Aislamiento e identificación de Campylobacter fetus y Tritrichomona foetus en toros del Uruguay

El objetivo de este trabajo fue detectar la presencia de Campylobacter fetus y Tritrichomona foetus en muestras de esmegma prepucial de toros, y poder calcular la prevalencia estimada de estos agentes. También se realizó la comparación entre la rtPCR y el cultivo y aislamiento (gold standard), realizando las dos técnicas a partir de la misma muestra de esmegma prepucial, para poder estimar la sensibilidad y especificidad de la rtPCR. Se realizaron 12 muestreos en los cuales se obtuvieron 315 muestras de esmegma prepucial de toros de descarte enviados a planta de faena y de predios con sospecha de la enfermedad. Todas las muestras se procesaron y analizaron siguiendo el mismo protocolo. Se sembraron en medio de cultivo Skirrow y se realizó la rtPCR en el Laboratorio de Genética de Microorganismos de la Sección Genética Evolutiva de Facultad de Ciencias dentro de las 24 horas de obtenidas en todos los casos. También se sembró 1 ml de la misma muestra en medio de cultivo Diamond TYM para Tritrichomona foetus en el Laboratorio de la Plataforma de Salud Animal de INIA La Estanzuela, dentro de las 24 horas de obtenidas. La sensibilidad estimada de la rtPCR fue del 100% (entre 92,9% y 100%) y la especificidad del 99,4% (entre 98,3% y 100%), con un intervalo de confianza del 95%. Se obtuvieron 7 aislamientos de C. fetus; 6 se identificaron como C. fetus venerealis, y 1 como C. fetus fetus. La prevalencia por toro de C. fetus estimada fue de 2,2% por cultivo y aislamiento, y de 2,9% por rtPCR. La prevalencia por establecimiento de C. fetus estimada fue de 9,7% por cultivo y aislamiento, y de 12,9% por rtPCR, sin encontrar diferencias estadísticamente significativas entre los resultados, con un intervalo de confianza del 95%. No se encontró presencia de Tritrichomona foetus en ninguno de los cultivos realizados. En conclusión, se estima que C. fetus sigue estando presente en nuestro país, en establecimientos de diferentes regiones. Además, la rtPCR utilizada es una técnica adecuada para la detección de C. fetus directamente a partir de muestras de esmegma prepucial como técnica de screening

Accurate and fast identification of Campylobacter fetus in bulls by real-time PCR targeting a 16S rRNA gene sequence

Campylobacter fetus is an important animal pathogen that causes infectious infertility, embryonic mortality and abortions in cattle and sheep flocks. There are two recognized subspecies related with reproductive disorders in livestock: Campylobacter fetus subsp. fetus (Cff) and Campylobacter fetus subsp. venerealis (Cfv). Rapid and reliable detection of this pathogenic species in bulls is of upmost importance for disease control in dairy and beef herds as they are asymptomatic carriers. The aim of the present work was to assess the performance a real-time PCR (qPCR) method for the diagnosis of Campylobacter fetus in samples from bulls, comparing it with culture and isolation methods. 520 preputial samples were both cultured in Skirrow's medium and analyzed by qPCR. The estimated sensitivity of qPCR was 90.9% (95% CI, 69.4%–100%), and the specificity was 99.4% (95% CI, 98.6% - 100%). The proportion of C. fetus positive individuals was 2.1% by isolation and 2.5% by qPCR. Isolates were identified by biochemical tests as Cfv (n = 9) and Cff (n = 2). Our findings support the use of qPCR for fast and accurate detection of C. fetus directly from field samples of preputial smegma of bulls. The qPCR method showed to be suitable for massive screenings because it can be performed in pooled samples without losing accuracy and sensitivity.ANII: FSSA_X_2014_1_10525