Construcción de fagos filamentosos transportadores de un sistema Crispr-Cas9 contra el virus del Herpes simplex tipo 1.

La Organización Mundial de la Salud estima que dos terceras partes de la población mundial menor de 50 años está infectada por el virus del Herpes simplex tipo 1 (HSV1). El HSV-1 es capaz de infectar las neuronas de los mamíferos, en la cual ingresa en estado de latencia de por vida o pueden reactivarse ante eventos de estrés, lo que conlleva a la replicación del material genético viral y la consecuente producción de nuevos virus infectivos. Los antivirales actualmente disponibles no son capaces de eliminar los herpesvirus latentes y cepas resistentes a las drogas de primera elección. Debido a ello es necesario buscar nuevos fármacos o estrategias capaces de eliminar la latencia y la producción de nuevos virus en las células infectadas. Una de las estrategias actualmente utilizadas es la terapia génica, basada en el sistema CRISPRCas9. Sin embargo, actualmente los vectores virales y no virales utilizados para la administración de los componentes del sistema presentan ciertos retos. Ante esta situación, los vectores virales como los bacteriófagos filamentosos, ofrecen ventajas: no se integran en el genoma de las células eucariotas, son estables, seguros, se los puede modificar genéticamente, poseen mayor capacidad de empaquetamiento de genoma y son fáciles de producir. En este trabajo se construyeron bacteriófagos filamentosos recombinantes transportadores de un sistema CRISPR-Cas9 con gRNAs únicos y dobles, capaces de inhibir el ciclo viral del HSV-1. Los fagómidos desarrollados fueron evaluados mediante transfección e infección con HSV-1 de las células HEK293T, observándose que independientemente al número de gRNAs, el sistema CRISPR-Cas9 fue capaz de inhibir la producción de nuevos HSV-1. Los vectores derivados del fago M13 fueron capaces de empaquetar fagómidos de hasta 9290 pares de bases (pb) y un rendimiento de 1011 a 1013 VGC/mL.CONACYT - Consejo Nacional de Ciencia y TecnologíaPROCIENCI

Estandarización de la técnica de PCR-RFLP de la región ITS1, para la caracterización molecular de Leishmania (L) infantum, en muestras caninas

La leishmaniasis es una enfermedad producida por protozoarios parásitos del género Leishmania. Estos parásitos infectan a hospedadores mamíferos, entre los cuales los perros han sido implicados como reservorios del parásito. Este trabajo planteó estandarizar la técnica de la PCR-RFLP luego de la amplificación de la región ITS1 de Leishmania spp, como herramienta útil para la detección y caracterización molecular. Se utilizaron promastigotes de cultivo y muestras de biopsias procedentes de perros con leishmaniasis visceral previamente diagnosticados en el Centro Antirrábico Nacional. La región ITS1 del ADN genómico nuclear de Leishmania spp. fue amplificada utilizando los cebadores LITSR y L5,8S. La técnica ITS1-RFLP aplicada, permitió la detección de Leishmania (L) infantum en 10/10 aislados de parásitos mantenidos en medio NNN, en 10/18 muestras de bazo y 10/18 muestras de ganglio linfático poplíteo. Las condiciones óptimas de reacción fueron 0,2 mM de dNTPs, 0,1 pmol de cada cebador y 1U de Taq polimerasa. La sensibilidad de la PCR fue de 3 ng/μL en aislados de cultivo NNN y 60 ng/μL en muestras de biopsias, mientras que la especificidad fue de 100% para la detección de Leishmania sp. La enzima de restricción Hae III, determinó fragmentos de 184, 72 y 55 pb., que resultaron específicos para la especie Leishmania (L) infantum. El marcador utilizado resultó confiable para la detección y caracterización de Leishmania sp. en perros procedentes de zonas endémicas, lo cual podría ser útil para verificar las especies de parásitos circulantes entre los perros

Distribution, Abundance and Infection of Lutzomyia longipalpis, vector of Visceral Leishmaniasis in three Municipalities of the Department of Caaguazú, Paraguay.

Leishmaniasis is a zoonotic disease that has in common to be caused by protozoa of the genus Leishmania and transmitted by the action of hematophagous Diptera – Psychodidae (sandflies). Sandflies are vectors of several infectious and parasitic agents such as Phlebovirus, Bartonella bacilliformis and Leishmania spp. Females are the only insects capable of transmitting the known Leishmania species. It is considered a reemerging disease, and a growing problem of public health due to the increase in cases as a consequence of the greater exposure of people to vectors, as well as exposure to environmental risk factors, mass migrations, urbanization and deforestation. Therefore, this work aims to investigate the transmission conditions of Leishmania sp. and the conditioning risk factors in the urban and rural communities of Caaguazú.CONACYT - Consejo Nacional de Ciencias y TecnologíaPROCIENCI

Dispersion of Leishmania (Leishmania) infantum in central-southern Brazil : evidence from an integrative approach

Leishmania infantum is the zoonotic agent of visceral leishmaniasis (VL). The epidemiological cycle in Brazil has dispersed from the Northeast to other regions of the country. Hypotheses regarding possible entries of Leishmania (L.) infantum into the area of the triple border are presented and discussed. The State of Parana´ borders the states of São Paulo and Mato Grosso, which have experienced VL epidemics over the past 20 years. The study used genetic markers to understand the dispersion of Leishmania infantum throughout central-southern Brazil. Results show two possible agent inputs in the Parana´ state, one coming from Paraguay, the other from Santa Catarina state.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoFundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e ecnológico do Paran

Estudio de la variabilidad genética de aedes aegypti de dos zonas endémicas para dengue en Paraguay.

El objetivo del trabajo fue estudiar la variabilidad genética de las poblaciones de Aedes aegypti procedentes de los Departamentos Central y Cordillera del Paraguay.CONACYT - Consejo Nacional de Ciencias y TecnologíaPROCIENCI

Variabilidad genética de Aedes aegypti determinada mediante marcadores moleculares, en dos áreas endémicas para dengue en el Paraguay

Aedes aegypti es el principal vector del dengue en Paraguay, cuya composición genética poblacional puede ser afectada por los controles químicos y ambientales, por lo que es necesario evaluarlos con marcadores moleculares capaces de estimar la diversidad genética existente entre poblaciones naturales de mosquitos.CONACYT – Consejo Nacional de Ciencia y TecnologíaPROCIENCI

Variabilidad genética de Aedes aegypti determinada mediante marcadores moleculares, en dos áreas endémicas para dengue en el Paraguay.

El objetivo del trabajo fue comprender la historia evolutiva, la epidemiología de la enfermedad, diseño y mejoramiento de estrategias de control vectorial para áreas endémicas de arbovirosis.CONACYT - Consejo Nacional de Ciencias y TecnologíaPROCIENCI

Baja diferenciación genética detectada en dos poblaciones de Aedes aegypti circulantes en Paraguay

El objetivo del trabajo fue estudiar la variabilidad genética de las poblaciones de Aedes aegypti procedentes de los Departamentos Central y Cordillera del Paraguay.CONACYT - Consejo Nacional de Ciencias y TecnologíaPROCIENCI