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    Facteurs de transcription de type g-box binding factor et régulation de la biosynthèse des alcaloïdes de catharanthus roseus

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    Les facteurs de transcription sont des outils efficaces de l'ingénierie métabolique destinées à modifier la biosynthèse de composés d'intérêt naturellement synthétisés par les plantes (ex : biosynthèse des anthocyanes). Catharanthus roseus produit en faible quantité des alcaloïdes utilisés dans les traitements des cancers par chimiothérapie. Dans la souche cellulaire c20d, la biosynthèse des alcaloïdes est régulée négativement par une phytohormone : l'auxine. Ceci s'accompagne de la régulation de la transcription des gènes str et tdc qui codent des enzymes de biosynthèse. Ces gènes possèdent dans leur promoteur un élément cis-régulateur de type g-box, ce qui suggère que les g-box participent à la régulation coordonnée de l'expression de ces gènes. Une étude bio-informatique a permis de définir structurellement et fonctionnellement ces g-box binding factors de c. Roseus et à en décrire de nouvelles régions fonctionnelles en identifiant des séquences conservées. Une stratégie de rt-pcr a permis d'isoler deux adnc codant des gbf de c. Roseus. L'étude in vitro de ces protéines par la technique de retard sur gel a montré leur spécificité d'interaction avec les g-box des promoteurs des gènes str et tdc. Cette même technique a montré l'importance de l'état de phosphorylation de ces facteurs de transcription dans la modulation de leur activité d'interaction avec l'adn. In vitro, des expériences d'expressions transitoires de ces adnc ont révèlé un effet inhibiteur des gbf sur l'expression du gène str. De plus, certaines lignées, issues d'une stratégie d'expression stable en antisens des adnc crgbf, sont capables de surmonter l'effet inhibiteur de l'auxine sur l'accumulation alcaloïdique. Mais l'analyse moléculaire n'a pas permis de corréler des surexpressions antisens des adnc crgbf avec la production d'alcaloïdes. Les crgbf peuvent donc prendre part à la régulation de l'expression du gène str et à l'inhibition, par l'auxine, de la biosynthèse des alcaloïdes.TOURS-BU Sciences Pharmacie (372612104) / SudocSudocFranceF

    Etude fonctionnelle des facteurs de transcription AGL12 et CrMYC2 dans les processus de différenciation morphologique et de différenciation métabolique de racines et de cellules végétales cultivées in vitro

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    Ce travail de thèse a consisté à étudier les rôles joués par les facteurs de transcription AGL12 et CrMYC2 dans les processus de différenciation morphologique et/ou métabolique au niveau d'embryons somatiques de noyer et de suspensions cellulaires de Catharanthus roseus.L'expression du gène Agl12 d'Arabidospis thaliana stimule le développement des racines des embryons somatiques de noyer. Les cellules de C. roseus exprimant Agl12 permet s'organisent en pseudo-tissu et synthétisent de l'ajmalicine. Ces résultats assignent un rôle important à AGL12 lors de la différenciation racinaire.CrMYC2 est capable d'interagir avec la G-box du promoteur du gène Str, et est rapidement et transitoirement induit dans des cellules de C. roseus en réponse à un eliciteur fongique et au méthyl jasmonate. La sur-expression de CrMYC2 dans les suspensions cellulaires n'a pas d'effet sur la régulation de l'expression du gène Str, mais semble avoir un effet inhibiteur sur l'expression des gènes Dxs et Chs.The goal of this work was to characterize the roles of two transcription factors (AGL12 and CrMYC2) during the morphological and metabolic differentiation occuring in walnut somatic embryos and Catharanthus roseus cell suspensions.Overexpression of the Agl12 gene from Arabidopsis thaliana enhances the rooting abilities of walnut somatic embryos. C. roseus transgenic cells expressing this gene are grouped in globular body and biosynthetize ajmalicine. Taken together, these results suggest that AGL12 plays an important role in root differentiation processes.The CrMYC2 transcription factor, which interact with the G-box localized within the Str gene promoter, is rapidly and transiently induced in C. roseus cells in response to a treatment with a fungal elicitor or methyl jasmonate. The expression of CrMYC2 in transgenic cells has no significant impact on the regulation of the Str gene expression but seems to have an inhibitory effect on the expression of the Dxs and Chs.TOURS-BU Sciences Pharmacie (372612104) / SudocSudocFranceF

    Evaluation et prise en charge de la douleur aux urgences pédiatriques de l'hôpital de Pau

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    BORDEAUX2-BU Santé (330632101) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

    CrMYC1, a Catharanthus roseus elicitor- and jasmonate-responsive bHLH transcription factor that binds the G-box element of the strictosidine synthase gene promoter.

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    A cDNA encoding a bHLH transcription factor was isolated by the yeast one-hybrid system from a Catharanthus roseus cDNA library using the G-box element of the Strictosidine synthase gene promoter as bait. The corresponding protein (named CrMYC1) was shown to bind specifically to the G-box in yeast. In C. roseus suspension cells CrMYC1 mRNA levels are induced by fungal elicitor and jasmonate suggesting that CrMYC1 may be involved in the regulation of gene expression in response to these signals.Journal ArticleResearch Support, Non-U.S. Gov'tinfo:eu-repo/semantics/publishe
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