Aspectos patológicos e moleculares em baleia-jubarte (Megaptera novaeangliae) e lobo-marinho-sul-americano (Arctocephalus australis) no Sul do Brasil

Nesta tese estão incluídos três artigos: o primeiro é o relato de caso de linfoma linfocítico de pequenas células B (SLL-B) em um macho adulto de lobo-marinho-sul-americano (Arctocephalus australis) no estado do Rio Grande do Sul (RS). Na necropsia, o espécime apresentou mucosa pálida, estado corporal ruim e aumento significativo e generalizado dos linfonodos, além de nódulos tumorais multifocais brancos e branco-amarelados acometendo rins, intestino delgado, linfonodos e baço, além do aumento deste. Na histologia, havia proliferação neoplásica de linfócitos pequenos disposto em manto, pobremente delimitada e não encapsulada, com baixa atividade mitótica e moderadas anisocitose e anisocariose. Na técnica de imuno-histoquímica (IHQ), a neoplasia exibiu difusa e acentuada imunomarcação para os anticorpos CD79α e CD20 nos linfócitos neoplásicos e imunomarcação negativa para CD3. Assim, o diagnóstico SLL-B foi estabelecido. Os demais artigos versam sobre três baleias-jubarte (Megaptera novaeangliae) que encalharam vivas no RS e Santa Catarina em 2021 e 2022. O segundo artigo é sobre a caracterização de infecção por Brachycladium goliath nas três baleias-jubarte. Durante as necropsias, foram observadas áreas multifocais esbranquiçadas, firmes e irregulares na cápsula hepática e atrofia moderada do lobo hepático em um dos casos. Ao corte, havia evidenciação, proliferação e dilatação de ductos biliares, coloração amarelada do parênquima e áreas multifocais esbranquiçadas e firmes. Digenéticos encontrados nos ductos foram enviados para identificação morfológica e molecular. Os principais achados histológicos foram em região periportal, na qual havia dilatação dos ductos biliares e hiperplasia da parede ductal, com acentuado infiltrado inflamatório de linfócitos, plasmócitos e eosinófilos, contendo em seu interior estruturas parasitárias. Morfologicamente, o parasito foi identificado como B. goliath. Destes, amostras foram submetidas à extração de DNA para amplificação de internal transcribed spacer 2 (ITS-2) por PCR. Os amplicons foram purificados e sequenciados; os produtos gerados foram submetidos à análise BLAST para determinar as semelhanças mais próximas no GenBank. As sequências do estudo foram alinhadas com as sequências de ITS-2 de Brachycladium spp. disponíveis no GenBank usando Clustal/W v.1.8.1; uma matriz de identidade foi calculada com o software BioEdit e obteve-se amplicons de ITS-2 de dois indivíduos com 100% de homologia com B. goliath. No conhecimento dos autores, este é o primeiro estudo que registra M. novaeangliae como hospedeiro definitivo de B. goliath. No terceiro artigo, morbilivirose por Guiana Dolphin Cetacean Morbilivirus (GD-CeMV) foi diagnosticada em duas M. novaeangliae. Não foram observadas lesões associadas à morbilivirose na necropsia; na microscopia, os principais achados foram em sistema nervoso central (SNC), no qual observou-se infiltrado inflamatório perivascular moderado a acentuado composto por linfócitos e plasmócitos, além de moderada gliose e vacuolização da substância branca e raros corpúsculos de inclusão eosinofílico intracitoplasmático. Secções de pulmão, cérebro, cerebelo e linfonodos foram submetidas à IHQ com o anticorpo monoclonal anti-canine distemper virus. No SNC, neurônios e astrócitos exibiram imunomarcação acentuada, multifocal e citoplasmática. Submeteu-se amostras dos mesmos tecidos à extração de RNA e realizou-se a técnica de Semi-nested RT-PCR com primers para os genes L e P de Morbilivirus. Um fragmento de 411 pb do gene L foi amplificado em uma das amostras. Os produtos foram purificados e sequenciados, as sequências submetidas à análise BLAST, e múltiplos alinhamentos foram realizados com sequências recuperadas do GenBank utilizando ClustalW. A árvore filogenética baseada no gene da proteína do fragmento L foi construída com o software MEGA6. A sequência apresentou homologia com GD-CeMV (ID: MG845553.1). No conhecimento dos autores, estes são os primeiros relatos de GD-CeMV causando encalhe de espécimes vivos de M. novaeangliae, com descrição histopatológica.Three articles are included in this thesis: the first is a case report of small B-cell lymphocytic lymphoma (SLL-B) in an adult male of South American fur seal (Arctocephalus australis) in the state of Rio Grande do Sul (RS). At necropsy, the specimen showed pale mucosa, poor body condition and significant and generalized enlargement of the lymph nodes, in addition to white and yellowish-white multifocal tumor nodules affecting the kidneys, small intestine, lymph nodes and spleen, in addition to its enlargement. Histologically, there was neoplastic proliferation of small lymphocytes arranged in a mantle, poorly delimited and non-encapsulated, with low mitotic activity and moderate anisocytosis and anisokaryosis. In the immunohistochemical technique (IHC), the neoplasm showed diffuse and marked immunostaining for CD79α and CD20 antibodies in neoplastic lymphocytes and negative immunostaining for CD3. Thus, the SLL-B diagnosis was established. The other articles are about three humpback whales (Megaptera novaeangliae) that stranded alive in RS and Santa Catarina states. The second article is about the characterization of infection by Brachycladium goliath in the three humpback whales. During necropsies, multifocal whitish, firm, and irregular areas were observed in the hepatic capsule and moderate atrophy of the hepatic lobe in one of the cases. When cut, there was evidence, proliferation and dilation of the bile ducts, yellowish color of the parenchyma and whitish and firm multifocal areas. Digenetics found in the ducts were sent for morphological and molecular identification. The main histological findings were in the periportal region, in which there was dilatation of the bile ducts and hyperplasia of the ductal wall, with a marked inflammatory infiltrate of lymphocytes, plasmocytes and eosinophils, containing parasitic structures inside. Morphologically, the parasite was identified as B. goliath. Of these, samples were subjected to DNA extraction for amplification of internal transcribed spacer 2 (ITS-2) by PCR. The amplicons were purified and sequenced; generated products were subjected to BLAST analysis to determine the closest similarities in GenBank. The study sequences were aligned with the Brachycladium ITS-2 sequences. available from GenBank using Clustal/W v.1.8.1; an identity matrix was calculated with BioEdit software and ITS-2 amplicons were obtained from two individuals with 100% homology to B. goliath. To the authors' knowledge, this is the first study that records M. novaeangliae as a definitive host of B. goliath. In the third article, morbillivirus by Guyana Dolphin Cetacean Morbilivirus (GD-CeMV) was recorded in two M. novaeangliae. No lesions associated with morbillivirus disease were observed at necropsy; on microscopy, the main findings were in the central nervous system, in which a moderate to severe perivascular inflammatory infiltrate composed of lymphocytes and plasma cell was observed, in addition to moderate gliosis and vacuolation of the white matter and rare intracytoplasmic eosinophilic inclusion bodies. Lung, brain, cerebellum, and lymph node sections were subjected to IHC with the anti-canine distemper virus monoclonal antibody. In the central nervous system, neurons and astrocytes exhibited marked multifocal and cytoplasmic immunostaining. Samples from the same tissues were subjected to RNA extraction and the Semi-nested RT-PCR technique was performed with primers for the L and P genes of Morbilivirus. A 411 bp fragment of the L gene was amplified in one of the samples. The products were purified and sequenced. Sequences were subjected to BLAST analysis, and multiple alignments were performed with sequences retrieved from GenBank using ClustalW. The phylogenetic tree based on the L fragment protein gene was performed using the MEGA6 software. The sequence showed homology with GD-CeMV (ID: MG845553.1). To the authors' knowledge, these are the first reports of GD-CeMV causing stranding of live specimens of M. novaeangliae, with histopathological description

Fecal eukaryotic community of wild young South American (Arctocephalus australis) and Subantarctic fur seals (Arctocephalus tropicalis)

Eukaryotic microbes that reside in the mammalian gut have an important role in maintaining metabolism, digesting nutrients, and regulating the immune system. Therefore, changes in the microbial composition of the gut may generate adverse impacts on animal health. Using high-throughput sequencing, the present study examined the fecal eukaryotic community of wild young South American (Arctocephalus australis) (n = 2) and Subantarctic fur seals (Arctocephalus tropicalis) (n = 3). The results indicated there was a distinct and diverse eukaryotic community in the fecal samples of young wild fur seals. Perhaps based on the migratory habits of certain species and the difficulty in obtaining samples, the microbiota of wild animals is poorly understood. This work reports a number of phyla and classes of microorganisms never noticed in the fecal samples of wild fur seals before and provide insight into the fecal eukaryotic community of wild young South American and Subantarctic fur seals

Crassicaudiasis in three geographically and chronologically distant Cuvier’s beaked whales (Ziphius cavirostris) stranded off Brazil

The Cuvier’s beaked whale (CBW; Ziphius cavirostris) is a cosmopolitan marine mammal found in deep tropical and temperate waters of all oceans. CBW strandings have been recorded sporadically in Brazil; however, there is lack of information available regarding their causes of stranding and/or death. Herein, we report the epidemiologic, pathologic, morphologic parasitologic features and molecular identification of arterial and renal crassicaudiasis by Crassicauda sp. in three geographically and chronologically distant CBW stranded off Brazil. CBW-1 was an adult male stranded dead in Rio Grande do Sul State. CBW-2 was an adult female that stranded alive in Sergipe State and died shortly after. CBW-3 was and adult male that stranded dead in Santa Catarina State. The most relevant pathologic findings in these three CBW were severe, chronic proliferative mesenteric and caudal aortic endarteritis and chronic granulomatous and fibrosing interstitial nephritis with renicular atrophy and loss, and numerous intralesional Crassicauda sp. nematodes. Furthermore, CBW-1 had concomitant gram-negative bacterial pneumonia and pulmonary and hepatic thromboembolism. Morphologic analysis of renal adult nematodes identified Crassicauda sp. in the three CBW. Molecular analyses targeting the 18S and ITS-2 ribosomal loci of renal nematodes in CBW-2 and CBW-3 identified C. anthonyi. It is believed that severe arterial and renal crassicaudiasis likely resulted or contributed significantly to morbidity and death of these animals. These results expand the known geographical range of occurrence of crassicaudiasis in CBW. Specifically, the present study provides the first accounts of arterial and renal crassicaudiasis in CBW off the southern hemisphere, specifically in CBW off Brazil, and to the authors’ knowledge, it is the first record of C. anthonyi in the southern Atlantic Ocean

Estudo de causa mortis de ARCTOCEPHALUS AUSTRALIS (ZIMMERMANN, 1783) (LOBO-MARINHO-SUL-AMERICANO) no litoral norte do Rio Grande do Sul, Brasil

Arctocephalus australis (Zimmermann, 1783) (lobo-marinho-sul-americano), é um carnívoro marinho com ampla distribuição, que ocorre nas costas leste e oeste da América do Sul, desde o Peru até o Brasil. O maior número de registros de espécimes de A. australis no Brasil ocorre no estado do Rio Grande do Sul, onde estão localizadas as duas principais áreas de concentração de pinípedes no País. Apesar de não haver colônias reprodutivas da espécie no litoral brasileiro, todos os anos, principalmente no período entre junho e outubro, inúmeros animais (vivos e mortos) são encontrados no litoral do País. O objetivo deste trabalho foi caracterizar as causas de morte mais comuns nos animais que ocorrem no litoral norte do estado do Rio Grande do Sul em 2012 e 2013. Para isso, foi realizada necropsia em 50 animais encontrados mortos na praia. Dos animais necropsiados, 30% tiveram a morte associada com trauma severo, apresentando laceração da musculatura, hemorragia extensa e politraumatismo e 8% trauma severo com laceração da musculatura e hemorragia extensa. Ainda 14% tiveram como causa mortis alterações no trato respiratório, 6% apresentaram alterações no trato gastrointestinal, 4% no sistema muscular, 4% no sistema nervoso central, 2% no sistema hepático e 2% com alterações no trato reprodutivo. Ainda, 18% tiveram a morte associada à caquexia e em 12% não foi possível concluir a causa da morte. Os principais achados são discutidos, bem como fatores antrópicos e não antrópicos que podem ter causado ou contribuído para o óbito dos animais

Fibropapilomatose em tartarugas marinhas

A fibropapilomatose (FP) é uma doença debilitante caracterizada por múltiplos tumores cutâneos benignos que afeta principalmente tartarugas-verdes (Chelonia mydas). Sua etiologia é desconhecida, mas suspeita-se que o agente responsável pela doença seja um herpesvírus. A FP ocorre principalmente em animais que possuem comprimento curvilíneo de carapaça entre 40 e 80 centímetros. Acredita-se que a etiologia esteja também associada à vários outros fatores - como infecções bacterianas, radiação ultravioleta, contaminantes químicos, ectoparasitos - e não somente à um agente primário. As lesões são caracterizadas por simples ou múltiplas massas tumorais, com variação do tamanho de 0,1 à mais de 30 centímetros de diâmetro. Baseado nas caracterísitcas histológicas, a doença pode ser dividida em três tipos de lesões proliferativas: papilomas cutâneos, fibromas e fibropapilomas. Os tumores podem estar localizados nas nadadeiras, olhos, base da cauda, regiões da boca, cervical, inguinal, axilar, cloacal e da carapaça e também podem ser observados em órgãos internos, como pulmões, fígado, trato gastrintestinal e rins. O procedimento terapêutico recomendado é a excisão dos tumores com o animal anestesiado.Fibropapillomatosis (FP) is a debilitating disease characterized by multiple benign tumors that primarily affects green turtles (Chelonia mydas). Its etiology is unknown, but it is suspected that the agent responsible for the disease is a herpesvirus. FP occurs mainly in animals with curve carapace length between 40 and 80 cm. It is believed that the etiology is also associated with several other factors - such as bacterial infections, ultraviolet radiation, chemical contaminants, ectoparasites - not only to a primary agent. The lesions are characterized by single or multiple tumor masses, with size variation from 0.1 to more than 30 cm of diameter. Based on histology, the disease can be divided into three types of proliferative lesions: cutaneous papillomas, fibromas and fibropapillomas. Tumors may be localized in the fins, eyes, base of the tail, regions of the mouth, cervical, inguinal, axillary, cloaca and carapace. It can also be observed in internal organs like lungs, liver, gastrointestinal tract and kidneys. The recommended therapeutic procedure is the tumor's excision with the animal anesthetized