected, structural differences are reflected in biological activities such as lethal dosis, indirect haemolytic activity, coagulant activity and proteolytic activity. These studies are important for the production of more specific antivenoms.Fil: Ávila, Lucía. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; ArgentinaFil: Pavan, Carlos Humberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Biscoglio, Mirtha Josefa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; ArgentinaFil: Dokmetjian, Jose Christian. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; ArgentinaFil: Cascone, Osvaldo. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Fingermann, Matias. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Immune Maturation Effects on Viral Neutralization and Avidity of Hyperimmunized Equine Anti-SARS-CoV-2 Sera

Mass-vaccination against COVID-19 is still a distant goal for most low-to-middle income countries. The experience gained through decades producing polyclonal immunotherapeutics (such as antivenoms) in many of those countries is being redirected to develop similar products able to neutralize SARS-CoV-2 infection. In this study we analyzed the biological activity (viral neutralization or NtAb) and immunochemical properties of hyperimmune horses’ sera (HHS) obtained during initial immunization (I) and posterior re-immunization (R) cycles using the RBD domain of the SARS-CoV-2 spike protein as antigen. HHS at the end of the R cycle showed higher NtAb titers when compared to those after the I cycle (35,585 vs. 7000 mean NtAb, respectively). Moreover, this increase paralleled an increase in avidity (95.2% to 65.2% mean avidity units, respectively). The results presented herein are relevant for manufacturers of these therapeutic tools against COVID-19.Fil: Gonzalez Viacava, Myriam Belen. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Varese, Augusto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Mazzitelli, Ignacio Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Lanari, Laura Cecilia. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Avila, Lucía. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Garcia Vampa, Maria Julia. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Geffner, Jorge Raúl. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Cascone, Osvaldo. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Dokmetjian, Jose Christian. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: de Roodt, Adolfo Rafael. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Fingermann, Matias. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Antivenenos ofídicos: comparación del desempeño de dos métodos de obtención

El envenenamiento por serpientes venenosas es frecuente en algunas zonas de Argentina, particularmente en las provincias del noreste y noroeste. Según datos del Programa Nacional de Ofidismo, el número de mordeduras es de alrededor de 1.200 anuales; son producidas casi totalmente por víboras del género Bothrops (yarará), en mucho menor número por Crotalus (cascabel) y en una cantidad todavía mucho más escasa por serpientes Micrurus (coral).Fil: Ávila, Lucía. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: de Marco, María Belén. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Fingermann, Matias. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Temprano, Guillermo Carlos. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Iácono, Rubén. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Dokmetjian, José Christian. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Cascone, Osvaldo. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentin

Neutralising Antibodies against Ricin Toxin

The Centers for Disease Control and Prevention have listed the potential bioweapon ricin as a Category B Agent. Ricin is a so-called A/B toxin produced by plants and is one of the deadliest molecules known. It is easy to prepare and no curative treatment is available. An immunotherapeutic approach could be of interest to attenuate or neutralise the effects of the toxin. We sought to characterise neutralising monoclonal antibodies against ricin and to develop an effective therapy. For this purpose, mouse monoclonal antibodies (mAbs) were produced against the two chains of ricin toxin (RTA and RTB). Seven mAbs were selected for their capacity to neutralise the cytotoxic effects of ricin in vitro. Three of these, two anti-RTB (RB34 and RB37) and one anti-RTA (RA36), when used in combination improved neutralising capacity in vitro with an IC50 of 31 ng/ml. Passive administration of association of these three mixed mAbs (4.7 µg) protected mice from intranasal challenges with ricin (5 LD50). Among those three antibodies, anti-RTB antibodies protected mice more efficiently than the anti-RTA antibody. The combination of the three antibodies protected mice up to 7.5 hours after ricin challenge. The strong in vivo neutralising capacity of this three mAbs combination makes it potentially useful for immunotherapeutic purposes in the case of ricin poisoning or possibly for prevention

Venom gland transcriptomes of two elapid snakes (Bungarus multicinctus and Naja atra) and evolution of toxin genes

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Kraits (genus <it>Bungarus</it>) and cobras (genus <it>Naja</it>) are two representative toxic genera of elapids in the old world. Although they are closely related genera and both of their venoms are very toxic, the compositions of their venoms are very different. To unveil their detailed venoms and their evolutionary patterns, we constructed venom gland cDNA libraries and genomic bacterial artificial chromosome (BAC) libraries for <it>Bungarus multicinctus </it>and <it>Naja atra</it>, respectively. We sequenced about 1500 cDNA clones for each of the venom cDNA libraries and screened BAC libraries of the two snakes by blot analysis using four kinds of toxin probes; <it>i.e</it>., three-finger toxin (3FTx), phospholipase A2 (PLA2), kunitz-type protease inhibitor (Kunitz), and natriuretic peptide (NP).</p> <p>Results</p> <p>In total, 1092 valid expressed sequences tags (ESTs) for <it>B. multicinctus </it>and 1166 ESTs for <it>N. atra </it>were generated. About 70% of these ESTs can be annotated as snake toxin transcripts. 3FTx (64.5%) and <it>β </it>bungarotoxin (25.1%) comprise the main toxin classes in <it>B. multicinctus</it>, while 3FTx (95.8%) is the dominant toxin in <it>N. atra</it>. We also observed several less abundant venom families in <it>B. multicinctus </it>and <it>N. atra</it>, such as PLA2, C-type lectins, and Kunitz. Peculiarly a cluster of NP precursors with tandem NPs was detected in <it>B. multicinctus</it>. A total of 71 positive toxin BAC clones in <it>B. multicinctus </it>and <it>N. atra </it>were identified using four kinds of toxin probes (3FTx, PLA2, Kunitz, and NP), among which 39 3FTx-postive BACs were sequenced to reveal gene structures of 3FTx toxin genes.</p> <p>Conclusions</p> <p>Based on the toxin ESTs and 3FTx gene sequences, the major components of <it>B. multicinctus </it>venom transcriptome are neurotoxins, including long chain alpha neurotoxins (<it>α</it>-ntx) and the recently originated <it>β </it>bungarotoxin, whereas the <it>N. atra </it>venom transcriptome mainly contains 3FTxs with cytotoxicity and neurotoxicity (short chain <it>α</it>-ntx). The data also revealed that tandem duplications contributed the most to the expansion of toxin multigene families. Analysis of nonsynonymous to synonymous nucleotide substitution rate ratios (<it>dN</it>/<it>dS</it>) indicates that not only multigene toxin families but also other less abundant toxins might have been under rapid diversifying evolution.</p

Public production as a key factor for access to antivenoms in the Region of the Americas

Fil: Temprano Guillermo. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Dokmetjian, José Christian. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Aprea, Patricia. Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnología Médica (ANMAT); Argentina.Los accidentes causados por animales ponzoñosos afectan vastas zonas de América Latina, Sur de Asia, Sudeste Asiático, África subsahariana y Oceanía y representan un serio problema para la salud pública mundial. A partir de un análisis del panorama actual en materia de producción global de los antivenenos ofídicos y aracnídicos, se concluye que son productos semi-huérfanos. Esta situación plantea un escenario favorable para fortalecer su producción por parte de los laboratorios públicos. Los gobiernos deberán tomar una decisión política al respecto en aras de la equidad en la salud de la población. En la Región de las Américas, estas acciones podrían enmarcarse en un programa liderado por la Organización Panamericana de la Salud, para garantizar la disponibilidad de estos productos biológicos en centros asistenciales estratégicamente localizados. Se han identificado 12 establecimientos públicos productores de antivenenos en la Región entre los cuales los de Brasil y México son los mayores productores públicos. La gestión de estos laboratorios debe ser la propia de una organización industrial productora de bienes tangibles que no soslaye la planificación estratégica. Las autoridades regulatorias nacionales deberían ayudar a los laboratorios públicos que los producen prestándoles asesoramiento y consultoría sin perder la imparcialidad ni el rigor necesarios en la evaluación de sus sistemas de gestión de la calidad. Las nuevas tecnologías superiores de la producción a partir de plasma hiperinmune de mamíferos se encuentran en fase experimental. No se ha encontrado en la bibliografía información sobre su incorporación en las líneas de producción

La producción pública de antivenenos en la Región de las Américas como factor clave en su accesibilidad

RESUMEN Los accidentes causados por animales ponzoñosos afectan vastas zonas de América Latina, Sur de Asia, Sudeste Asiático, África subsahariana y Oceanía y representan un serio problema para la salud pública mundial. A partir de un análisis del panorama actual en materia de producción global de los antivenenos ofídicos y aracnídicos, se concluye que son productos semi-huérfanos. Esta situación plantea un escenario favorable para fortalecer su producción por parte de los laboratorios públicos. Los gobiernos deberán tomar una decisión política al respecto en aras de la equidad en la salud de la población. En la Región de las Américas, estas acciones podrían enmarcarse en un programa liderado por la Organización Panamericana de la Salud, para garantizar la disponibilidad de estos productos biológicos en centros asistenciales estratégicamente localizados. Se han identificado 12 establecimientos públicos productores de antivenenos en la Región entre los cuales los de Brasil y México son los mayores productores públicos. La gestión de estos laboratorios debe ser la propia de una organización industrial productora de bienes tangibles que no soslaye la planificación estratégica. Las autoridades regulatorias nacionales deberían ayudar a los laboratorios públicos que los producen prestándoles asesoramiento y consultoría sin perder la imparcialidad ni el rigor necesarios en la evaluación de sus sistemas de gestión de la calidad. Las nuevas tecnologías superiores de la producción a partir de plasma hiperinmune de mamíferos se encuentran en fase experimental. No se ha encontrado en la bibliografía información sobre su incorporación en las líneas de producción