Paratuberculosis bovina: Efecto de las micobacterias ambientales en el diagnóstico serológico

Esta tesis pretende ser un aporte para el diagnóstico serológico de la paratuberculosis bovina a través del desarrollo y puesta a punto de una técnica de ELISA indirecto con el agregado de urea (ELISA-u) como agente caotrópico mejorador de la especificidad. Además, se realizó el aislamiento e identificación de micobacterias ambientales (MA) a partir de materia fecal y se probó el ELISA con sueros inmunoabsorbidos con MA mayormente identificadas. Se trabajó sobre tres rodeos con infección endémica y sobre muestras de suero ingresadas al servicio de diagnóstico del CEDIVE. Se procesaron más de 2000 muestras con ELISA-u. Además, se obtuvo el índice urea (IU), el cuál mejora la interpretación de los resultados. El ELISAu tuvo una sensibilidad del 52% y una especificidad del 91%. Con estadística Bayesiana se calculó un VPP de 62%, un VPN de 90%, un LR+ de 6 y el LR- de 0,46. La prueba de ROC determinó un AUC de 0.86 y de 0.90 para ELISA-u e IU respectivamente, sin que existan diferencias significativas (p= 0.13) entre pruebas. El odds ratio calculado para IU demostró que los individuos que presentan un IU por encima del 80 (expuestos) tienen 28 más probabilidades de tener PTBC, considerándose un fuerte factor de riesgo para el rodeo donde se encuentran esos individuos. La presencia de MA en la materia fecal mostró asociación estadística significativa con la positividad al ELISA-u (p=<0.00), siendo M. nonchromogenicum la cepa mayormente aislada; mientras que el uso de la urea como mejorador de la especificidad presentó diferencias estadísticas significativas comparado con la utilización de sueros inmunoabsorbidos con M. phlei y M. nonchromogenicum. Tanto el ELISA-u como el IU mostraron características operativas y predictivas más que alentadoras para la detección de animales con paratuberculosis, principalmente en mayores de 2 años.Facultad de Ciencias Veterinaria

Serological paired evaluation using virusneutralization test for IBR and BVD of bovines from Buenos Aires, Argentina, in the period 2000-2008

Se presentan los resultados retrospectivos de 936 sueros muestreados en forma pareada analizados con la prueba de virusneutralización para Rinotraqueítis Infecciosa Bovina (IBR) y Diarrea Viral Bovina (BVD) durante el periodo 2000 – 2008. En el 66% de los casos no se mencionó el motivo del muestreo, en el 22% de las muestras se mencionó vacas abortadas como causa de envío, un 9% se debió a casos de otra signología asociada a estas enfermedades y un 3% a control de planes de vacunación. El 55% de los sueros pareados ingresaron con los dos muestreos juntos, mientras que el 45% restante ingresó por separado. Se comparó la presencia de seroconversión con la prueba de Chi2 en las muestras pareadas sospechosas (vacas abortadas y animales con otra signología relacionada a IBR o BVD), con los resultados de las muestras pareadas no sospechosas (controles de planes de vacunación y muestras sin indicación del motivo de envío), solo observándose diferencias significativas para BVD (P = 0,0001). En el caso de BVD además se comparó la presencia de seroconversión en vacas abortadas y en animales con otros signos compatibles con estas enfermedades y no se observaron diferencias significativas (P = 0,1139). Los títulos serológicos encontrados en las muestras con y sin seroconversión fueron variados, observándose los más elevados en el título neutralizante final para BVD. Estos hallazgos demuestran que la presencia de títulos para IBR y BVD es elevada y que el muestreo pareado, aunque no resulte una práctica frecuente, nos permite interpretar mejor la etiopatogenia de estas enfermedades y evaluar las medidas profilácticas aplicadas para su control.We present retrospective results of 936 paired serum samples tested for infectious bovine rhinotracheitis (IBR) and bovine viral diarrhea virus (BVDV); samples taken during the period 2000 to 2008 were analyzed by a virus neutralization test. In 66% of the cases there was no mention for the sampling purpose, in 22% of the samples, aborted cows were the cause for shipment, in 9% it was due to causes related to other clinical signs compatible with these diseases and in 3% to a vaccination control plan. In the 55% paired serum samples the acute and convalescent samplings were analysed together, while the remainder 45% acute and convalescent specimens were analysed at different times. The presence of seroconversion was compared with Chi2 test between suspicious paired samples (aborted cows and animals with other clinical signs resembling IBR or BVDV), with unsuspected paired samples (vaccination control plan and samples without indication of the motive for shipment), significant differences were only found for BVD (P= 0.0001). In the case of BVD the presence of seroconversion was also compared between aborted cows and animals without clinical manifestations compatible with IBR or BVD, no significant differences were observed (P= 0,1139). The antibody titers found were diverse between samples with and without seroconversion, the higher neutralizing antibodies were observed for BVD. These findings show a high frequency of antibodies in serum for IBR and BVDV, paired sera although not a frequent practice, allows us to explain the etiopathogeny and evaluation of the prophylactic measures used for the control of these diseases.Centro de Diagnóstico e Investigaciones VeterinariasFacultad de Ciencias Veterinaria

Caso atípico de aneurisma disecante de aorta ascendente en un bovino Aberdeen Angus

Se describe un caso mortal de aneurisma aórtico disecante en una vaca Aberdeen Angus adulta, acontecido en un establecimiento del partido de Lezama, Pcia. de Bs. As. Argentina. Este tipo de lesiones vasculares son extremadamente raras en los bovinos. Los pocos reportes existentes en la bibliografía se refieren a aneurismas de vasos intra-abdominales en la raza Holstein; y principalmente afectan a la arteria gástrica izquierda, arteria celíaca, mesentérica craneal, aorta abdominal, arteria ruminal izquierda y derecha. Los aneurismas están bien descritos en humanos, y en menor medida en algunas especies de mamíferos y aves. En el hombre se relacionan fuertemente con arteriosclerosis, o con enfermedades hereditarias que afectan la producción de fibrilina (Síndrome de Marfan). En los equinos se reconoce como causa de aneurisma de la arteria mesentérica craneal a la migración de larvas de Strongylus vulgaris. En los pavos la ruptura espontánea de la aorta se asocia a carencia de cobre, malnutrición e hipertensión. La etiología en los bovinos permanece sin esclarecerse; aunque en algunos casos se ha trazado un paralelismo con el síndrome de Marfan humano. El objetivo de esta publicación es describir un caso de aneurisma de aorta ascendente, haciendo hincapié en los hallazgos macroscópicos e histopatológicos.Facultad de Ciencias Veterinaria

Brote de babesiosis bovina transmitido por garrapatas en Dolores, provincia de Buenos Aires

Se describe un brote de babesiosis trasmitido por garrapatas (Rhipicephalus microplus) en el partido de Dolores, provincia de Buenos Aires, Argentina. Dicho partido se encuentra dentro de la zona libre naturalmente de garrapatas. Novillos parasitados provenientes de Corrientes fueron los que introdujeron las garrapatas; que hallaron condiciones apropiadas de temperatura y humedad para completar un ciclo de desarrollo en territorio bonaerense. El brote ocasionó la muerte de 140 bovinos. Los signos clínicos más representativos fueron depresión e hipertermia marcada. A la necropsia, se observó esplenomegalia, riñones de color rojo oscuro o negro y hemoglobinuria. Las lesiones histopatológicas halladas fueron compatibles con una crisis hemolítica aguda. El diagnóstico de babesiosis se basó en la presencia de signos clínicos compatibles, en la observación de Babesia spp intraeritrocitaria en las tinciones con Giemsa, en las lesiones macroscópicas e histopatológicas, en el hallazgo de altos títulos de anticuerpos por ELISA y en la detección por PCR de material genético de Babesia bovis y Babesia bigemina en las muestras analizadas.The present work describes an outbrake of babesiosis transmitted by ticks (Rhipicephalus microplus) in the district of Dolores, province of Buenos Aires, Argentina. This district is located in the naturally ticks-free zone. Parasitized steers from Corrientes conveyed the ticks, which found appropriate conditions of temperature and humidity to complete their developmenta cycle in Buenos Aires´s territory. During the outbreak 140 bovines died. The most outstanding clinical signs were depression and severe hyperthermia. Necropsies revealed splenomegaly, dark or black kidneys and hemoglobinuria. Observed histophatologic lesions were consistent with an acute hemolytic crisis. The diagnosis of babesiosis was based on clinical signs, the observation of intraerythrocytic Babesia spp stained with Giemsa, gross and histopatological lesions, high antibodies titers measured by ELISA and the detection of genetic material of Babesia bovis and Babesia bigemina by means of PCR in the analyzed samples.Centro de Diagnóstico e Investigaciones Veterinaria

Determinación de células G en estómago de cerdos con <i>Helicobacter</i> spp.

El Helicobacter spp es un microorganismo Gram negativo que se aloja en la mucosa gástrica y es considerado como la principal causa de úlcera péptica. Estudios realizados confirman la implicancia del Helicobacter spp en patologías gástricas del hombre y otras especies animales como el cerdo. Hasta el presente, se han identificado 13 especies incluidas en el género Helicobacter, la mayoría de las cuales son colonizadoras eficientes del estómago de los mamíferos, pudiendo causar lesiones de manera análoga tanto en humanos como en animales. Es por ello que estas bacterias podrían ser patógenos responsables de zoonosis (Sleinsinger et al, 2000). Existen evidencias sustanciales que dichas bacterias trastornan la regulación fisiológica de la secreción ácida, predisponiendo así a la ulceración. La secreción del ácido gástrico es controlada, principalmente, por la hormona gastrina, la cual es sintetizada por las células G de la mucosa antral. El Helicobacter pylori trastorna el control inhibitorio de la liberación de gastrina y esto resulta en una excesiva secreción ácida, provocando úlceras pépticas. Los porcinos desarrollan de manera natural y frecuente úlceras gastroesofágicas (UGE), habiéndose observado úlceras colonizadas por Helicobacter spp. Existen escasos reportes de Helicobacter spp en mucosa gástrica de cerdos en Argentina. El objetivo de este trabajo es determinar la presencia de células G en estómagos de cerdo con diagnóstico de Helicobacter spp.Facultad de Ciencias VeterinariasCentro de Diagnóstico e Investigaciones Veterinaria

First report of caprine abortions due to <i>Chlamydia abortus</i> in Argentina

Infectious abortions of goats in Argentina are mainly associated with brucellosis and toxoplasmosis. In this paper, we describe an abortion outbreak in goats caused by Chlamydia abortus. Seventy out of 400 goats aborted. Placental smears stained with modified Ziehl-Neelsen stain showed many chlamydia-like bodies within trophoblasts. One stillborn fetus was necropsied and the placenta was examined. No gross lesions were seen in the fetus, but the inter-cotyledonary areas of the placenta were thickened and covered by fibrino-suppurative exudate. The most consistent microscopic finding was found in the placenta and consisted of fibrinoid necrotic vasculitis, with mixed inflammatory infiltration in the tunica media. Immunohistochemistry of the placenta was positive for Chlamydia spp. The results of polymerase chain reaction targeting 23S rRNA gene performed on placenta were positive for Chlamydia spp. An analysis of 417 amplified nucleotide sequences revealed 99% identity to those of C. abortus pm225 (GenBank AJ005617) and pm112 (GenBank AJ005613) isolates. To the best of our knowledge, this is the first report of abortion associated with C. abortus in Argentina.Facultad de Ciencias VeterinariasCentro de Diagnóstico e Investigaciones Veterinaria

Natural toxicosis in calves by consumption of Xanthium cavanilliesii burs (Cocklebur) in a Pipinas’ farm, Buenos Aires, Argentine.

Se describe un caso de intoxicación natural por consumo de frutos de Xanthium cavanilliesii, ocurrido en el mes de Mayo de 2009 en un establecimiento ubicado en Pipinas, Partido de Punta Indio, Bs. As. Argentina. Se vieron afectados 65 terneros de raza Aberdeen Angus que se encontraban confinados en un corral de aproximadamente ½ ha y consumían una dieta de expeller de maíz y heno de campo natural, en forma de rollo. La presentación clínica fue de curso agudo y se manifestó como un cuadro neurológico. Se observó una morbilidad del 15,3% (10/65) y una letalidad del 100%. La principal lesión hallada a la necropsia se observó en el hígado y se interpretó como “reticulado tóxico”. En el contenido ruminal y en algunos rollos se halló gran cantidad de abrojos. La histopatología de hígado evidenció hemorragia y necrosis coagulativa con distribución centrolobulillar. El diagnóstico de la intoxicación se basó en la observación de la signología clínica, en la lesión hepática macroscópica e histopatológica y en la evidencia del consumo de abrojos contaminantes del rollo. La intoxicación por frutos de Xanthium cavanilliesii parece no haber sido documentada en Argentina, por lo que este seria el primer caso reportado en el país.The present report describes a case of natural toxicosis by consumption of burs Xanthium cavanilliesii (Cocklebur) occurred in May 2009 in a farm from Pipinas, Buenos Aires, Argentine. Sixty five Aberdeen Angus calves were affected while being fed a diet of corn expeller and round bale hay of natural pasture, confined in a corral of approximately ½ ha. Clinical manifestations were acute with neurologic signs. Morbidity was 15.3% (10/65) and lethality 100%. The most important gross lesion was observed in liver and interpreted as “toxic- reticulated”. Numerous cocklebur burs were found inside the rumen contents and some round bale hay. Histopathology examination of the liver revealed marked centrolobular degeneration and necrosis with associated hemorrhage. The diagnosis of intoxication was based on observation of clinical signs, the gross and histopathological liver lesion and the evidence of the consumption of burs in the round bale hays. To our knowledge cocklebur toxicosis with burs of Xanthium cavanilliesii have been not previously reported in Argentine, and this would be the first reported case.Centro de Diagnóstico e Investigaciones Veterinaria

Bovine paratuberculosis: association between the urea index and the optical density of serum in the indirect Elisa technique

El presente trabajo analiza las asociaciones observadas entre las densidades ópticas de las muestras de sueros analizados por la técnica de ELISA indirecto para el diagnóstico de paratuberculosis bovina, con el denominado índice urea, el cual se obtiene de comparar las densidades ópticas de sueros expuestos y no expuestos a dicha sustancia. Se analizaron 592 muestras de sueros de tres establecimientos ganaderos, dos dedicados a la producción de carne y uno de leche, ubicados en la Provincia de Buenos Aires, Argentina. En todos los casos se halló correlación positiva entre las variables. Se discute el uso del índice urea como mejorador de la especificidad del ELISA convencional.This paper analyzes the associations observed between the optical densities of the serum samples analyzed by the indirect ELISA technique for the diagnosis of bovine paratuberculosis, with the so-called urea index, which is obtained from comparing the optical densities of exposed and unexposed sera said substance. 592 bovine serum simples belonging to two beef herds and one dairy herds were analyzed, located in the Province of Buenos Aires, Argentina. In all cases, a positive correlation was found between the variables. The use of the urea index as an enhancer of the specificity of the conventional ELISA is discussed.Facultad de Ciencias Veterinaria

Serological study of natural infection with IBR and BVD virus in beef calves

Se monitorearon los títulos serológicos y la seroconversion al virus de la diarrea viral bovina y al virus de la rinotraqueitis infecciosa bovina en 44 terneros de un rodeo de cría sin vacunar. Los títulos se siguieron mensualmente desde el nacimiento hasta los 15 meses de edad con la prueba de virus neutralización. A los 8 meses de vida el 50 % de los animales seroconvirtieron para ambas enfermedades, a los 15 meses de edad el 93% seroconvirtió a herpes virus bovino y el 100% al virus de la diarrea viral bovina. En diarrea viral bovina, los terneros de 9 meses de edad presentaron la mayor seroconversion estadística (P < 0.0001) seguida por el mes 8 (P < 0.0005), mes 14 (P < 0.0034) y el mes 12 (P < 0.0215). Para el virus de la rinotraqueitis infecciosa bovina la mayor seroconversion se observó a los 11 meses (P < 0.0001), seguida por el mes 13 (P < 0.0001), mes 5 (P < 0.0034), mes 10 (P < 0.0078), y mes 14 (P < 0.0215). En el transcurso del trabajo no se observaron signos clínicos o muertes compatibles con las enfermedades estudiadas.Serum titers and seroconversion to bovine viral diarrhea virus and infectious bovine rhinotracheitis virus in 44 calves in a non-vaccinated beef herd were monitored. Titers were followed monthly using a virus neutralization test from birth to 15 months of age. By 8 months 50% of calves had seroconverted, with 15 month seroconversion rates of 93% for infectious bovine rhinotracheitis virus and 100% for bovine viral diarrhea virus. Calves aged 9 month had the highest statistical seroconversion for bovine viral diarrhea virus followed by month 8 (P &lt; 0.0005), month 14 (P &lt; 0.0034) and month 12 (P &lt; 0.0215). For infectious bovine rhinotracheitis virus, the highest seroconversion was at 11 months (P &lt; 0.0001), followed by month 13 (P &lt; 0.0001), month 5 (P &lt; 0.0034), month 10 (P &lt; 0.0078), and month 14 (P &lt; 0.0215). No evidence of overt clinical signs or deaths were recorded in association with these diseases.Facultad de Ciencias Veterinaria

Medios de cultivo alternativos para el desarrollo de distintas micobacterias

Las micobacterias son bacilos Gram positivos y ácido alcohol resistentes; algunas de ellas se definen como medio ambientales, no patógenas y otras generan enfermedad en animales, humanos o ambos. La técnica diagnóstica considerada de oro es el cultivo bacteriológico, donde se utilizan distintos medios para determinar características fenotípicas de las colonias como su tamaño, color, rugosidad y su velocidad de crecimiento. Esta técnica es laboriosa y complicada debido a que, entre otros factores, estas bacterias son muy exigentes para su crecimiento y desarrollo. A los laboratorios que realizan el diagnóstico de enfermedades producidas por micobacterias les podría ser de utilidad contar con un cepario de micobacterias ambientales, ya que éstas se pueden utilizar para aumentar la especificidad de otras técnicas diagnósticas, como las serológicas. El objetivo de este trabajo es utilizar distintos medios de cultivo para el crecimiento de dos micobacterias ambientales (Mycobacterium phlei y Mycobacterium smegmatis) y una patógena (Mycobacterium avium subsp avium).Facultad de Ciencias Veterinaria