In vitro effects of glyphosate and Roundup on Sertoli cell physiology

Roundup (R), a formulation that contains glyphosate (G) as the active ingredient, is a commonly used nonselective herbicide that has been proposed to affect male fertility. It is well known that an adequate Sertoli cell function is essential to maintain germ cell development. The aim of the present study was to analyze whether G and R are able to affect Sertoli cell functions, such as energy metabolism and blood-testis barrier (BTB) integrity. Sertoli cell cultures from 20-day-old rats were exposed to 10 and 100 ppm of G or R, doses which do not decrease cell viability. Neither G nor R caused impairment in lactate production or fatty acid oxidation. G and R decreased Transepithelial Electrical Resistance, which indicates the establishment of a Sertoli cell junction barrier. However, neither G nor R modified the expression of claudin11, ZO1 and occludin, proteins that constitute the BTB. Analysis of cellular distribution of claudin11 by immunofluorescence showed that G and R induced a delocalization of the signal from membrane to the cytoplasm. The results suggest that G and R could alter an important function of Sertoli cell such as BTB integrity and thus they could compromise the normal development of spermatogenesis.Fil: Gorga, Agostina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Rindone, Gustavo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Centola, Cecilia Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Sobarzo, Cristian Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Pellizzari, Eliana Herminia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Camberos, Maria del Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Cigorraga, Selva Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Riera, Maria Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Galardo, Maria Noel Lujan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Meroni, Silvina Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentin

Low Doses of Glyphosate/Roundup Alter Blood–Testis Barrier Integrity in Juvenile Rats

It has been postulated that glyphosate (G) or its commercial formulation Roundup (R) might lead to male fertility impairment. In this study, we investigated the possible effects of G or R treatment of juvenile male rats on blood-testis barrier function and on adult male sperm production. Pups were randomly assigned to the following groups: control group (C), receiving water; G2 and G50 groups, receiving 2 and 50 mg/kg/day G respectively; and R2 and R50 groups receiving 2 and 50 mg/kg/day R respectively. Treatments were performed orally from postnatal day (PND) 14 to 30, period of life that is essential to complete a functional blood-testis barrier. Evaluation was done on PND 31. No differences in body and testis weight were observed between groups. Testis histological analysis showed disorganized seminiferous epithelium, with apparent low cellular adhesion in treated animals. Blood-testis barrier permeability to a biotin tracer was examined. A significant increase in permeable tubules was observed in treated groups. To evaluate possible mechanisms that could explain the effects on blood-testis barrier permeability, intratesticular testosterone levels, androgen receptor expression, thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and the expression of intercellular junction proteins (claudin11, occludin, ZO-1, connexin43, 46, and 50 which are components of the blood-testis barrier) were examined. No modifications in the above-mentioned parameters were detected. To evaluate whether juvenile exposure to G and R could have consequences during adulthood, a set of animals of the R50 group was allowed to grow up until PND 90. Histological analysis showed that control and R50 groups had normal cellular associations and complete spermatogenesis. Also, blood-testis barrier function was recovered and testicular weight, daily sperm production, and epididymal sperm motility and morphology did not seem to be modified by juvenile treatment. In conclusion, the results presented herein show that continuous exposure to low doses of G or R alters blood-testis barrier permeability in juvenile rats. However, considering that adult animals treated during the juvenile stage showed no differences in daily sperm production compared with control animals, it is feasible to think that blood-testis barrier impairment is a reversible phenomenon. More studies are needed to determine possible damage in the reproductive function of human juvenile populations exposed to low doses of G or R.Fil: Gorga, Agostina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Rindone, Gustavo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Centola, Cecilia Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Sobarzo, Cristian Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Pellizzari, Eliana Herminia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Camberos, Maria del Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Marin Briggiler, Clara Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Cohen, Debora Juana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Riera, Maria Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Galardo, Maria Noel Lujan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Meroni, Silvina Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentin

I-Insulin transfer to mitochondria

The aim of this study was to determine if insulin is transferred to mitoplasts by insulin-degrading enzyme (IDE).Hepatic mitochondria were isolated and controlled by electron microscopy. IDE was obtained from rats muscle by successive chromatography steps. Insulin accumulation in mitoplasts and outer membrane + intermembrane space (OM + IMS) was studied with (125)I-insulin. Mitochondrial insulin accumulation and degradation was assayed with Sephadex G50 chromatography, insulin antibody and 5 % TCA. Mitoplasts and OM + IMS were isolated with digitonin. Insulin accumulation was studied at 25 °C at different times, without or with IDE, Bacitracin, 2,4-dinitrophenol, apyrase or sodium succinate + adenosine diphosphate. Insulin accumulation in mitoplasts and OM + IMS after mitochondrial cross-linking was studied with electrophoresis in SDS-PAGE, immunoblots of IDE, insulin or TIM23 (inner mitochondrial transporter) and autoradiography.The studies showed that addition of IDE increased insulin transfer from OM + IMS to mitoplasts, and the insulin accumulation in mitoplast was IDE dependent. Bacitracin and 2,4-dinitrophenol decreased this transfer. The [Insulin-IDE] complex and [Mitoplasts] was studied as a bimolecular reaction following a second order reaction. The constant "k" (liter.mol⁻¹ s⁻¹) showed that IDE increased and Bacitracin or 2,4-dinitrophenol decreased the velocity of insulin transfer. SDS-PAGE and immunoblots studies showed bands and radioactivity coincident with IDE, insulin and TIM23. Non degraded insulin was demonstrated in immunoblot after IDE immunoprecipitation from mitoplasts. Confocal studies showed mitochondrial colocalization of IDE and insulin.The results showed that insulin at 25 °C were transferred from OM + IMS to mitoplasts by IDE or that the enzyme facilitates this transfer, and they reach the matrix together.Fil: Camberos, Maria del Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Cao, Gabriel Fernando. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Pedro Elizalde" (ex Casa Cuna); Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Cardiológicas (i); ArgentinaFil: Wanderley, María I.. Universidade Federal de Pernambuco; BrasilFil: Udrisar, Daniel P.. Universidade Federal de Pernambuco; BrasilFil: Cresto, Juan Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; Argentin

FSH and bFGF regulate the expression of genes involved in Sertoli cell energetic metabolism

The purpose of this study was to investigate if FSH and bFGF regulate fatty acid (FA) metabolism and mitochondrial biogenesis in Sertoli cells (SC). SC cultures obtained from 20-day-old rats were incubated with 100 ng/ml FSH or 30 ng/ml bFGF for 6, 12, 24 and 48 h. The expression of genes involved in transport and metabolism of FA such as: fatty acid transporter CD36 (FAT/CD36), carnitine-palmitoyltransferase 1(CPT1),long- and medium-chain 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenases (LCAD, MCAD), and of genes involved in mitochondrial biogenesis such as: nuclear respiratory factors 1 and 2 (NRF1, NRF2) and transcription factor A (Tfam), was analyzed. FSH stimulated FAT/CD36, CPT1, MCAD, NRF1, NRF2 and Tfam mRNA levels while bFGF only stimulated CPT1 expression. A possible participation of PPARb/d activation in the regulation of gene expression and lactate production was then evaluated. SC cultures were incubated with FSH or bFGF in the presence of the PPARb/d antagonist GSK3787 (GSK; 20 lM). bFGF stimulation of CPT1 expression and lactate production were inhibited by GSK. On the other hand, FSH effects were not inhibited by GSK indicating that FSH regulates the expression of genes involved in FA transport and metabolism and in mitochondrial biogenesis, independently of PPARb/d activation. FA oxidation and mitochondrial biogenesis as well as lactate production are essential for the energetic metabolism of the seminiferous tubule. The fact that these processes are regulated by hormones in a different way reflects the multifarious regulation of molecular mechanisms involved in Sertoli cell function.Fil: Regueira, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Riera, Maria Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Galardo, Maria Noel Lujan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Camberos, Maria del Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Pellizzari, Eliana Herminia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Cigorraga, Selva Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Meroni, Silvina Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; Argentin

II - Insulin processing in mitochondria

Our objective was to know how insulin is processing in mitochondria; if IDE is the only participant in mitochondrial insulin degradation and the role of insulin degradation on IDE accumulation in mitoplasts. Mitochondria and its fractions were isolated as described by Greenwalt. IDE was purified and detected in immunoblot with specific antibodies. High insulin degradation was obtained through addition to rat’s diet of 25�g/rat of apple and 10�g/rat of hard-boiled eggs, 3�days a week. Mitochondrial insulin degradation was assayed with 5�% TCA, insulin antibody or Sephadex G50 chromatography. Degradation was also assayed 60�min at 37��C in mitochondrial fractions (IMS and Mx) with diet or not and without IDE. Degradation in fractions precipitated with ammonium sulfates (60–80�%) were studied after mitochondrial insulin incubation (1�ng. insulin during 15�min, at 30��C) or with addition of 2.5�mM ATP. Supplementary diet increased insulin degradation. High insulin did not increase mitoplasts accumulation and did not decrease mitochondrial degradation. High insulin and inhibition of degradation evidence insulin competition for a putative transport system. Mitochondrial incubation with insulin increased IDE in matrix as observed in immunoblot. ATP decreased degradation in Mx and increased it in IMS. Chromatography of IMS demonstrated an ATP-dependent protease that degraded insulin, similar to described by Sitte et al. Mitochondria participate in insulin degradation and the diet increased it. High insulin did not accomplish mitochondrial decrease of degradation or its accumulation in mitoplasts. Mitochondrial incubation with insulin increased IDE in matrix. ATP suggested being a regulator of mitochondrial insulin degradation.Fil: Camberos, Maria del Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas ; ArgentinaFil: Perez, Adriana A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Ecología, Genética y Evolución; ArgentinaFil: Passicot, Gisel Anabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas ; ArgentinaFil: Martucci, Lucia Camila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas ; ArgentinaFil: Wanderley, Maria. Universidade Federal de Pernambuco; BrasilFil: Udrisar, Daniel P.. Universidade Federal de Pernambuco; BrasilFil: Cresto, Juan Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas ; Argentin

Changes in hepatic lipogenic and oxidative enzymes and glucose homeostasis induced by an acetyl-L-carnitine and nicotinamide treatment in dyslipidaemic insulin-resistant rats

Normal rats fed a sucrose-rich diet (SRD) develop dyslipidaemia and insulin resistance. The present study examined whether administration of the mitochondrial nutrients nicotinamide and acetyl-l-carnitine reversed or improved these metabolic abnormalities. Male Wistar rats were fed an SRD for 90 days. Half the rats then received daily injections of nicotinamide (25 mg/kg, i.p.) and acetyl- l-carnitine (50 mg/kg, i.p.) for a further 90 days. The remaining rats in the SRD-fed group and those in a normal chow-fed control group were injected with an equal volume of saline solution for the same period. The following parameters were determined in all groups: (i) liver activity of fatty acid synthase (FAS), acetyl-CoA carboxylase (ACC) and carnitine-palmitoyl transferase-1 (CPT-1); (ii) hepatic and skeletal muscle triacylglycerol content, plasma glucose, insulin, free fatty acid (FFA) and triacylglycerol levels and pancreatic insulin content; and (iii) glucose tolerance. Administration of nicotinamide and acetyl-l-carnitine to the SRD-fed rats reduced dyslipidaemia, liver steatosis, muscle triacylglycerol content and hepatic FAS and ACC activities and increased CPT-1 activity. In addition nicotinamide and acetyl-l-carnitine improved the glucose disappearance rate (Kg), normalized plasma glucose levels and moderately increased insulinaemia without altering pancreatic insulin content. Finally, nicotinamide and acetyl-l-carnitine administration reduced bodyweight gain and visceral adiposity. The results of the present study suggest that altering key hepatic lipogenic and fatty acid oxidative enzymatic activity could improve dyslipidaemia, liver steatosis and visceral adiposity. Indeed, administration of nicotinamide and acetyl-l-carnitine improved glucose intolerance and normalized plasma glucose levels.Fil: Ferreira, Maria R.. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Camberos, Maria del Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Selencsig, Dante. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Martucci, Lucia Camila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; ArgentinaFil: Chicco, Adriana Graciela. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Santa Fe; ArgentinaFil: Lombardo, Yolanda B.. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Cresto, Juan Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas; Argentin

Effect of resveratrol on Sertoli cell proliferation

Resveratrol (RSV), a polyphenolic compound largely found in red grape skin, has been used as a nutritional supplement as it exhibits beneficial health effects, such as anticancer, cardioprotective, antiaging, and anti-inflammatory. Particularly, it has been shown that it participates in the mechanisms involved in cell proliferation. Sirtuin 1 (SIRT1) is considered a well-known RSV effector. Noteworthy, Sirt1-knockout animals are infertile. The aim of this study was, first, to determine whether RSV has any effect on Sertoli cell proliferation and, second, whether SIRT1, a putative target of RSV, is present in immature Sertoli cells. Sertoli cell cultures obtained from 8-day-old rats, which actively proliferate, were treated with RSV (10 and 50 µM) under basal and follicle-stimulating hormone (FSH)-stimulated conditions. Bromodeoxyuridine (BrdU) incorporation and the expression of cyclins D1, D2, D3, E1, and E2 and the Cip/Kip cell cycle inhibitors p21Cip and p27Kip were analyzed. RSV decreased BrdU incorporation and cyclins D1, D2, E1, and E2 expression and increased p21Cip and p27Kip messenger RNA (mRNA) levels. RSV also decreased FSH-stimulated BrdU incorporation and cyclins D1 and D2 mRNA levels. The effect of RSV on cMYC was also analyzed. RSV treatment did not modify basal and FSH-stimulated cMyc expression; however, it inhibited basal and FSH-stimulated cMYC transcriptional activity, suggesting a role of cMYC in RSV effects. Additionally, Sirt1 was detected in immature Sertoli cells. Altogether, these results suggest that RSV possibly, by activating SIRT1 and regulating cMYC transcriptional activity, participates in the regulation of immature Sertoli cell proliferation.Fil: Gorga, Agostina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Rindone, Gustavo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Regueira, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Pellizzari, Eliana Herminia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Camberos, Maria del Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Cigorraga, Selva Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Riera, Maria Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Galardo, Maria Noel Lujan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Meroni, Silvina Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentin

PPARγ activation regulates lipid droplet formation and lactate production in rat Sertoli cells

Sertoli cells provide the structural and nutritional support for germ cell development; they actively metabolize glucose and convert it to lactate, which is an important source of energy for germ cells. Furthermore, Sertoli cells can oxidize fatty acids, a metabolic process that is assumed to fulfill their own energy requirements. Fatty acids are stored as triacylglycerides within lipid droplets. The regulation of fatty acid storage in conjunction with the regulation of lactate production may thus be relevant to seminiferous tubule physiology. Our aim is to evaluate a possible means of regulation by the PPARγ activation of lipid droplet formation and lactate production. Sertoli cell cultures obtained from 20-day-old rats were incubated with Rosiglitazone (10 μM), a PPARγ activator, for various periods of time (6, 12, 24 and 48 h). Increased triacylglycerides levels and lipid droplet content were observed, accompanied by a rise in the expression of genes for proteins involved in fatty acid storage, such as the fatty acid transporter Cd36, glycerol-3-phosphate-acyltransferases 1 and 3, diacylglycerol acyltransferase 1 and perilipins 1, 2 and 3, all proteins that participate in lipid droplet formation and stabilization. However, PPARγ activation increased lactate production, accompanied by an augmentation in glucose uptake and Glut2 expression. These results taken together suggest that PPARγ activation in Sertoli cells participates in the regulation of lipid storage and lactate production thereby ensuring simultaneously the energetic metabolism for the Sertoli and germ cells.Fil: Gorga, Agostina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Rindone, Gustavo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Regueira, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Pellizzari, Eliana Herminia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Camberos, Maria del Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Cigorraga, Selva Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Riera, Maria Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Galardo, Maria Noel Lujan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Meroni, Silvina Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentin

Sertoli cell adaptation to glucose deprivation: Potential role of AMPK in the regulation of lipid metabolism

Sertoli cells (SCs) provide an adequate environment for germ cell development. SCs possess unique features that meet germ cells' metabolic demands: they produce lactate from glucose, which is delivered as energy substrate to germ cells. SCs store fatty acids (FAs) as triacylglycerols (TAGs) in lipid droplets (LDs) and can oxidize FAs to sustain their own energetic demands. They also produce ketone bodies from FAs. It has been shown that exposure of SCs to metabolic stresses, such as glucose deprivation, triggers specific adaptive responses that sustain cell survival and preserve lactate supply to germ cells. The aim of the present study was to investigate whether there are modifications in rat SCs lipid metabolism, including LD content, FA oxidation, and ketone bodies production, as part of their adaptive response to glucose deprivation. The present study was performed in 20-day-old rat SCs cultures. We determined LD content by Oil Red O staining, FA oxidation by measuring the release of 3H2O from [3H] palmitate, TAGs and 3-hydroxybutyrate levels by spectrophotometric methods, and mRNA levels by RT-qPCR. Results show that the absence of glucose in SC culture medium entails: (1) a decrease in LD content and TAGs levels that is accompanied by decreased perilipin 1 mRNA levels, (2) an increase in FA oxidation that is in part mediated by AMP kinase (AMPK) activation and (3) a decrease in 3-hydroxybutyrate production. Additionally, we studied whether sestrins (SESN1, 2 and 3), proteins involved in the cellular response to stress, are regulated in glucose deprivation conditions. We show that there is an increase in SESN2 mRNA levels in deprived conditions. In conclusion, glucose deprivation affects SC lipid metabolism promoting FA mobilization from LDs to be used as energy source.Fil: Rindone, Gustavo Marcelo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Dasso, Marina Ercilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: Centola, Cecilia Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: Pellizzari, Eliana Herminia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: Camberos, Maria del Carmen. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Toneatto, Judith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Galardo, Maria Noel Lujan. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Meroni, Silvina Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: Riera, Maria Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentin

Neonatal exposure to metformin: effects on rat Sertoli cell proliferation

Sertoli cell (SC) proliferation, a factor defining SC population size, occurs during a restricted period of time. In rats, fetal and postnatal periods up to 15 days of age constitute the time period for SC mitosis. Metformin (MET), a first line anti-hyperglycemic agent, has started to be used in pediatric population at ages when SCs are still proliferating. In addition to its strong anti-diabetic properties, numerous studies have demonstrated that MET has anti-proliferative activity. Additionally, we have previously demonstrated in SC cultures obtained from 8-day old rats that MET decreases basal and FSH-stimulated SC proliferation. The aim of this study was to analyze the in vivo relevance of MET treatment on SC proliferation. At postnatal day 3 (Pnd3), rat pups were randomly assigned to the following groups: MET (receiving daily 200 mg/kg MET i.p., day 3-7) and control group (receiving daily sterile saline solution i.p.). At Pnd8, a set of animals were injected with BrdU (50 mg/kg i.p.) before sacrifice to evaluate cell proliferation. In another set of animals, testes were utilized to perform SC isolation for gene expression analysis. Our results showed that MET group exhibited a significant decrease in BrdU incorporation in SC compared to controls (n=6 p<0.05). In addition, MET group showed a reduction in Cyclin D1 and E2 and an increase in p21Cip mRNA levels in isolated SC (n=6 p<0.05). Considering that a single SC can support a limited number of germ cells, we studied the impact of neonatal treatment with MET on sperm parameters in adult animals. Epididymal sperm parameters were evaluated at Pnd90. No differences in sperm motility, morphology or number between groups were observed. Thus, our results showed that MET exerted a mild but significant suppressive effect on Sertoli cell proliferation with no further impact on spermatogenesis and epididymal maturation. (PICT2015-0228).Fil: Rindone, Gustavo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Gorga, Agostina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Pellizzari, Eliana Herminia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Camberos, Maria del Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Galardo, Maria Noel Lujan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Da Ros, Vanina Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Buffone, Mariano Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Meroni, Silvina Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Riera, Maria Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaLXIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación ClínicaMar del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigación Clínic