Development of arbuscular mycorrhizal fungi in the presence of different patterns of Trifolium repens shoot flavonoids

We tested the effects of the flavonoid 3-methoxi-5,6,7,8-hydroxy-4'hydroxy flavone (NMHTV) isolated from shoots of non arbuscular mycorrhizal (AM) inoculated clover, and of the flavonoids 5,6,7,8-hydroxy-3-methoxy flavone (MH-1); 5,6,7,8-hydroxy-4'- hydroxy flavone (MH-2); and 5,7-hydroxy-3,4'-methoxy flavone (MH-3); isolated from AM clover (Trifolium repens) shoots, on spore germination, hyphal length, hyphal branches and the number of cluster of auxiliary cells or the number of secondary spores (Presymbiotic stage) and on the number of entry points and the percentage of AM colonized root of tomato (Lycopersicum esculentum) by the AM fungi Gigaspora rosea, Giaspora margarita, Glomus mosseae and Glomus intraradices (Symbiotic stage). Non significant effects of the flavonoids isolated from the shoot of mycorrhizal colonized clover on the presymbiotic and symbiotic stages of Gigaspora and Glomus endophytes were found. The flavonoid NMHTV isolated from non AM clover shoot, did not affect the percentage of germination of spores but significantly increased (P < 0.05) the other steps of the presymbiotic stage of Gi. margarita spores when 2 μM concentration was used. The symbiotic stage of Gi. margarita was also significantly increased when 2 μM of the flavonoid NMHTV was applied. This flavonoid had no effect on the presymbiotic development of G. mosseae, G. intraradices and Gi. rosea except when 8 μM concentration was used, which inhibited the hyphal length of Gi. rosea. These results suggest the possible implication of the flavonoid NMHTV in the susceptibility of tomato roots to the AM formation by Gi. margarita. The absence of stimulation of the AM presymbiotic and symbiotic stages in tomato by exogenous application of the newly synthesized flavonoids MH-1, MH-2, and MH-3, in clover shoots after AM colonization, indicated that the autorregulation of the AM symbiosis can be, at least partially, due to the disappearance of flavonoids in AM colonized plants that stimulated the AM symbiosis.Fil: Scervino, Jose Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental; ArgentinaFil: Ponce, María Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Della Mónica, Ivana Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; ArgentinaFil: Vierheilig, Horst. Universitat Fur Bodenkultur Wien; Austria. Consejo Superior de Investigaciones Científicas. Estación Experimental del Zaidín; EspañaFil: Ocampo, Juan Antonio. Consejo Superior de Investigaciones Científicas. Estación Experimental del Zaidín; EspañaFil: Godeas, Alicia Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Microbial interactions: effect of biocontrol and P solubilizing fungi in pre-symbiotic stages of arbuscular mycorrhizal fungi

El fósforo (P) es un macronutriente poco biodisponible para las plantas y limitante para su crecimiento. El uso de hongos solubilizadores de P (HS) es una alternativa prometedora en el aprovechamiento de la fertilización fosforada. Sin embargo, aún no se ha establecido si los HS tienen efectos antagónicos con la flora benéfica del suelo, como los hongos micorrícico arbusculares (HMA). Este trabajo estudia el efecto de HS sobre el desarrollo micorrícico pre-infectivo, el primer paso en la colonización de la raíz. Se expusieron esporas del HMA Gigaspora rosea a distintas concentraciones de exudados (0; 0,01; 0,1; 1; 3%) de HS (Talaromyces helicus L, T. helicus N, T. diversus y Penicillium purpurogenum) en un sistema in vitro con medio semilíquido. Se evaluó la germinación, elongación, ramificación y morfología del micelio pre-infectivo. Se observó que T. diversus incrementó solo la germinación y que T. helicus L promovió el desarrollo pre-infectivo. Estos resultados demuestran que la germinación y el desarrollo del micelio pre-infectivo de G. rosea pueden ser modificados en longitud y ramificación en función de la cepa solubilizadora estudiada, sugiriendo que las interacciones microbianas podrían impactar positivamente sobre la nutrición fosforada vegetal mediante la modificación del estadio previo a la simbiosis micorrícica.Microbial interactions: effect of biocontrol and P solubilizing fungi in pre-symbiotic stages of arbuscular mycorrhizal fungi. Phosphorus (P) is an essential macronutrient with a low bioavailability in soils, thus limiting the plant growth. The use of P solubilizing fungi (HS) is a promising alternative to increase the efficiency of P-fertilizers. However, it is not fully understood if HS have antagonist effects on beneficial soil microbiota, such as arbuscular mycorrhizal fungi (HMA). This work studies the effect of HS with biocontrol abilities against phytopathogenic fungi on the pre-infective stages development of HMA, the first step in mycorrhizal root colonization. Spores of the HMA Gigaspora rosea were exposed in vitro to different exudate concentrations (0; 0,01; 0,1; 1; 3%) of different HS fungal strains (Talaromyces helicus strain L7B, T. helicus strain N24, T. diversus and Penicillium purpurogenum) in a system containing semi-liquid medium. Spores germination, elongation, ramification and morphology of the pre-infective mycelium of HMA were evaluated. We observed that only T. diversus increased germination while T. helicus L7B promoted the elongation, ramification and produced changes in the mycelial morphology without affecting spores’ germination. These results showed that germination and pre-infective development of G. rosea can be modified in length and ramification as a function of the identity of the HS strain used, suggesting that microbial interactions can positively impact on plant P nutrition through the modification of the previous stage to mycorrhizal symbiosis.Fil: Della Mónica, Ivana Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Micología y Botánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Micología y Botánica; ArgentinaFil: Godeas, Alicia Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; ArgentinaFil: Scervino, Jose Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Patagonia Norte. Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medioambiente. Universidad Nacional del Comahue. Centro Regional Universidad Bariloche. Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medioambiente; Argentin

Inoculación de actinobacterias en B. auleticus y su efecto biocontrolador de patógenos fúngicos

Estudio de aislamientos de actinobacterias endófitas de raíces de Bromus auleticus. Se realizó la caracterización morfológica y fisiológica de las cepas in vitro. Se identificaron molecularmente las especies. Se realizaron ensayos in vitro de cultivos duales de las actinobacterias con hongos fitopatógenos. Se seleccionó una cepa de actinobacteria en función a los resultados in vitro y se realizó un ensayo en planta. Se obtuvo que las actinobacterias pueden revertir el efecto de fitopatógenos de pre-emergencia en B. auleticus y a la vez promover el crecimiento vegetal.Fil: Della Mónica, Ivana Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Micología y Botánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Micología y Botánica; Argentin

Fungal extracellular phosphatases: their role in P cycling under different pH and P sources availability

Aims: The aim of this work is to analyse the effect of pH, fungal identity and P chemical nature on microbial development and phosphatase release, discussing solubilization and mineralization processes in P cycling. Methods and Results: P solubilizing fungi (Talaromyces flavus, T. helicus L, T. helicus N, T. diversus and Penicillium purpurogenum) were grown under three pH conditions (6, 6·5 and 8·5) and with different inorganic (calcium, iron, aluminium and rock) and organic (lecithin and phytate) P sources. P solubilization, mineralization, growth and phosphatase production were recorded. Acid and neutral environments maximized fungal development and P recycling. P chemical nature changed the phosphatases release pattern depending on the fungal identity. Acid phosphatase activity was higher than alkaline phosphatases, regardless of pH or sample times. Alkaline phosphatases were affected by a combination of those factors. Conclusions: P chemical nature and pH modify fungal growth, P mineralization and solubilization processes. The underlying fungal identity-dependent metabolism governs the capacity and efficiency of P solubilization and mineralization. P solubilization and mineralization processes are interrelated and simultaneously present in soil fungi. Significance and Impact of the study: This study constitutes a reference work to improve the selection of fungal bioinoculants in different environmental conditions, highlighting their role in P cycling.Fil: Della Mónica, Ivana Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Micología y Botánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Micología y Botánica; ArgentinaFil: Godoy, Manuel Santiago. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Godeas, Alicia Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; ArgentinaFil: Scervino, Jose Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Patagonia Norte. Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medioambiente. Universidad Nacional del Comahue. Centro Regional Universidad Bariloche. Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medioambiente; Argentin

The co-existence between DSE and AMF symbionts affects plant P pools through P mineralization and solubilization processes

The capacity of dark septate endophytes (DSE; Phialocephala turiciensis, Acephala applanata, P. glacialis and Phaeomollisia piceae) to solubilize inorganic phosphate (P) and to mineralize the organic form was studied. We analysed the effect of DSE strains on P uptake by Trifolium repens in the presence or absence of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF). Phosphatases were observed both in the absence of the host plant and the organic resource, showing that the P mineralization process is not induced by the enzyme substrate or the host. DSE were more efficient at mineralizing organic P. Independently of the presence of AMF, DSE increased the pool of P in the soil, with significant differences being found in P levels among the different DSE. In contrast, plant P uptake was increased by AMF. The P content of plants increased with the co-inoculation of AMF and P. turiciensis or P. piceae. We hypothesize a close relationship between DSE and AMF in relation to P availability and uptake in plants. Whereas DSE increase the pool of P in the rhizosphere, AMF are responsible for P transfer to the host, with co-colonization of plants by DSE and AMF showing a synergistic outcome.Fil: Della Mónica, Ivana Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; ArgentinaFil: Saparrat, Mario Carlos Nazareno. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Fisiología Vegetal. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Instituto de Fisiología Vegetal; ArgentinaFil: Godeas, Alicia Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; ArgentinaFil: Scervino, Jose Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Patagonia Norte. Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medioambiente. Universidad Nacional del Comahue. Centro Regional Universidad Bariloche. Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medioambiente; Argentin

Efecto de la inoculación de Alternaria alternata, un hongo endófito, sobre la micorrización en pepino (Cucumis sativus)

Los organismos rizosféricos juegan un rol crítico en el crecimiento de las plantas y en su adaptación a los ecosistemas, favoreciendo la disponibilidad y toma de nutrientes. En este contexto, el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la infección de Alternaria alternata, un hongo endófito, sobre la micorrización y parámetros de crecimiento de Cucumis sativus (pepino). Plántulas de 8,5 semanas sembradas en suelo estéril fueron inoculadas con A. alternata (E+), y plántulas sin tratar (E-) fueron cultivadas en idénticas condiciones. A las 11 semanas, la mitad de las plantas de cada tratamiento se inocularon con el hongo micorrícico Gigaspora rosea. La eficiencia de inoculación evidenció un 85,71% de A. alternata entre los aislamientos obtenidos de plantas E+ y 0% en E-. Asimismo, se observó un incremento significativo de la micorrización total y vesículas en las plantas E+. No se detectaron diferencias entre los tratamientos para el peso de vástago, raíz, fruto y largo de vástago. Sin embargo, se encontró un mayor número de frutos en plantas no micorrizadas E+ respecto al resto de los tratamientos. Estos resultados sugieren que aunque A. alternata incrementa la productividad y micorrización, la interacción microbiana no mejora el crecimiento de las plantas en las condiciones estudiadas.Fil: Trebino, L. M.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Micología y Botánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Micología y Botánica; ArgentinaFil: D'jonsiles, María Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Micología y Botánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Micología y Botánica; ArgentinaFil: Della Mónica, Ivana Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Micología y Botánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Micología y Botánica; ArgentinaFil: Carmaran, Cecilia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Micología y Botánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Micología y Botánica; ArgentinaFil: Novas, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Micología y Botánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Micología y Botánica; ArgentinaXII Reunión Nacional Científico-Técnica de Biología de SuelosArgentinaUniversidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomí

Role of fungal endophytes on mycorrhizal-plant association and its impact on plant fitness

Along their evolutionary history, plants have established fine-tuned interactions with microorganisms present in their environment. An example of these interactions is the association with diverse groups of endophytes. Microbial endophytes also have the ability to modulate associations between plants and other symbionts, like arbuscular mycorrhizal fungi (AMF). A sizable body of evidence has shown the beneficial effects of AMF and/or fungal endophytes on plant fitness and development. Additionally, AMF and fungal endophytes living in the same plant may reciprocally interact, with remarkable consequences for the physiology of the host. In this chapter, we overview the state-of-the-art in the analysis of multipartite microbial interactions, with special focus on how belowground endophytes (dark septate endophytes and phosphate-solubilizing fungi) and aboveground endophytes (vertically transmitted endophytes like Epichloë and horizontally transmitted endophytes) interact with AMF and how this plant-microbial interactions affect AMF establishment, development, efficiency, and their overall impact on plant fitness.Fil: Della Mónica, Ivana Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Micología y Botánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Micología y Botánica; ArgentinaFil: Vignale, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - San Luis. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones Biológicas de San Luis. Universidad Nacional de San Luis. Facultad de Ciencias Físico Matemáticas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones Biológicas de San Luis; ArgentinaFil: Scervino, Jose Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Patagonia Norte. Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medioambiente. Universidad Nacional del Comahue. Centro Regional Universidad Bariloche. Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medioambiente; ArgentinaFil: Iannone, Leopoldo Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Micología y Botánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Micología y Botánica; ArgentinaFil: Novas, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Micología y Botánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Micología y Botánica; Argentin

Effects of the phosphate-solubilizing fungus Talaromyces flavus on the development and efficiency of the Gigaspora rosea-Triticum aestivum symbiosis

This study analyzed the interaction between thephosphate-solubilizing fungus (PSF) Talaromyces flavus andthe arbuscular mycorrhizal fungus (AMF) Gigaspora roseain vitro, and whether the in vivo application of T. flavuswas able to stimulate the efficiency of the symbiosis betweenG. rosea and wheat (Triticum aestivum). In vitro, the solublechemical substances released by T. flavus promoted the development of pre-infective mycelium from germinating AMFspores, increasing the length of each branch and the numberof branches. In vivo, the inoculation of T. flavus increasedplant wet and dry weight of mycorrhizal plants, regardless ofthe P conditions. AMF root colonization was inhibited underhigh P conditions but was promoted by T. flavus inoculation.The inoculation of T. flavus also improved the symbioticefficiency of mycorrhizal plants, measured as APA, and increased the total plant phosphate content and shoot:root phosphate ratio in mycorrhizal plants. To our knowledge, this is thefirst report where exudates produced by a PSF as T. flavuspromote pre-infective development, root colonization andsymbiotic efficiency of G. rosea in wheat. Finally, the roleof T. flavus in rhizosphere interactions is discussed.Fil: Della Mónica, Ivana Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental. Laboratorio de Microbiología del Suelo; ArgentinaFil: Stefanoni Rubio, Pablo Jose. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental. Laboratorio de Microbiología del Suelo; ArgentinaFil: Cina, Romina Paola. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental. Laboratorio de Microbiología del Suelo; ArgentinaFil: Recchi, Marina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental. Laboratorio de Microbiología del Suelo; ArgentinaFil: Godeas, Alicia Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental. Laboratorio de Microbiología del Suelo; ArgentinaFil: Scervino, Jose Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Patagonia Norte. Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medioambiente. Universidad Nacional del Comahue. Centro Regional Universidad Bariloche. Instituto de Investigaciones en Biodiversidad y Medioambiente; Argentin

Carbon and Nitrogen Sources Influence Tricalcium Phosphate Solubilization and Extracellular Phosphatase Activity by Talaromyces flavus

The aim of this work was to study phosphate (P) solubilization (and the processes involved in this event) by Talaromyces flavus (BAFC 3125) as a function of carbon and/or nitrogen sources. P solubilization was evaluated in NBRIP media supplemented with different carbon (glucose, sorbitol, sucrose, and fructose) and nitrogen (l-asparagine, urea, ammonium sulfate (AS), and ammonium nitrate (AN) combinations. The highest P solubilization was related to the highest organic acid production (especially gluconic acid) and pH drop for those treatments where glucose was present. Also P solubilization was higher when an inorganic nitrogen source was supplemented to the media when compared to an organic one. Although not being present an organic P source, phosphatase activity was observed. This shows that P mineralization and P solubilization can occur simultaneously, and that P mineralization is not induced by the enzyme substrate. The combination that showed highest P solubilization was for AN-glucose. The highest acid phosphatase activity was for AS-fructose, while for alkaline phosphatase were for AS-fructose and AN-fructose. Acid phosphatase activity was higher than alkaline. P solubilization and phosphatase activity (acid and alkaline) were influenced by the different carbon–nitrogen combinations. A better understanding of phosphate-solubilizing fungi could bring a better use of soil P.Fil: Stefanoni Rubio, Pablo Jose. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental; ArgentinaFil: Godoy, Manuel Santiago. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Della Mónica, Ivana Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental; ArgentinaFil: Pettinari, Maria Julia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Godeas, Alicia Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental; ArgentinaFil: Scervino, Jose Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Patagonia Norte. Instituto de Investigación en Biodiversidad y Medioambiente; Argentina. Universidad Nacional del Comahue; Argentin