Les monocytes, précurseurs des cellules dendritriques cutanées (utilisation en génie cellulaire et tissulaire)

Les cellules dendritiques (DC) de la peau : les cellules de Langerhans (LC) et les DC interstitielles/dermiques, sont des cellules présentatrices de l'antigène capables d'induire une réponse immunitaire primaire spécifique. L'utilisation de ces cellules en tant qu'outils alternatifs et prédictifs d'une irritation et/ou d'une sensibilisation cutanée est aujourd'hui incontournable pour les industries cosmétiques. L'objectif a donc été de développer un nouveau modèle de peau reconstruite " immunosensible " intégrant les deux populations de DC cutanées. Notre démarche expérimentale nous a conduit à conditionner in vitro des monocytes afin qu'ils génèrent des précurseurs de DC cutanées, qui intégrés dans les peaux reconstruites, seraient potentiellement capables de poursuivre leur différenciation et d'acquérir la fonctionnalité des LC et des DC dermiques. Ainsi, nous avons précisé le rôle de l'IL-4 et de l'IL-13 dans la différenciation in vitro des monocytes en DC de type LC. Parallèlement, nous avons développé un modèle de génération in vitro " simultanée " des deux populations de DC cutanées et démontré que les LC et DC dermiques (générées in vitro) empruntent des voies différentes de différenciation, d'activation/maturation et de migration, sous l'effet de divers agressions environnementales. Ainsi, notre modèle cellulaire qui tient compte des interactions et/ou du dialogue entre les DC se présente comme un nouvel outil innovant pour des applications industrielles telles que des tests d'allergie et/ou d'efficacité extrêmement spécifique de l'environnement cutané. Enfin, l'intégration dans les peaux reconstruites de précurseurs de DC cutanées (générés à partir de notre modèle) confirme nos résultats in vitro à savoir les voies distinctes de différenciation, d'activation/maturation et de migration des LC et des DC dermiques. Ainsi, notre modèle de production in vitro des deux populations de DC cutanées voit donc sa première utilisation dans le développement d'un modèle alternatif complet et reproductible de peau humaine reconstruite " immunosensible ".LYON1-BU.Sciences (692662101) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

Influence de la Matrice Extracellulaire sur les interactions des fibroblastes avec leurs partenaires cutanés (Kératinocytes, cellules dendritiques et cellules endothéliales)

La peau et les muqueuses malpighiennes telles que la muqueuse vaginale procurent une protection mécanique et immunologique à l'organisme humain et présentent une fonction régénératrice. Or, la Matrice Extracellulaire (MEC) joue un rôle majeur dans la régulation de la différenciation, du phénotype, des fonctions et des interactions cellulaires, en conditions basales et lors de la cicatrisation. Différents équivalents cutanés humains ont donc été développés comme outils alternatifs à l'expérimentation animale et afin d'étudier divers processus physio-pathologiques. Le premier est composé d'un équivalent dermique obtenu en absence de substrat matriciel exogène et par soumission à l'effet gravitationnel, d'un équivalent épidermique et d'une séparation physique entre ces deux compartiments afin de permettre leur analyse différentielle tout en autorisant la reconstruction de la jonction dermo-épidermique (JDE). La similitude de ce modèle avec la peau humaine normale non activée a été validée par des méthodes histologiques, moléculaires, protéiques et ultrastructurales ainsi qu'en réponse à l'application topique d'une molécule pharmaceutique de référence, i.e. un dérivé de l'acide rétinoïque. Nos résultats montrent que la présence d'un épiderme reconstruit différencié module le profil d'expression génique des fibroblastes ainsi que leur réponse au rétinoïde, et réciproquement. Les autres modèles mis au point sont d'une part un épiderme équivalent simple et d'autre part une peau reconstruite endothélialisée. Nous avons également analysé l'influence d'une solution commerciale de laminine, composant de la JDE, sur la physiologie kératinocytaire. Par ailleurs, nos travaux prouvent que l'environnement matriciel permet aux cellules dendritiques interstitielles de maintenir un état immature et de réaliser la sélection tropique des souches du Virus de l'Immunodéficience Humaine de type 1 observée in vivo. Enfin, pour la première fois, la capacité des fibroblastes dermiques à produire de l'IL-10, interleukine immunosuppressive, a pu être mise prouvée. En conclusion, les régulations dépendantes de la MEC mises en évidence par ces travaux contrôlent à la fois l'homéostasie cutanée et immunitaire et les réponses des différents types cellulaires à divers stimuli, i.e. infection virale et application topique de principes actifs ou formulations pharmaco-cosmétiques, et suggèrent rôle immunomodulateur du derme et des fibroblastesLYON1-BU.Sciences (692662101) / SudocSudocFranceF

Mécanismes de reconnaissance des signaux de danger par les cellules dendritiques de la peau et des muqueuses (application à l'étude de l'infection par le VIH dans un modèle de muqueuse vaginale humaine intégrant des cellules de Langerhans)

A l interface entre l immunité innée et adaptative, les cellules dendritiques (DC) jouent un rôle clef dans l induction de la réponse immunitaire. Dans la peau et les muqueuses, deux types de DC sont présentes : les cellules de Langerhans (CL) dans l épiderme et les épithéliums et les DC dans le derme et le chorion (DDC). Dans une première partie, nous nous sommes intéressées aux DDC humaines, qui contrairement aux CL, restent méconnues. Les principales caractéristiques phénotypiques et fonctionnelles des DDC humaines isolées ex vivo à partir de derme humain ont été étudiées et notamment leur expression des récepteurs de l immunité innée tels que les Toll Like Receptor (TLR) ou les lectines de type C. En parallèle, le profil d expression des TLR par les CL humaines fraîchement isolées a également été analysé. Ainsi, par l expression différentielle des récepteurs de l immunité innée, les CL et les DDC joueraient chacune un rôle spécifique dans l immunité de la peau et des muqueuses. Au sein des muqueuses génitales, plus particulièrement, elles interviennent dans la transmission de l infection par le Virus de l Immunodéficience Humaine (VIH). Dans une seconde partie, nous avons examiné les événements précoces dans la transmission du VIH à travers la muqueuse vaginale ainsi que le rôle des CL dans ce mécanisme. Pour cela, nous avons développé, à partir de cellules primaires humaines, un modèle de muqueuse vaginale reconstruite intégrant des CL. Nos travaux ont permis de mieux caractériser les populations de DC de la peau et des muqueuses ainsi que leur potentiel rôle dans l immunité périphérique, ce qui devrait être utile pour le développement de futures thérapies anti-infectieuses dans lesquelles de telles DC sont cibléesResiding at the interface between innate and adaptative immunity, dendritic cells (DC), and particularly Langerhans cells (LC) of epidermis and epithelia and DC of dermis or lamina propria (DDC), play a key role in the initiation of immune responses. In a first time, we analyzed the main phenotypic and functional characteristics of freshly isolated human dermal DC, as they were still barely studied contrary to human LC. We focused especially on the expression of innate receptors such as Toll Like Receptors (TLR) and C-type lectins. In parallel, TLR expression was also assessed in freshly isolated human LC. Thus, by their differential expression of innate receptors, LC and DDC would play each a specific role in cutaneous and mucosal immunity. Notably, within genital mucosa, they contribute to the transmission of HIV infection. Therefore, in a second time, we examined the early events in HIV entry into the vaginal mucosa and the precise role of LC in this transmission. For that purpose, we developed an in vitro model of vaginal mucosa, using human primary vaginal cells, in which LC could be integrated. In conclusion, we provided here a better characterisation of human LC and DDC as well as their potential function in peripheral immunity that should be useful for the development of future immunotherapies in which such DC are targetedLYON1-BU.Sciences (692662101) / SudocSudocFranceF

In situ identification of cycling Langerhans cells in normal human skin

SCOPUS: ar.jinfo:eu-repo/semantics/publishe