Efeito do meio de congelação sobre as características morfofuncionais do sêmen canino

Com o objetivo de se avaliar dois meios diluidores - Tris/Glicerol e MP50 - para a congelação do sêmen de cães, foram utilizados ejaculados de 10 cães adultos, colhidos por meio de manipulação digital. As características morfofuncionais foram analisadas no sêmen in natura (T1), refrigerado (T2) e descongelado (T3). As amostras foram avaliadas para: motilidade e vigor espermático, teste hiposmótico, integridade de membrana espermática, morfologia espermática e análise ultra-estrutural, além da mensuração do pH. Após a diluição com os diferentes meios, o sêmen foi envasado em palhetas francesas de 0,5mL, contendo 40 x 106 espermatozóides móveis/palheta, e mantidas por 60 minutos à 5ºC (T2); logo após, foram transferidos para o vapor de nitrogênio durante 20 minutos, e por fim, mergulhadas em nitrogênio. O armazenamento das palhetas foi em botijão criogênico. As palhetas foram descongeladas a 70ºC por 8 segundos. A análise de variância mostrou influência do efeito animal nas variáveis analisadas, com exceção da motilidade espermática e integridade de membrana espermática. O teste hiposmótico, a integridade de membrana espermática e o pH, nas amostras refrigeradas (T2), apresentaram diferença estatística significativa (p<0,05) entre os meios, com superioridade do MP50. Nas análises pós-descongelação (T3), não foram observadas diferenças significativas entre as variáveis estudadas para os dois meios. A análise ultra-estrutural, mostrou edema de membrana plasmática e acrossomal, nas diferentes etapas do processo de congelação. Em conclusão, considerando-se as características morfofuncionais do sêmen canino pós-descongelação, os meios diluidores demonstraram igualdade.The objective of this study was to verify the efficiency of two different extenders for freezing dog semen: Tris/Glycerol and MP50. Ten ejaculates from different adult dogs were collected by digital manipulation. Seminal characteristics were evaluated in three different moments, fresh (T1), cooled (T2) and thawed (T3) semen for sperm motility and vigor, hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity, sperm morphology, ultrastructural analysis and seminal pH. The samples were divided into two equal parts and each part was mixed with one extender type. After mixing, samples were packaged in 0,5mL French straws with 40 x 106 spermatozoa/straw. Semen samples were kept at 50C for 60 minutes (T2); then frozen in static vapor of nitrogen for the following 20 minutes and immersed in liquid nitrogen until being thawed in 700 C water for 8 seconds (T3). By analysis of variance, it would be possible to verify the animal effect on almost all variables observed in this study, except for sperm motility and membrane integrity. For cooled semen (T2), MP50 were significantly better for hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity and pH (p<0,05) than Tris/Glycerol. For thawed semen (T3), there was no significant difference between extenders. By ultrastructural analysis, it was possible to verify swelling plasma and acrosomal sperm membranes in the different stages of freezing process. In conclusion, the extenders showed the same results as to morphofunctional characteristics the semen canine thawed

Incorporación de vitamina C y catalasa en la refrigeración de semen de perros jóvenes y viejos

The use of cooled semen is anoption for clinical practice, since it’s a practical and inexpensive method, which allows a god preservation of fertility. However, spermatozoa stored under refrigeration conditions become aged, losing fertilizing capacity. The addition of antioxidant molecules tocooling extenders could reduce oxidative stress during storage improving semen quality. The goal of this study was to analyze the effects of the addition of catalaseand vitamin C over the quality of refrigerated semen. Semen from five dogs aging between 2 to 5 years and five with more than 7 years was used. After collection the ejaculates were divided into three samples, one diluted in the cooling extender (control without antioxidant), another diluted in the extender with vitaminC, and the last with extender with catalase. Before and after cooling all samples were analyzed by Computer Assisted Semen Analysis (CASA), sperm morphology and analysis of the plasmatic and acrosomal membrane integrity. In this study the only variable that has benefited from the action of antioxidants was the acrosome integrity in cooled samples obtained from aged animals. In addition, in this same group the concentration of catalase used seems to have had a deleterious effect on sperm motility parameters. These results provide additional evidence of individual variations in response to cooling suggesting the need for a larger number of studies involving experimental animals of different ages.El interés en las técnicas de preservación de los espermatozoides y de la inseminación artificial ha crecido mucho en todo el mundo. La utilización del semen refrigerado es una opción para el uso en la rutina clínica, ya que es un método práctico, más barato, que preserva mejorla fertilidad y con el cual la inseminación puede ser hecha por la vía transvaginal. La principal desventaja del uso del semen refrigerado es el corto período de supervivencia de los espermatozoides, siendo necesaria la utilización de la muestra en aproximadamente 4,9 días después de la colecta. La incorporación de moléculas antioxidantes en el diluyente de semen refrigerado podría reducir el impacto del estrés oxidativo durante el proceso de almacenamiento espermático y así mejorar la calidad del semen, propiciando un mayor tiempo de supervivencia de los espermatozoides y la disminución de la dosis de inseminación. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la incorporación de la catalasa y de la vitamina C en el diluyente sobre la calidad del semen refrigerado de perros y comparar estos antioxidantes, enzimáticos o no (catalasa x vitamina C), en la calidad de semen refrigerado de perros. Para esto fueron utilizados 10 perros, cinco de ellos con edad entre 2 y 5 años (jóvenes) y cinco con más de siete años (mayores). El semen fue colectado por manipulación digital del pene, en embudo de plástico, acoplado en un tubo plástico graduado. El semen de todos los animales fue analizado utilizando la prueba hipoosmótica, marcadores fluorescentes, sistema computadorizado CASA, análisis de la morfología espermática e integridad acrosomal. Después, el semen fue dividido en tres muestras con el fin de ser sometidas a refrigeración a 5°C por 96 horas en los medios de refrigeración control (sin incorporación de antioxidante), con incorporación de vitamina C y con adición de catalasa. Después de este período de refrigeración los análisis fueron repetidos en todas las muestras. Los resultados fueron evaluados por el análisis de variancia y las diferencias fueron verificadas por la prueba de Tukey, siendo el nivel de significancia adoptado de 5%. Los resultados obtenidos demuestran que la única variable que fue beneficiada por la acción de los antioxidantes fue la integridad acrosómica. Se concluye que los oxidantes vitamina C y catalasa no actuaron positivamente en el proceso de refrigeración de semen de perros jóvenes y mayores.O uso de sêmen refrigerado é uma boa opção na rotina clínica de inseminação, sendo um método prático e barato que permite melhor preservação da fertilidade quando comparado ao sêmen congelado. Contudo, o período de sobrevivência dos espermatozoides é curto. A adição de moléculas antioxidantes ao meio de diluição pode reduzir o estresse oxidativo durante o armazenamento e assim melhorar sua qualidade. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da adição da catalase e vitamina C ao diluente sobre a qualidade do sêmen canino refrigerado. Para isso foram utilizados cinco cães com idade variando de 2 a 5 anos, e cinco com mais de sete anos. O sêmen foi colhido e dividido em três amostras para a refrigeração nos meios controle (sem adição de antioxidante), com adição de vitamina C e com adição de catalase. Antes e após a refrigeração as amostras foram analisadas através do sistema computadorizado CASA, da análise da morfologia espermática e da integridade das membranas plasmática e acrossomal. No presente trabalho a única variável que se beneficiou da ação dos antioxidantes foi à integridade do acrossomo nas amostras de sêmen resfriado obtidas de animais idosos. Além disso, neste mesmo grupo a concentração de catalase utilizada parece ter tido um efeito deletério sobre parâmetros da motilidade espermática. Estes resultados reforçam a evidência de variações individuais na resposta a refrigeração espermática e indicam a necessidade de um maior número de estudos envolvendo animais com idades diferentes