Avaliação de Kato-Katz e ELISA em pacientes infectados pelo Schistosoma mansoni antes e após o tratamento com Praziquantel

As técnicas de Kato-Katz (método padrão-ouro) e ELISA são dois métodos utilizados para diagnóstico da esquistossomose mansônica em áreas endêmicas para doença. O primeiro possui baixo custo e alta especificidade, porém, possui baixa sensibilidade aumentando os resultados falsos negativos. O segundo possui boa sensibilidade e pela alta imunogenicidade das infecções por Schistosoma, pode ser utilizado em conjunto com o primeiro na detecção e controle de cura da enfermidade. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar os métodos de Kato-Katz a partir da contagem de ovos nas fezes e ELISA pela dosagem de anticorpos no soro de pacientes infectados pelo S. mansoni antes e após 6, 8 e 10 meses da terapêutica com praziquantel. Os dois testes diagnósticos foram realizados em 38 indivíduos saudáveis e 38 indivíduos infectados por S. mansoni de áreas endêmicas e 29 indivíduos saudáveis de áreas não endêmicas. Dois examinadores realizaram a contagem de ovos nas fezes de todos os indivíduos sendo obtido o numero de ovos por grama de fezes (Opg). Para o ELISA foi utilizado antígeno de verme adulto (AVA) de S. mansoni. Ambos os testes foram realizados antes do tratamento em todos os indivíduos e três vezes após o tratamento nos indivíduos infectados. O teste t-Student ou ANOVA para dados pareados foram usados para análise estatística dos grupos, e para testar as diferenças encontradas pelo ANOVA foi aplicado o Least Significant Difference (LSD). Todas as conclusões foram baseadas no nível de significância de 5%. Comparado aos grupos controle, pacientes infectados revelaram níveis elevados de Opg e anticorpos IgG AVA-ELISA (p<0,001). Observou-se nos três intervalos pós-tratamento, diminuição nos níveis de IgG e nos valores de Opg (p<0,001) com contagens negativas de ovos a partir do 8º mês. No 10º mês pós-tratamento, os níveis de IgG encontrados no ELISA não diferenciaram significativamente dos valores dos grupos controle, ou seja, retornaram a valores considerados basais. A obtenção de valores nulos de Opg a partir do 8º mês e o declínio dos valores do ELISA aos valores do grupo controle no 10º mês demonstrou a eficácia do tratamento em zonas endêmicas e a utilidade do uso conjunto das duas técnicas como controle de cur

Evaluation of a nested-pcr for Mycobacterium tuberculosis detection in blood and urine samples

The polymerase chain reaction (PCR) and its variations, such as the nested-PCR, have been described as promising techniques for rapid diagnosis of tuberculosis (TB). With the aim of evaluating the usefulness of a nested-PCR method on samples of blood and urine of patients suspected of tuberculosis we analyzed 192 clinical samples, using as a molecular target the insertion element IS6110 specific of M. tuberculosis genome. Nested-PCR method showed higher sensitivity in patients with extrapulmonary tuberculosis (47.8% and 52% in blood and urine) when compared to patients with the pulmonary form of the disease (sensitivity of 29% and 26.9% in blood and urine), regardless of the type of biological sample used. The nested-PCR is a rapid technique that, even if not showing a good sensitivity, should be considered as a helpful tool especially in the extrapulmonary cases or in cases where confirmatory diagnosis is quite difficult to be achieved by routine methods. The performance of PCR-based techniques should be considered and tested in future works on other types of biological specimens besides sputum, like blood and urine, readily obtainable in most cases. The improving of M. tuberculosis nested-PCR detection in TB affected patients will give the possibility of an earlier detection of bacilli thus interrupting the transmission chain of the disease

Diferenciação de micobactérias por PCR multiplex

O trabalho visou à otimização de um método baseado na reação em cadeia da polimerase multiplex - para diferenciação de micobactérias de interesse para a saúde pública. A PCR Multiplex baseou-se na amplificação simultânea do genehsp65, presente em todo gênero Mycobacterium, do gene dnaJ, presente apenas em Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium e da sequência de inserção IS6110 presente no complexo Mycobacterium tuberculosis, gerando amplicons de 165pb, 365pb e 541pb, respectivamente. O limite de detecção foi de 1fg para o alvo hsp65, 100pg para o dnaJ e 0,1fg para o IS6110. A PCR multiplex detectou até 100pg de DNA de Mycobacterium tuberculosis. O sistema demonstrou ser específico e sensível na detecção de Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium e Mycobacterium smegmatis. Os resultados obtidos utilizando cepas de referência demonstraram que a PCR multiplex pode ser uma ferramenta rápida, sensível e específica na diferenciação de micobactérias