Diagnostic moléculaire des aspergilloses invasives (mise en place et évaluation d une méthode de PCR en temps réel au CHU de Grenoble)

Les aspergilloses invasives (AI) sont des infections fongiques invasives touchant des patients immunodéprimés. Le diagnostic, dont la précocité permet de limiter la mortalité de la pathologie, est souvent difficile en raison d une clinique peu spécifique et de l absence de test diagnostique performant. Le travail présenté a pour but de mettre au point et d évaluer un nouvel outil diagnostique, la PCR en temps réel spécifique d Aspergillus fumigatus sur sérum, afin d améliorer le diagnostic des AI. L évaluation a été réalisée par une étude rétrospective sur 31 patients (106 sérums) et une étude prospective sur 60 patients (373 sérums) suivis en hématologie clinique. Les performances diagnostiques pour les AI certaines ou probables (sensibilité de 79% et spécificité de 80%) sont supérieures à celles rencontrées avec le galactomannane (GM). La combinaison de ces deux marqueurs permet des confirmations de diagnostics où le GM peut parfois être mis en doute en raison de nombreux faux positifs : un résultat GM+/PCR+ présente une excellente valeur prédictive positive de 94%. Par ailleurs, dans des cas de négativation rapide du GM lors d un traitement antifongique, la PCR peut confirmer le diagnostic d AI. La mise en place de cette PCR sur sérum au CHU de Grenoble permet d améliorer le diagnostic biologique des AI en ciblant un marqueur différent de ceux déjà disponibles. Une mise au point et une évaluation de la technique doit être réalisée sur des milieux tels que les prélèvements respiratoires et le liquide céphalorachidien dans lesquels elle pourrait également pouvoir améliorer le diagnostic des AI.GRENOBLE1-BU Médecine pharm. (385162101) / SudocSudocFranceF

Rôle des gènes RIM et VPS dans la signalisation du pH, la virulence<br />et la résistance aux antifongiques chez la levure<br />Candida albicans

Ambient pH signaling involves a cascade of conserved Rim or Pal products in ascomycetous yeasts orfilamentous fungi, respectively. Recent evidences in the fungi Aspergillus nidulans, Saccharomyces cerevisiae,Yarrowia lipolytica, and Candida albicans suggested that components of endosomal sorting complexes requiredfor transport (ESCRT) involved in endocytic trafficking were needed for signal transduction along the Rimpathway. In this study, we confirm these findings with C. albicans and show that Vps28p (ESCRT-I) andVps32p/Snf7p (ESCRT-III) are required for the transcriptional regulation of known targets of the Rimpathway, such as the PHR1 and PHR2 genes encoding cell surface proteins, which are expressed at alkaline andacidic pH, respectively. We additionally show that deletion of these two VPS genes, particularly VPS32, has amore drastic effect than a RIM101 deletion on growth at alkaline pH and that this effect is only partiallysuppressed by expression of a constitutively active form of Rim101p. Finally, in an in vivo mouse model, bothvps null mutants were significantly less virulent than a rim101 mutant, suggesting that VPS28 and VPS32 geneproducts affect virulence both through Rim-dependent and Rim-independent pathways.Vps28p and Vps32p act in both the endocytic and the pH signaling pathways in yeasts and are required forCandida albicans virulence. Here, we show that deletions of VPS28 and VPS32 increase the susceptibility of C.albicans to cell wall disruption agents, echinocandin and azole antifungal agents.RésuméCandida albicans est le premier pathogène fongique de l'homme. Cette levure, habituellementcommensale, peut être à l'origine d'infections profondes mettant en jeu le pronosticvital. L'incidence des candidoses profondes ne cesse d'augmenter parallèlement àl'augmentation du nombre de patients à risque. La virulence de C. albicans s'explique par sacapacité à coloniser puis envahir de nombreux tissus de l'organisme qui constituent autant demicroenvironnements différents. Les réponses adaptatives de la cellule aux modifications environnementalessont déterminantes pour sa survie et conditionnent sa virulence. La voied'endocytose assure la dégradation ou le recyclage des protéines membranaires et joue un rôleimportant dans la régulation des récepteurs. Elle est également impliquée dans l'activation dela voie de signalisation du pH : la voie Rim.Au début de ce travail, nous avons montré que la voie d'endocytose jouait un rôle majeurdans la réponse au pH, la morphogenèse et la virulence de C. albicans, de façon à la foisdépendante et indépendante de la voie Rim. Nous avons montré que les délétions de deuxgènes de la voie d'endocytose, VPS28 et VPS32, produisent non seulement les mêmes effetsque les délétions des gènes de la voie Rim, mais les aggravent.Nous avons également mis en évidence le rôle de la voie Rim et des protéines Vpsdans la structure de la paroi et la résistance aux antifongiques azolés et aux échinocandines.Là encore, la voie d'endocytose semble impliquée par son action spécifique dans la voie Rimmais aussi par d'autres mécanismes indépendants de la voie Rim.Enfin, nous avons caractérisé les mutants rim9 et rim21 et montré que les protéinesRim9p et Rim21p sont toutes les deux indispensables à l'activation de la voie Rim chez C. albicans.Ce résultat confirme que le mode d'activation de la voie Rim chez C. albicans estproche de celui décrit chez S. cerevisiae et diffère sensiblement de celui d'Aspergillus nidulansou de Yarrowia lipolytica.Nous avons montré que l'inhibition de la voie d'endocytose induit chez C. albicansune réduction majeure de la virulence associée à une augmentation de la sensibilité aux antifongiquesazolés et aux échinocandines. En permettant la potentialisation de l'efficacité desmolécules existantes cette voie pourrait constituer une cible intéressante pour le développementde nouveaux traitements antifongiques

Inhibition de la corrosion des armatures métalliques dans les maçonneries anciennes

STRASBOURG-Sc. et Techniques (674822102) / SudocSudocFranceF

Intérêt des différents prélèvements respiratoires pour le diagnostic mycologique de l aspergillose invasive

CHATENAY M.-PARIS 11-BU Pharma. (920192101) / SudocSudocFranceF

Rôle des gènes RIM et VPS dans la signalisation du pH, la virulence et la résistance aux antifongiques chez Candida albicans

PARIS-AgroParisTech Centre Paris (751052302) / SudocSudocFranceF

Caractérisation par rayons X et mesure de flux lumineux rétrodiffusé de surfaces oxydées

L’étude consiste en la caractérisation de la propreté de surfaces en terme d’oxydation. Le terme propreté désigne le taux d’oxydes présent en surface provenant de l’opération de laminage à chaud. Les échantillons analysés sont quatre plaquettes d’acier inoxydable de type X5CrNi 18-10/1.4301 (AISI 304). La première plaquette est totalement recouverte d’oxydes. Les trois autres ont été grenaillées de façon à obtenir un taux de propreté conforme aux indices SA 2 pour la première, SA 2,5 pour la seconde et SA 3 pour la troisième. Ces indices sot définis dans la norme [1] et expriment une propreté croissante visible à l’oeil nu.L’utilisation de la diffraction de rayons X permet de révéler la nature des différents oxydes présents à la surface de chaque échantillon ainsi que leur concentration relative. D’autre part l’étude théorique du phénomène de rétrodiffusion de la lumière permet de postuler sur la corrélation entre le lobe de rétrodiffusion de lumière des échantillons avec leur état de propreté (en terme d’oxydation) ainsi que leur niveau relatif de rugosité. Ensuite, la mise en oeuvre d’un banc de mesure de flux lumineux rétrodiffusé permet de corréler les mesures par diffraction de rayons X et la théorie sur la rétrodiffusion de la lumière

Biotinylated Oligo-α-(1 → 4)- d -galactosamines and Their N-Acetylated Derivatives: α-Stereoselective Synthesis and Immunology Application

International audienceUsing 3-O-benzoyl-4,6-O-di-tert-butylsilylidene-2-azido-2-deoxy-selenogalactoside, biotinylated oligo-α-(1 → 4)-d-galactosamines comprising from two to six GalN units were prepared for the first time together with their N-acetylated derivatives. The combination of blocking groups used herein provided stereocontrol for the α-stereospecific glycosylation, to show also high efficiency of phenyl 2-azido-2-deoxy-selenogalactosides as glycosyl donors. The obtained glycoconjugates are related to fragments of exopolysaccharide galactosaminogalactan (GG) found in Aspergillus fumigatus, which is the most important airborne human fungal pathogen in industrialized countries. The synthesized glycoconjugates were arrayed on streptavidin-coated plates and used to investigate the GG epitopes recognized by mouse monoclonal antibodies against GG and by human antibodies in the sera of patients with aspergillosis. The obtained data showed that the oligo-α-(1 → 4)-d-galactosamines and their N-acetylated derivatives allowed the first precise analysis of the specificity of the antibody responses to this extremely complex fungal polysaccharid